IL-6、STAT3在子宮內膜癌中的表達及與臨床特征的關系△

姚文娟，宋會雙，王鳳琴，于婧，吳冬梅，劉大鵬

河北中石油中心醫院1病理科,2神經外科，河北 廊坊 065000

子宮內膜癌是臨床常見的婦科惡性腫瘤，具有較高的發病率，近年來，隨著人們生活方式的改變及社會壓力的增加，其發病率呈逐年上升的趨勢，且發病人群趨于年輕化[1-2]。目前臨床對子宮內膜癌在分子水平上的發病機制尚不明確，據較多研究顯示，其發生與發展是多種因素共同參與導致的結果，涉及多種抑癌基因的失活及癌基因的激活。同時炎癥與腫瘤的發生存在密切關系，大量研究顯示，在富含趨化因子、炎性細胞、促DNA損傷物質的炎性環境中可引發腫瘤的發生與發展[3-5]。信號轉導及轉錄激活因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）是一種具備高度同源性的轉錄因子，能夠介導多種生長因子和細胞因子的信號轉導至細胞核，對靶基因的轉錄產生影響，能夠調控細胞的功能，與腫瘤的發生與發展以及腫瘤細胞的凋亡具有密切相關性[6]。STAT3是STAT的重要成員，是一種被公認的癌基因。子宮內膜癌的高危因素，如高齡、多囊卵巢綜合征、肥胖、糖尿病等可使白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和腫瘤壞死因子表達增加，這些炎性介質在子宮內膜癌的發生和發展中起重要作用。本研究主要探討IL-6、STAT3在子宮內膜癌中的表達情況，并分析其與臨床特征的關系，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2013年8月至2018年8月于河北中石油中心醫院接受手術治療的82例子宮內膜癌患者為研究對象。納入標準：①均經病理檢查確診為子宮內膜癌；②未接受放化療治療。排除標準：①伴其他惡性腫瘤；②伴感染性疾病。82例子宮內膜癌患者中，年齡34～72歲，平均年齡（57.82±7.13）歲；腫瘤大小0.7～5.8 cm，平均（2.76±0.32）cm。選取子宮內膜癌組織標本為觀察組，癌旁正常子宮內膜組織（距腫瘤2 cm）標本為對照組。本研究通過醫院倫理委員會批準，且所有患者均自愿參與本研究，并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

應用免疫熒光組化法檢測兩組子宮內膜組織中IL-6、STAT3的表達情況：兔抗人IL-6單克隆抗體（稀釋濃度為1∶100）購自上海明睿生物技術有限公司，兔抗人STAT3多克隆抗體（稀釋濃度為1∶150）購自美國Ventana公司。將子宮內膜組織應用4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，染色采用EnVision二步法，將組織切片置于65℃溫度下烘烤12 h，然后脫蠟、水化切片，應用3%過氧化氫對內源性過氧化物酶進行滅活，加入一抗放置在濕盒中，在4℃的環境下孵育過夜，然后加入二抗，在37℃恒溫箱中孵育30 min，將辣根過氧化物酶應用鏈霉親和素標記，并置于37℃環境下孵育10 min。每張組織切片上滴加50 μl二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色劑，在光學顯微鏡下顯色3～5 min，適時應用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗以終止顯色，蘇木素復染，中性樹膠進行封固。

1.3 陽性判斷

IL-6、STAT3均以細胞質或細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性，應用半定量積分法，對每個視野陽性細胞著色強度及陽性細胞所占百分比分別計分。著色強度：未著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色或褐色為3分；陽性細胞所占百分比：＞50%為3分，26%～50%為2分，2%～25%為1分，≤1%為0分。陽性細胞所占百分比計分+陽性細胞著色強度計分＞3分則判斷為陽性[7-8]。

1.4 觀察指標

檢測兩組組織中IL-6、STAT3的表達情況，分析IL-6、STAT3與子宮內膜癌患者臨床特征的關系，并分析IL-6、STAT3在子宮內膜癌組織中表達的相關性。

1.5 統計學分析

采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）的表示，組間比較采用t檢驗，計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman秩相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IL-6、STAT3表達情況的比較

觀察組子宮內膜組織中IL-6、STAT3陽性表達率分別為 59.76%（49/82）、63.41%（52/82），均明顯高于對照組的6.10%（5/82）、10.98%（9/82），差異均有統計學意義（χ2=53.452、48.263，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征的子宮內膜癌患者的子宮內膜癌組織中IL-6、STAT3陽性表達情況的比較

國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移、組織學分級為G2～3級的子宮內膜癌患者的子宮內膜癌組織中IL-6陽性表達率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移及組織學分級為G1級的患者，差異均有統計學意義（χ2=10.530、11.078、12.584，P＜0.01）；FIGO 分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移、組織學分級為G2～3級的子宮內膜癌患者的子宮內膜癌組織中STAT3陽性表達率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移及組織學分級為G1級的患者，差異均有統計學意義（χ2=12.373、12.323、14.267，P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征的子宮內膜癌患者的子宮內膜癌組織中的IL-6、STAT3陽性表達情況（n=82）

2.3 IL-6、STAT3在子宮內膜癌組織中表達的相關性

經相關性分析顯示，IL-6與STAT3在子宮內膜癌組織中的表達呈正相關（r=0.657，P＜0.05）。

3 討論

Virchow最初在1863年提出腫瘤的發生與炎性反應存在密切聯系，其在腫瘤組織中檢測到了白細胞，并發現了約有15%的惡性腫瘤患者因感染而死亡，例如由人乳頭狀瘤病毒長期感染引發的宮頸癌、慢性乙型肝炎感染久治不愈可發展為肝癌等[9-10]。IL-6是目前發現的功能較為廣泛的細胞因子之一，其參與血細胞生成，調節免疫反應，并參與多種細胞的分化及增殖。起初臨床學者對于IL-6的研究只是將其作為一種炎性因子，后來越來越多的研究發現其與腫瘤的發生與發展以及腫瘤的轉移、侵襲具有密切相關性，同時還與較多惡性腫瘤的預后有關[11]。STAT3是一種存在于細胞質的信號轉導分子，其激活后能夠與DNA相結合，進而與酪氨酸磷酸化的信號通路相互偶聯，對細胞凋亡、分化、增殖、免疫調節等多種相關功能蛋白的表達具有調控作用[12-14]。STAT3是STAT家族中與腫瘤發生與發展關系最密切的成員，其在多種腫瘤組織中均被激活，如卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌等[15]。

在本研究中對IL-6及STAT3在子宮內膜癌組織及正常子宮內膜組織中的陽性表達情況分析顯示，觀察組患者子宮內膜癌組織中IL-6、STAT3陽性表達率均明顯高于對照組，說明IL-6、STAT3在子宮內膜癌組織中的表達水平高于健康內膜組織。在本研究中對IL-6及STAT3與子宮內膜癌患者臨床特征的關系分析中顯示，FIGO分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移、組織學分級為G2～3級的子宮內膜癌患者的子宮內膜癌組織中IL-6、STAT3陽性表達率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移及組織學分級為G1級的患者，說明IL-6、STAT3陽性表達情況與子宮內膜癌患者FIGO分期、淋巴結轉移及組織學分級有關，能夠促進腫瘤細胞的侵襲與轉移，分析其原因主要是因為IL-6能夠通過胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）/核因子-κB（nuclear factor of kappa-B，NF-κB）信號通路對子宮內膜癌細胞的增殖與生長發揮促進作用，同時炎性細胞對局部活性氧簇及活性氮簇的產生具有促進作用，導致細胞DNA受損，極易導致細胞異常突變，如中性粒細胞、肥大細胞等炎性細胞均能夠介導氮簇、氧簇、白細胞介素、干擾素等炎性反應過程，對腫瘤的侵襲及生長均具有影響，可促進腫瘤細胞的侵襲與轉移。STAT3已經被認為是一種癌基因，其激活后能夠誘導某些與細胞分化、增殖、凋亡密切聯系的關鍵基因出現異常表達，能夠通過多種途徑對細胞惡性轉化、增殖發揮促進作用，對細胞凋亡發揮抑制作用，且隨著其陽性表達的升高，會促進腫瘤的侵襲與轉移。在本研究中對IL-6、STAT3在子宮內膜癌組織中表達的相關性分析中顯示，IL-6與STAT3在子宮內膜癌組織中的表達呈正相關，分析其原因主要是因為IL-6能夠通過gp130激活STAT3，然后進一步促進抗凋亡蛋白B細胞淋巴瘤-XL（B cell lymphoma-XL，Bcl-XL）的表達，進而刺激腫瘤細胞的生長，使病情進一步惡化，因此IL-6的陽性表達對STAT3的表達具有促進作用。

綜上所述，IL-6、STAT3在子宮內膜癌組織中的陽性表達率明顯升高，且與腫瘤細胞的侵襲與轉移存在一定的關系，對臨床診斷與治療子宮內膜癌具有較高的臨床價值。