顆粒增強型免疫透射比濁法檢測肌紅蛋白的性能評價

蔣洪昆，郭 偉，呂桂樺

(廣西壯族自治區柳州市人民醫院檢驗科，廣西柳州 545001)

肌紅蛋白(MYO)屬于血紅素蛋白家族，是肌肉內的儲氧蛋白，僅僅存在于心肌細胞和氧化的骨骼肌纖維內并能與氧氣可逆的結合。它能夠很好地在肌肉內儲存氧氣并能在組織缺氧時將其釋放出來；也能夠在肌肉活動增加時調節細胞內的氧濃度。據研究表明，肌紅蛋白是一個靈敏、可靠的早期診斷急性冠狀動脈綜合征(ACS)和檢測溶栓療效的指標[1]。同時，肌紅蛋白的檢測對急性心肌梗死、心力衰竭的診斷及嚴重程度的判斷，急性一氧化碳中毒、糖尿病酮癥等的診斷方面均有重要的臨床意義[2-6]。顆粒增強型免疫透射比濁法的檢測原理是使用抗人肌紅蛋白抗體包被的乳膠顆粒和樣品中的肌紅蛋白進行抗原-抗體反應，反應完成后，固定時間檢測吸光度來確定肌紅蛋白的濃度。本文參照美國臨床和實驗室標準協會(CLSI)相關文件對顆粒增強型免疫透射比濁法檢測肌紅蛋白進行性能評價。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年6-9月柳州市人民醫院住院患者和門診患者及健康體檢者，所有標本均為常規檢查的剩余標本，不涉及任何與患者隱私相關的醫療信息。

1.2儀器與試劑 Olympus AU2700型全自動生化分析儀，顆粒增強型免疫透射比濁法檢測肌紅蛋白試劑采用上海德賽診斷系統的試劑盒(批號14432)。

1.3方法

1.3.1精密度評價 參照CLSI頒布的EP15-A文件《用戶對精密度和準確度性能的核實試驗——批準指南》，取選取兩種濃度水平的樣本各一份，濃度水平應與廠家精密度評價時所用樣本接近或與醫學決定水平接近，每天分析1個批次，共進行5天，每份標本每天重復測定3次。計算出批內變異系數(CV)、批間CV各項指標，最后對照廠家聲明進行驗證。

1.3.2準確度評價 統計分析室間質評結果,對參加的衛生部室間質評的10個不同批號的樣本測定結果進行分析，以衛生部臨床檢驗中心組織的室間質量評價的靶值為真值，本儀器的相對偏倚按下列公式計算 偏倚=(測定值-靶值)/靶值×100%，10個批號質控物的實驗室檢測結果均在允許偏移范圍，則正確度驗證通過。

1.3.3參考區間驗證 選擇20份體檢合格的健康人標本，在檢測系統上進行測定，對結果進行統計并對儀器說明書提供的參考區間進行驗證，若20份標本的檢測結果均在儀器說明書提供的參考區間內或僅有2個標本超出，則驗證通過。否則，進行參考區間確立實驗。

1.4統計學處理 采用SPSS13.0進行統計學分析。

2 結 果

2.1精密度評價結果 2個水平的樣本每天分析1個批次，共進行5 d，每份標本每天重復測定3次。計算出批內CV、批間CV各項指標，批內CV值和批間CV值及實驗室變異系數均小于廠商說明1.2%，說明該方法有較高的重復性，精密度驗證通過。水平1和水平2的精密度結果見表1。

2.2準確度評價結果 表2顯示的是參加衛生部臨床檢驗中心全國心肌標志物室間質量評價的結果。

表1 精密度評價結果

表2 準確度評價

2.3參考區間驗證 結果顯示在選取的20例健康參考個體中，MYO的測量值均在廠商提供的參考區間內(<70 μg/L),說明廠家提供的生物參考區間適合于本實驗室使用。

3 討 論

肌紅蛋白是一種廣泛存在于心肌和骨骼肌中的蛋白質，具有儲存和運輸氧的功能[7]。當機體的橫紋肌受損傷，心肌和骨骼肌中的肌紅蛋白便釋放入血液中，檢測血清中的肌紅蛋白水平對于心肌損傷的疾病和多發傷患者的臨床診斷、治療及預后判斷具有重要意義。BHAYANA等[8]研究了急性心肌梗死(AMI)患者血清中肌紅蛋白的變化情況，研究發現發生AMI后，肌紅蛋白可于胸痛發作后2～3 h在血液中達到病理水平，早于肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)。國內研究者發現多發傷患者的血清肌紅蛋白濃度均有升高，然后呈逐漸下降趨勢[5]，可見檢測血清/血漿中的肌紅蛋白在急性心肌梗死等疾病臨床診斷、治療及預后判斷中有非常重要的作用[9]腎功能不全患者不僅具有早期監測心血管事件的意義，而且可以作為腎功能的監測指標之一[10]。

目前臨床上檢測血清中肌紅蛋白的方法有膠體金免疫層析法[11]、光激化學發光法[12]和免疫透射比濁法[13]等。膠體金免疫層析法是利用肌紅蛋白單克隆抗體標記膠體金，另一株抗人肌紅蛋白單克隆抗體包被膜作為檢測線，兔抗鼠IgG抗體包被膜作為對照線，建立的半定量金免疫層析方法，雖然可以快速得到結果，但是結果為半定量，不利于臨床的鑒別診斷；光激化學發光法是使用針對不同表位的2株單克隆抗體，一株包被發光顆粒，另一株進行生物素化，與包被有鏈霉親和素的感光微粒共同構成檢測試劑來測定肌紅蛋白水平的方法，其優點是敏感度高，但檢測成本比較高，不利于節約患者開支；本研究所關注的顆粒增強型免疫透射比濁法是新一代免疫測定技術，實驗原理是使用抗人肌紅蛋白抗體包被的乳膠顆粒和樣品中的肌紅蛋白進行抗原-抗體反應，反應完成后，固定時間檢測吸光度來確定肌紅蛋白的濃度。它大大提高了免疫比濁技術的敏感性、特異性，具有快速、準確、重復性好、操作簡單、試劑價格低廉等優點。特別是它不需要特殊的儀器，在普通生化分析儀上即可使用，極大地擴展了生化儀的使用范圍，明顯降低了檢測成本，有利于急診中的使用。本研究對顆粒增強型免疫透射比濁法檢測肌紅蛋白精密度、準確度、參考范圍進行性能評價，精密度評價選擇了50 μg/L和400 μg/L 2個濃度按CLSI評價方案進行精密度評價，結果顯示批內變異系數為0.66%和0.78%，批間變異系數為0.50%和0.43%，均小于廠商聲明的1.2%的變異系數。準確度按照CLSI EP15-A2文件進行，采用衛生部室間質評的10個不同批號的樣本測定結果進行分析，結果顯示所有的測定值均在允許范圍內，準確度驗證通過。本實驗按照CLSI C28-A2文件推薦的方法進行參考范圍的驗證，選取了20份體檢合格的健康人標本，檢測結果顯示所有結果均在廠商提供的參考區間內，符合文件要求，說明廠家提供的生物參考區間適合于本實驗室使用。綜上所述，顆粒增強型免疫透射比濁法檢測肌紅蛋白的分析性能與廠商提供的性能參數基本一致，均符合臨床要求。