結直腸炎合并關節病患者HLA-B27表達情況、VAS評分和ESR的相關性分析

李文清，鄧 飛，王福祖，余大蓮

(青海省中醫院檢驗科，青海西寧 810000)

結直腸炎可表述為結腸炎和直腸炎，它們是結腸、直腸內由各種因素引起的持續性消化系統疾病，癥狀包括腹部疼痛、腹瀉、便血或其他更嚴重的癥狀[1-3]。其中約30%患炎性腸病(克羅恩病或潰瘍性結腸炎)人群患有直腸炎，因而本文中合并探討[4]。上述疾病引發因素很多，比如自身免疫反應、免疫功能異常、感染、癌癥放射治療、抗菌藥物的使用、結直腸手術并發癥、不潔的飲食習慣和性行為等[2-3,5]。關節病包括各種骨關節疾病，如肩周炎、骨質增生、風濕性關節炎、類風濕性關節炎(RA)等，其中類風濕性關節炎也與自身免疫異常相關[6]。人白細胞抗原亞型B27(HLA-B27)作為人類主要組織相容性復合物的表達產物，在免疫系統中發揮作用，因而筆者猜測HLA-B27表達與上述疾病密切相關[7]。故本研究旨在驗證上述猜測并分析其與視覺模擬評分法(VAS)的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2019年1月本院診治的結腸炎和/或直腸炎患者，將符合標準的93例納入研究，作為觀察組，其中男女性比例為49∶44，年齡平均(46.71±15.88)歲，潰瘍性結腸炎38例，非特異性結腸炎(UC)17例，慢性直腸炎25例，克羅恩病13例；慢性滑膜炎10例，RA 42例，外周關節炎34例，骶髂關節炎7例。選取同期僅患腸炎和/或直腸炎患者50例作為對照組，年齡平均(45.41±15.60)歲，潰瘍性結腸炎18例，UC 12例，慢性直腸炎11例，克羅恩病9例。另外選取同期于本院就診健康人資料50例作為健康對照組，男女性比例為32∶28，年齡平均(42.45±16.73)歲。兩組一般資料差異具有可比性(P>0.05)。

1.2納入和排除標準 納入標準：有腹痛、腹瀉、便血等癥狀；符合結腸炎或直腸炎或克羅恩病診斷標準[8-10]，但克羅恩病需發生于結腸或直腸；伴有關節炎；符合相關疾病(如RA)診斷標準[11]；未進行相關治療或藥用停止1個月以上。排除標準：未滿18周歲；中斷參與研究者；克羅恩病發于回腸或胃腸道其他部分者；曾行膝關節置換術者；病例資料不完全；患其他臟器功能不全或嚴重疾病；曾患結直腸腫瘤者；患內分泌疾病；表述不清或精神障礙者。

1.3方法

1.3.1HLA-B27的檢測 于檢測日清晨(8:30前)抽取全部患者空腹肝素靜脈血5 mL置于抗凝管，其中一部分低溫離心后取上清，-20 ℃保存待測。另取500 μL血樣使用DNA抽提試劑盒抽提DNA，根據已經公布的HLA-B27的DNA序列設計引物，外送合成后以PCR加瓊脂糖凝膠電泳法檢測血樣中目的DNA的表達情況，引物和反應體系如下。引物F：5′-CAG TCT GTG CCT TGG CGT TGC-3′，引物R:5′-GGC TAC GTG GAC ACG CT-3′。Taq酶1.0 μL，DNA模板2.0 μL，引物各0.6 μL，dNTPs 1.6 μL，PCR Buffer 2.0 μL，dd H2O 12.2 μL。上述所用試劑和試劑盒分別購于博日和利德曼公司。

1.3.2VAS評分標準 依據受認可的VAS評分評定法，即將疼痛按0至10分進行分級，其中0分表示無痛，10分表示無法忍受的劇痛，其他分級依據上述標準表示不同疼痛等級。0～3分表示輕度疼痛，4～6分表示中度疼痛，大于7分表示重度疼痛。全部受試者均按此方法判斷疼痛感受。

1.3.3影像檢查 對全部患者患病關節進行影像檢查，暴露患處，利用X線檢查病變情況并記錄相關結果。利用Kellgren-Lawrence標準將患者患處損傷情況進行分級，其中1級關節間隙狹窄不明顯，邊緣可能存在骨贅；2級關節間隙狹窄不明顯，邊緣少年骨贅；3級關節間隙狹窄，中等量骨贅存在，邊緣少量硬化；4級關節間隙狹窄明顯，存在大量骨贅，邊緣硬化嚴重，關節存在形變。

1.3.4其他指標檢測 以紅細胞沉降率(ESR)、C反應蛋白(CRP)和血小板計數(PLT)表征患者關節病活動，ESR使用魏氏法檢測， PLT使用全自動血細胞儀(BC6800，Mindray公司)檢測，CRP使用酶聯免疫吸附法檢測其于血清中水平，檢測試劑盒購于利德曼公司。

1.4統計學處理 手工剔除無效信息(信息缺失比例>20%)后錄入Epidata建立數據庫，后導入SPSS22.0進行統計分析。病例一般特征采用描述性統計指標進行分析，采用兩獨立樣本t檢驗或兩獨立樣本秩和檢驗比較兩組計量間資料的差異，等級資料在經過半定量化處理后以及基于率和構成比的比較均采用χ2檢驗；依據數據是否服從二元正態分布分別采用Spearman或Pearson相關分析各監測指標間的相關性。如無特殊說明，顯著性水準α=0.05，所有P值均表示雙側概率。

2 結 果

2.1三組患者指標對比 三組HLA-B27陽性率、VAS評分和ESR等指標均存在明顯差異(P<0.05)，其中觀察組各指標水平最高，對照組其次，健康對照組最低。見表1。

表1 兩組患者指標對比

注：與觀察組相比，aP<0.05；與對照組相比，bP<0.05

2.2不同VAS評分患者HLA-B27表達情況對比 觀察組HLA-B27陽性患者大部分疼痛感中度至重度，而HLA-B27陰性患者重度疼痛較少，大部分為輕度至中度疼痛，故觀察組HLA-B27陽性患者VAS評分明顯高于HLA-B27陰性患者(P<0.05)；對照組患者HLA-B27是否呈陽性與VAS分級分布無明顯關聯(P>0.05)，且其VAS分級分布與觀察組存在明顯差異(P<0.05)，見表2。

2.3HLA-B27表達與關節病變情況相關性 觀察組患者Kellgren-Lawrence分級均大量落于2至3級間，4級患者均不常見；HLA-B27陽性組未見1級患者，而陰性組1級占13.2 %，兩組存在明顯差異(P<0.05)，同時兩組整體Kellgren-Lawrence分級分布存在明顯差異(P<0.05)。對照組患者Kellgren-Lawrence分級大量落于1級，不論是HLA-B27陽性與否，均與觀察組分布情況差異顯著(P<0.05)。見表3。

表2 不同VAS評分患者HLA-B27表達情況對比[n(%)]

注：與觀察組HLA-B27陽性相比，aP<0.05；與觀察組HLA-B27陰性相比，bP<0.05

表3 HLA-B27表達與關節病變情況相關性

注：與觀察組HLA-B27陽性相比，aP<0.05；與觀察組HLA-B27陰性相比，bP<0.05

2.4結直腸炎合并關節病患者HLA-B27表達與VAS評分的關聯 HLA-B27陽性結直腸炎合并關節病患者全部觀察到關節病變情況(Kellgren-Lawrence 2-4級)，94.2%(49/52)患者VAS評分大于等于4分。

3 討 論

HLA-B27有染色體6上主要組織相容性復合體(MHC)中B基因編碼的I類表面抗原，呈遞抗原肽(來自自身和非自身抗原)到T細胞[12]。研究表明其與強直性脊柱炎、炎性腸炎和關節炎等炎性疾病顯著相關[12]。本研究選取結直腸炎合并關節病患者作為觀察組，結直腸炎患者作為對照組，分析其HLA-B27陽性表達發現，觀察組患者陽性表達率明顯更高。同時兩組陽性表達均高于健康對照組6.0 %的陽性表達率，已有的報道結果一致[13]。HLA-B27陽性率高表達表示患者HLA-B27表達異常，也表征患者體內抗原肽呈遞過程發生異常。MHCⅠ類呈遞異常賦予受脅迫細胞逃脫CD8+T細胞識別的能力，從而影響CD8+T細胞應答[14]。本研究中納入的結直腸炎和關節病病例，其病因中包含異常的機體免疫反應，故上述結果與患者體內免疫反應異常現象一致。有證據顯示，在病原體入侵后，外源肽片段通過MHCⅠ類蛋白呈遞給CD8+T細胞，響應中的CD8+T細胞分泌靶向并殺死呈遞特異性MHC-抗原復合物的細胞的細胞因子[15-16]。從MHC識別抗原開始，機體產生免疫應答和反應。故由患者PLT、 ESR和血清CRP水平異常，可得知觀察組和對照組患者疾病活動活躍。

本課題組利用VAS評分和X線檢查后Kellgren-Lawrence分級表征患者關節病嚴重程度，根據分組進行對照后發現，合并關節病的患者VAS評分和Kellgren-Lawrence分級分布情況完全異于不合并關節病患者。合并關節病HLA-B27陽性表達患者，VAS評分明顯更高，其中、重度疼痛患者明顯更多；相對而言，陰性表達患者VAS評分更低，大部分患者疼痛為輕度和中度。在不合并關節病的結直腸炎患者中，HLA-B27是否陽性表達似乎不對VAS評分分布造成影響。因此，可以推測，HLA-B27陽性表達患者VAS評分更高，即疼痛更為明顯。換言之，疾病活動程度活躍的患者中HLA-B27陽性表達的概率更高。當然不能排除個人疼痛忍受程度差異，但上述結論可能在本研究分析疾病中具有代表性。

為了佐證筆者的觀點，本研究用影像學方法檢查了兩組(觀察組和對照組)患者受累關節的受損情況，結果顯示，在合并關節病得到患者中，HLA-B27是否陽性表達影響其受累關節受損情況。本課題組觀察到，在HLA-B27陽性表達患者中，受累關節Kellgren-Lawrence分級明顯高于陰性表達患者。受累關節損害越嚴重，患者可能感受到的疼痛便越劇烈，與VAS評分表征結果一致。

4 結 論

雖然本文就結直腸炎合并關節炎患者HLA-B27表達情況進行了闡述，但由于病例資料限制，僅利用VAS評分和Kellgren-Lawrence分級對關節炎情況進行表征。下一步，擬收集更多病例資料，以影像學表征患處病變情況，在聯系HLA-B27表達情況進行研究。綜上所述，結直腸炎合并關節病患者中HLA-B27陽性表達水平異常，其陽性表達與關節受累有一定關聯，即陽性表達患者VAS評分更高，受累關節疼痛更為明顯。