冠心病合并糖尿病病人血清miR-26a、miR-26b表達(dá)特征觀察

冠心病與糖尿病均為臨床常見病，以中老年病人居多。研究表明，糖尿病是冠心病等多種心血管疾病的危險因素，與非糖尿病者相比，糖尿病病人冠心病發(fā)生風(fēng)險增加2～4倍[1-2]。近年來，隨著人口老齡化的發(fā)展，我國冠心病合并糖尿病患病率逐年增高，死亡率也有所增長[3]。研究表明，動脈粥樣硬化與冠心病合并糖尿病病人預(yù)后密切相關(guān)，且動脈粥樣硬化的發(fā)生可導(dǎo)致血管平滑肌內(nèi)部分微小核糖核酸(miRNA)出現(xiàn)異常表達(dá)，如miR-26a、miR-26b等[4]。miR-26a、miR-26b均為miR-26家族中的一員，其中miR-26a能抑制血管生成，miR-26b在機(jī)體脂肪細(xì)胞分化時呈高表達(dá)，且多種炎癥因子對其表達(dá)水平有影響[5]。為了進(jìn)一步明確冠心病合并糖尿病的臨床特征，本研究納入80例冠心病合并糖尿病病人為研究對象，分析這類病人血清miR-26a、miR-26b表達(dá)特征，為臨床診療提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2013年12月—2017年12月收治的80例冠心病合并糖尿病病人作為合并組，選取同期收治的80例單純糖尿病病人作為糖尿病組。合并組，男42例，女38例；年齡40～75(59.41±11.27)歲；體質(zhì)指數(shù)19.32～27.17(23.59±2.13)kg/m2；既往史中，吸煙史10例，高血壓史15例。糖尿病組：男45例，女35例；年齡40～75(58.09±10.92)歲；體質(zhì)指數(shù)19.15～27.42(23.63±2.09)kg/m2；既往史中，吸煙史12例，高血壓史17例。兩組性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)、既往史等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①年齡18～75歲；②糖尿病符合衛(wèi)生部疾病控制司[6]制定的《中國糖尿病防治指南》中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，冠心病參考中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會[7]制定的《中國心血管病預(yù)防指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)臨床實驗室檢查、影像學(xué)檢查證實；③無認(rèn)知、意識障礙；④無肝、肺、腦等臟器損害；⑤病人知情同意。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①惡性腫瘤；②免疫性疾??；③甲狀腺疾??；④嚴(yán)重貧血、營養(yǎng)不良；⑤慢性感染性疾病；⑥多發(fā)性骨髓瘤；⑦血液性疾病。

1.3 檢測方法

1.3.1 血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量檢測 在病人入院當(dāng)天采集3 mL空腹靜脈血，保存于促凝管內(nèi)，利用離心機(jī)離心15 min，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，分離血清，存于離心管內(nèi)。①提取RNA：根據(jù)TRIzol說明書對血清及總RNA進(jìn)行提取，經(jīng)紫外分光光度計對RNA濃度、質(zhì)量進(jìn)行檢測；②實時熒光定量PCR(qRT-PCR)：取總RNA 2 μL行逆轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)條件為16 ℃、15 min，42 ℃、60 min，85 ℃、5 min，反應(yīng)結(jié)束后存放于-20 ℃冰箱內(nèi)。經(jīng)探針法行qRT-PCR定量檢測，反應(yīng)條件為95 ℃、5 min(95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，40個循環(huán))。各樣品設(shè)副孔3個，取Ct值的均值，以2-△ct作為miR-26a、miR-26b相對表達(dá)量。

1.3.2 血清白介素-6(interleukin-6，IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)檢測 另取3 mL空腹靜脈血，利用離心機(jī)離心15 min，轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，分離血清，存放于-80 ℃冰箱內(nèi)待測。采用酶法測定血清IL-6與TNF-α水平，試劑盒購自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察并比較兩組病人的血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量以及血清IL-6與TNF-α水平，采用ROC曲線模型分析血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量對冠心病合并糖尿病的預(yù)測價值，利用Pearson線性相關(guān)分析血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量與冠心病合并糖尿病病人血清IL-6、TNF-α水平的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 利用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗；計量資料采用t檢驗；利用ROC曲線模型分析血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量對冠心病合并糖尿病的預(yù)測價值；采用Pearson線性相關(guān)分析兩個變量的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)(r)范圍為-1～1，越接近1或-1表明相關(guān)性越強(qiáng)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量及IL-6、TNF-α水平比較 合并組血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量及血清IL-6、TNF-α水平均高于糖尿病組，兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量及IL-6、TNF-α水平比較(±s)

2.2 血清miR-26a、miR-26表達(dá)量對冠心病合并糖尿病的預(yù)測價值 血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量預(yù)測冠心病合并糖尿病的曲線下面積分別為0.776、0.783，詳見表2。ROC曲線模型見圖1、圖2。

表2 血清miR-26a、miR-26表達(dá)量對冠心病合并糖尿病的預(yù)測價值

圖1 血清miR-26a表達(dá)量預(yù)測冠心病合并糖尿病的ROC曲線模型

圖2 血清miR-26b表達(dá)量預(yù)測冠心病合并糖尿病的ROC曲線模型

2.3 血清miR-26a、miR-26表達(dá)量與IL-6、TNF-α水平的相關(guān)性 經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析提示，血清miR-26a、miR-26表達(dá)量與冠心病合并糖尿病病人的血清IL-6、TNF-α無明顯相關(guān)性(P>0.05)。詳見表3。線性相關(guān)圖見圖3～圖6。

表3 血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量與合并組IL-6、TNF-α的相關(guān)性

圖3 血清miR-26a表達(dá)量與IL-6的線性相關(guān)分析

圖4 血清miR-26a表達(dá)量與TNF-α的線性相關(guān)分析

圖5 血清miR-26b表達(dá)量與IL-6的線性相關(guān)分析

圖6 血清miR-26b表達(dá)量與TNF-α的線性相關(guān)分析

3 討 論

糖尿病病人存在代謝異常，若這種異常狀態(tài)長期未能糾正，則會引起動脈內(nèi)膜功能紊亂，從而導(dǎo)致一系列病理改變，如血脂代謝紊亂、胰島素抵抗等[8-9]。上述因素均可導(dǎo)致多類細(xì)胞功能改變，如削弱血小板功能、凝血功能等，最終形成廣泛性紊亂，并損害動脈內(nèi)膜，增加動脈粥樣硬化、冠心病風(fēng)險[10]。近年來，我國糖尿病、冠心病患病率逐年增高，冠心病合并糖尿病在臨床中也非常常見，這類疾病的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，且治療難度大，預(yù)后欠佳[11]。

本研究發(fā)現(xiàn)與單純糖尿病病人相比，冠心病伴糖尿病病人的血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量顯著增高，提示血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量可能與該病的進(jìn)展

過程相關(guān)。動物實驗表明，冠心病小鼠血清miR-26a表達(dá)量較正常小鼠明顯上調(diào)[12]，與本研究結(jié)論相似。李肖肖[13]研究顯示，miR-26a對血管平滑肌細(xì)胞有調(diào)節(jié)作用，前者通過對后者的增殖、遷移等進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而促進(jìn)動脈粥樣硬化發(fā)生。另有研究發(fā)現(xiàn)，miR-26a對細(xì)胞凋亡、分化有抑制作用，而對血管平滑肌細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，導(dǎo)致冠心病患病風(fēng)險增加[14]。miR-26b也與冠心病伴糖尿病進(jìn)展存在關(guān)聯(lián)，研究表明，糖尿病小鼠腎皮質(zhì)內(nèi)miR-26b呈高表達(dá)水平，而miR-26b易引起心肌細(xì)胞肥大，造成心肌損害[15]。由此可見，miR-26a、miR-26b過表達(dá)對冠心病伴糖尿病病人病情影響較大。通過繪制ROC曲線模型發(fā)現(xiàn)血清miR-26a、miR-26b表達(dá)量對冠心病合并糖尿病具有一定預(yù)測價值。miR-26a、miR-26b已在上述研究中證實其在冠心病合并糖尿病病人中呈高表達(dá)。國外研究也發(fā)現(xiàn)，miR-26a、miR-26b等多種miRNA在動脈粥樣硬化中異常上調(diào)，有利于為臨床診斷提供依據(jù)[16]。

糖尿病與冠心病存在相同病理基礎(chǔ)，即慢性炎癥。在這類病人慢性炎癥進(jìn)展過程中，IL-6、TNF-α均發(fā)揮著重要作用，其中IL-6能使單核細(xì)胞移至血管內(nèi)皮下，而TNF-α能提高血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性，二者均能促進(jìn)動脈粥樣硬化形成[17]。本研究Pearson線性相關(guān)分析提示，血清miR-26a、miR-26表達(dá)量與病人血清IL-6、TNF-α無明顯相關(guān)性，這表明雖然4項指標(biāo)均參與了這類疾病的進(jìn)展過程，但彼此間未見明顯關(guān)聯(lián)性。

本研究證實冠心病合并糖尿病病人血清miR-26a、miR-26b較單純糖尿病病人顯著上調(diào)，且二者對冠心病伴糖尿病的預(yù)測存在較高價值，臨床可將其作為這類病人的重點觀察指標(biāo)，但二者與血清IL-6、TNF-α未見明顯相關(guān)性。本研究局限性在于納入樣本量少，未來將擴(kuò)大樣本量對此進(jìn)行進(jìn)一步論證。