疏腦解郁湯對(duì)腦卒中后抑郁癥大鼠6-Keto-PGF1α、TXB2水平的影響

腦卒中后抑郁(PSD)指腦卒中產(chǎn)生的心理問(wèn)題，主要表現(xiàn)為持續(xù)性抑郁，可維持14 d以上，通常致殘和病死率較高，為老年殘疾和病死的高危險(xiǎn)因素[1]。PSD通常會(huì)在腦卒中后產(chǎn)生，在思維方面表現(xiàn)為遲緩，通常病人容易產(chǎn)生較低情緒和絕望的念頭，甚至有輕生的想法，進(jìn)而產(chǎn)生自殺行為。PSD對(duì)病人生活產(chǎn)生嚴(yán)重影響，不利于肢體功能恢復(fù)，增加家庭疾病負(fù)擔(dān)[2]。目前的研究并未明確PSD的病因和發(fā)病機(jī)制，也就沒(méi)有理想的治療方法和治療效果。疏腦解郁湯是李寶玲多年的經(jīng)驗(yàn)方，病機(jī)為氣郁、血瘀、痰阻，治則為疏肝解郁、理氣活血、化痰寧心。有研究顯示，采用疏腦解郁湯能夠明顯緩解PSD大鼠的抑郁癥狀，對(duì)海馬組織損傷具有保護(hù)作用[3]。本研究通過(guò)觀察疏腦解郁湯對(duì)PSD大鼠血清6-酮-前列腺素1α(6-Keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)含量的影響，進(jìn)一步探討疏腦解郁湯治療PSD可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用清潔級(jí)雄性SD大鼠130只，由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，動(dòng)物批號(hào)：11401500045192，采用普通大鼠飼料、自來(lái)水喂養(yǎng)。

1.2 藥物及試劑 疏腦解郁湯(柴胡、赤芍、丹參、黃芩、陳皮、半夏、茯苓、炙甘草、枳實(shí)、竹茹、石菖蒲、合歡皮、川芎、遠(yuǎn)志、炒棗仁)；由山西省中醫(yī)院藥劑科統(tǒng)一煎制；煎煮方法：將上述藥材去除雜質(zhì)，煎煮2次過(guò)濾后，將2次濾液合并濃縮至膏狀，于烘箱干燥后研粉，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩｛}酸帕羅西汀片(商品名：舒坦羅，生產(chǎn)廠家：浙江尖峰藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20040533)。其他包括0.4%戊巴比妥、6-Keto-PGF1α、TXB2試劑盒，由黃石市艾恩斯生物科技有限公司提供。

1.3 主要儀器 電熱恒溫干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司GZX-DH-Ⅱ)；自動(dòng)酶標(biāo)分析儀(上海安泰分析儀器有限公司AT-858型)；微量移液器(賽默飛世爾FINNPIPETTE)；低速冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司)；恒溫水浴箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物飼養(yǎng) 初次購(gòu)回動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室中先適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，不限食水，手術(shù)前12 h不再喂食，前6 h不再供水。

1.4.2 PSD動(dòng)物模型制備 根據(jù)Zea-longa改良線(xiàn)栓法制作局灶性腦缺血后再灌注大鼠模型，戊巴比妥麻醉大鼠，并于手術(shù)臺(tái)仰臥固定，分離暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)、頸外動(dòng)脈(ECA)，常規(guī)消毒頸部正中切口。無(wú)創(chuàng)微血管夾夾閉，結(jié)扎，將魚(yú)線(xiàn)栓子從CCA插入，松開(kāi)微血管夾，魚(yú)線(xiàn)經(jīng)CCA進(jìn)入ICA，從CCA分叉處魚(yú)線(xiàn)進(jìn)入，可達(dá)大腦中動(dòng)脈起始部，制作大鼠腦缺血狀態(tài)。計(jì)時(shí)以魚(yú)線(xiàn)進(jìn)入大腦中動(dòng)脈為準(zhǔn)，缺血1.5 h后緩慢拔出，實(shí)現(xiàn)再灌注，最后結(jié)扎ECA殘端并進(jìn)行縫合。待其蘇醒，用5級(jí)評(píng)分法進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，對(duì)評(píng)分結(jié)果進(jìn)行篩選，留取Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)大鼠，常規(guī)條件飼養(yǎng)。術(shù)后1周孤養(yǎng)大鼠，禁水24 h、禁食24 h、夾尾1 min、晝夜顛倒24 h、水平振蕩30 min(160次/min)等方法刺激，維持3周，每日選擇1種。通過(guò)持續(xù)的應(yīng)激處理，大鼠表現(xiàn)為活動(dòng)、進(jìn)食、進(jìn)水減少，糖水消耗減低，重量下降，求生欲望下降等，提示造模成功[4]。

1.4.3 分組及給藥方法 隨機(jī)選取15只大鼠作為空白對(duì)照組，其余大鼠采用改良線(xiàn)栓法行局灶性腦缺血再灌注模型制作，在造模過(guò)程中，由于死亡率較高，于空白對(duì)照組中抽取了8只大鼠進(jìn)行造模。符合特定要求條件，進(jìn)入下一步驟中。術(shù)后1周，連續(xù)3周進(jìn)行孤養(yǎng)結(jié)合慢性溫和應(yīng)激。造模成功后，將其隨機(jī)分為模型組(7只)、鹽酸帕羅西汀組(8只)、疏腦解郁湯大劑量組(8只)、中劑量組(7只)、小劑量組(8只)。空白對(duì)照組與模型組采用等體積生理鹽水灌胃；疏腦解郁湯大、中、小劑量組采用不同劑量疏腦解郁湯溶液灌胃，大劑量疏腦解郁湯為成人用藥的15.0倍，中劑量為成人標(biāo)準(zhǔn)的7.5倍，小劑量為成人標(biāo)準(zhǔn)的3.5倍，分別為3.015 g/kg、1.058 g/kg、0.704 g/kg。鹽酸帕羅西汀組予鹽酸帕羅西汀溶液灌胃，鹽酸帕羅西汀給藥劑量為成人的5倍，即0.001 7 g/kg。PSD大鼠造模成功1周經(jīng)口灌胃給藥，每日1次，維持4周。

1.4.4 觀察指標(biāo) 采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)6-Keto-PGF1α、TXB2水平，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠體重變化情況 不同時(shí)間段模型組與空白對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；疏腦解郁湯組體重增加較快，且以大劑量組增加最快。詳見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠體重變化情況(±s) g

與空白對(duì)照組比較，1)P<0.05

2.2 各組大鼠6-Keto-PGF1α、TXB2水平比較 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠6-Keto-PGF1α含量顯著降低，TXB2含量顯著增加(P<0.05)。與模型組比較，疏腦解郁湯大、中劑量組6-Keto-PGF1α含量顯著增加，TXB2含量顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠6-Keto-PGF1α、TXB2水平比較(±s) pg/mL

與空白對(duì)照組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05

3 討 論

前列環(huán)素(prostaglandin，PGI2)在當(dāng)前已知的血小板聚集抑制劑中作用最強(qiáng)，血栓素A2(thromboxanA2，TXA2)有較強(qiáng)的血小板聚集作用，而TXA2和PGI2的性質(zhì)不穩(wěn)定，TXB2和6-Keto-PGF1α作為T(mén)XA2和PGI2的前體，性質(zhì)較穩(wěn)定，所以目前都用TXB2和6-Keto-PGF1α代表兩者的濃度，TXB2和6-Keto-PGF1α與抑郁癥有一定相關(guān)性，抑郁癥病人血清TXB2水平升高，6-Keto-PGF1α水平降低[5]。腦血管病病人6-Keto-PGF1α水平下降，TXB2水平升高[6]。

李寶玲多年治療PSD病例，總結(jié)出經(jīng)驗(yàn)方疏腦解郁湯，疏腦解郁湯針對(duì)的主要病機(jī)是氣郁血瘀痰阻，其主要治則是疏肝解郁、理氣活血、化痰寧心。該方的底方為柴芩溫膽湯、四逆散為主，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行加減化裁。柴芩溫膽湯具有疏肝解郁、理氣化痰的作用，四逆散可以透邪解郁，和柴芩溫膽湯合用增加疏肝理氣的作用，兩方共奏疏肝解郁、理氣化痰的作用，方中石菖蒲、遠(yuǎn)志化痰開(kāi)竅；炒棗仁、合歡皮養(yǎng)心安神解郁；丹參、川芎使血行而不滯，活血中有理氣作用。諸藥合用，安全有效，毒副作用少。

本研究通過(guò)觀察PSD大鼠血清6-Keto-PGF1α、TXB2水平，探討疏腦解郁湯對(duì)PSD的治療作用，明確其作用機(jī)制。本研究結(jié)果顯示，疏腦解郁湯能有效升高 PSD大鼠6-Keto-PGF1α水平，降低TXB2水平，改善 PSD 大鼠的抑郁癥狀，其機(jī)制可能與其能升高PSD大鼠6-Keto-PGF1α、降低血清TXB2水平有關(guān)。