關蒼術石油醚部位化學成分研究

周媛媛,高蕙蕊,吳熙培,宋紅娟,馬丹娜,劉艷,王曉麗,于海龍,楊炳友*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院，黑龍江 哈爾濱 150040；2. 澳門科技大學中醫(yī)藥學院，澳門 999078;3.哈爾濱市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江 哈爾濱 150525)

菊科蒼術屬多年生草本植物關蒼術Atractylodesjaponica主產(chǎn)于東北，在大興安嶺地區(qū)有大量分布，根莖作為主要的藥用部位。關蒼術具有發(fā)汗解表、健脾燥濕、明目祛風等功效，用于食欲不振、消化不良、脘腹脹滿、寒濕吐瀉等癥[1-2]的治療。在日韓兩國，關蒼術的根莖不僅常作為白術而藥用，而且還做成保健食品而食用[3-4]。目前，對關蒼術揮發(fā)油成分研究較多，而對關蒼術的極性成分研究較少。為了合理利用關蒼術，挖掘其藥效物質(zhì)基礎，本文對關蒼術開展了系統(tǒng)的成分分離研究，共得到12個化合物，分別為白術內(nèi)酯Ⅰ(1)，白術內(nèi)酯Ⅱ(2)，白術內(nèi)酯Ⅲ(3)，atractylenother(4)，杜松腦(5)，雙表白術內(nèi)酯(6)，雙白術內(nèi)酯(7)，表白術內(nèi)酯Ⅰ(8)，4R,15-環(huán)氧白術內(nèi)酯Ⅱ(9)，8β,9α-二羥基白術內(nèi)酯Ⅱ(10)，7α-羥基-β-谷甾醇(11)，豆甾醇(12)。

1 儀器、試劑和藥材

NE-1101型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化株式會社)；AV-600型超導核磁共振儀(Bruker公司)；Q-TOF(ESI)高分辨質(zhì)譜儀(Waters公司)；Hoover capillary 熔點測定儀(美國Philadelphia公司)；柱色譜硅膠(200～300目)和薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠)。試劑均為分析純。

關蒼術藥材購自哈爾濱市三棵樹藥材公司，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學藥學院王振月教授鑒定為菊科植物關蒼術AtractylodesJaponica的干燥根莖。

2 提取與分離

將干燥的關蒼術藥材(10.0 kg)適當粉碎，以95%乙醇回流提取3次，每次2 h，減壓濃縮得到浸膏(976.1 g)。浸膏加適量蒸餾水分散后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯及水飽和的正丁醇進行萃取，萃取物減壓濃縮，得各萃取部位。取石油醚萃取部位98.5 g經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫、反復硅膠柱層析及重結(jié)晶等方法共分離純化得到12個化合物:1～12。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針晶(MeOH)，mp 121～124 ℃。HR-ESI-MSm/z：231.1326 [M+H]+，分子式為C15H18O2。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 5.61 (1H, s, H-9), 4.92 (1H, d,J=1.2 Hz, H-15b), 4.63 (1H, d,J=1.2 Hz, H-15a), 2.69 (1H, dd,J=16.9, 3.8 Hz, H-6β), 2.53 (1H, td,J=14.9, 1.9 Hz, H-6α), 2.34 (1H, m, H-5), 2.34 (1H, m, H-3β), 2.06 (1H, d,J=5.1 Hz, H-3α), 1.91 (3H, d,J=1.7 Hz, H-13), 1.67 (2H, m, H-2), 1.64 (2H, m, H-1), 0.95 (3H, s, H-14)；13C-NMR數(shù)據(jù)表1。數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，鑒定化合物1為白術內(nèi)酯Ⅰ。

化合物2：白色針晶(MeOH)，mp 100～103 ℃。HR-ESI-MSm/z：233.1453 [M+H]+，分子式為C15H20O2。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 4.87 (1H, d,J=1.2 Hz, H-15b), 4.83 (1H, dd,J=11.5, 6.4 Hz, H-8), 4.60 (1H, d,J=1.2 Hz, H-15a), 2.72 (1H, dd,J=13.9, 3.7 Hz, H-6α), 2.38 (1H, dt,J=13.8, 2.3 Hz, H-3β), 2.31 (1H, m, H-9β), 2.28 (1H, m, H-6β), 1.98 (1H, td,J=12.9, 5.6 Hz, H-3α), 1.85 (1H, dt,J=12.8, 1.4 Hz, H-5), 1.82 (3H, t,J=1.6 Hz, H-13), 1.64 (1H, m, H-1β), 1.60 (2H, m, H-2), 1.32 (1H, td,J=13.4, 4.9 Hz, H-1α), 1.13 (1H, t,J=11.9 Hz, H-9α), 0.89 (3H, s, H-14)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，鑒定化合物2為白術內(nèi)酯Ⅱ。

化合物3：白色針晶(MeOH)，mp 166～170 ℃。HR-ESI-MSm/z：249.1429 [M+H]+，分子式為C15H20O3。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ:4.88 (1H, s, H-15b), 4.61 (1H, s, H-15a), 2.63 (1H, dd,J=13.3, 3.2 Hz, H-6α), 2.44 (1H, ddd,J=13.3, 12.8, 1.5 Hz,, H-6β),2.37 (1H, dt,J=12.6, 3.2 Hz, H-3β), 2.27 (1H, d,J=13.7 Hz, H-9β), 1.98 (1H, td, J=12.6, 6.8 Hz, H-3α), 1.86 (1H, s, H-5α), 1.83 (3H, d,J=1.0 Hz, H-13), 1.66 (1H, m, H-2α), 1.64 (1H, m, H-2β), 1.57 (1H, s, H-1β), 1.55 (1H, s, H-9α), 1.25 (1H, td,J=12.8, 5.8 Hz, H-1α), 1.04 (3H, s, H-14)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，鑒定化合物3為白術內(nèi)酯Ⅲ。

化合物4：白色固體。HR-ESI-MSm/z：234.163 3[M]+，分子式為C15H22O2。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 4.82 (1H, d,J=1.5 Hz, H-15b), 4.71 (1H, dd,J=15.9, 1.3 Hz, H-12α), 4.57 (1H, d,J=1.5 Hz, H-15a), 4.07 (1H, dd,J=15.9, 2.8 Hz, H-12β), 2.52 (1H, dd,J=13.9, 3.0 Hz, H-6α), 2.34 (1H, dt,J=13.1, 2.0 Hz, H-3β), 2.11 (1H, td,J=13.9, 1.4 Hz, H-6β), 1.99 (1H, td,J=13.1, 6.2 Hz, H-3α), 1.83 (1H, dd,J=12.9, 1.3 Hz, H-5α), 1.78 (1H, d,J=13.4 Hz, H-9β), 1.67 (3H, dd,J=2.6, 1.0 Hz, H-13), 1.64 (1H, m, H-2α), 1.61 (1H, m, H-2β), 1.53 (1H, dt,J=13.0, 3.1 Hz, H-1β), 1.31 (1H, d,J=13.5 Hz, H-9α), 1.23 (1H, td,J=13.0, 4.9 Hz, H-1α), 1.04 (3H, s, H-14)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，鑒定化合物4為atractylenother。

化合物5：無色針晶(acetone)，mp 163～167 ℃。HR-ESI-MSm/z：222.1978 [M]+，分子式為C15H26O。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 2.82 (1H, m, H-4), 2.50 (1H, m, H-2), 1.90 (1H, m, H-2), 1.82 (1H, m, H-6), 1.70 (3H, s, 12-CH3), 1.67 (3H, s, 13-CH3), 1.64 (1H, brs, H-4), 1.56 (2H, m, H-7), 1.43 (1H, m, H-1), 1.41 (1H, m, H-8), 1.32 (1H, m, H-6), 1.15 (1H, brs, H-10), 1.14 (3H, s, H-14), 1.11 (1H, m, H-8), 1.06 (1H, m, H-1), 0.97 (3H, s, 15-CH3)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，鑒定化合物5為杜松腦。

化合物6：無色針晶(EtOH)，mp 206～209 ℃。HR-ESI-MSm/z：462.2768 [M]+，分子式為C30H38O4。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 4.86 (1H, s, H-15b), 4.63 (1H, s, H-15a), 2.82 (1H, t,J=10.0 Hz, H-5α), 2.65 (1H, dd,J=17.5, 10.6 Hz, H-6α), 2.37 (1H, d,J=13.6 Hz, H-3β), 2.31 (1H, d,J=14.8 Hz, H-9β), 2.19 (1H, ddd,J=17.5, 8.0, 2.0 Hz, H-6β), 2.08 (1H, m, H-3α), 2.01 (1H, d,J=14.8 Hz, H-9α), 1.79 (3H, d,J=1.9 Hz, 13-CH3), 1.63 (1H, m, H-2α), 1.57 (1H, s, H-1β), 1.47 (1H, m, H-2β), 1.44 (1H, m, H-1α), 0.50 (3H, s, 14-CH3)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表1。數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，鑒定化合物6為雙表白術內(nèi)酯。

表1 化合物1～613C-NMR數(shù)據(jù)

化合物7：白色顆粒狀晶體(CHCl3)，mp 207～213 ℃。HR-ESI-MSm/z：463.2782 [M+H]+，分子式為C30H38O4。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 4.87 (1H, s, H-15b), 4.67 (1H, s, H-15a), 2.83 (1H, d,J=14.5 Hz, H-9β), 2.78 (1H, d,J=13.0 Hz, H-6β), 2.66 (1H, dd,J=13.0, 3.4 Hz, H-6α), 2.37 (1H, d,J=13.0 Hz, H-3β), 1.96 (1H, m, H-3α), 1.76 (3H, s, 13-CH3), 1.70 (1H, m, H-5), 1.67-1.60 (3H, m, H-1β，2α，2β), 1.42 (1H, d,J=14.5 Hz, H-9α), 1.25 (1H, m, H-1α), 1.14 (3H, s, 14-CH3)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表2。數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，鑒定化合物7為雙白術內(nèi)酯。

化合物8：白色針晶(PE-EtOAc)，mp 123～126 ℃。HR-ESI-MSm/z：232.1450 [M]+，分子式為C15H20O2。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 5.04 (1H, t,J=9.9 Hz, H-8), 4.90 (1H, s, H-15β), 4.65 (1H, s, H-15α), 2.68 (1H, dd,J=18.6, 12.5 Hz, H-6β), 2.59 (1H, m, H-6α), 2.41 (1H, d,J=5.5 Hz, H-5), 2.38 (1H, d,J=14.4 Hz, H-3e), 2.25 (1H, dd,J=13.6, 10.1 Hz, H-9α), 2.01 (1H, m, H-3a), 1.84 (3H, s, 13-CH3), 1.67-1.45 (4H, m, H-1a, 1e, 2a, 2e), 1.35 (1H, dd,J=13.6, 8.8 Hz, H-9β), 0.67 (3H, s, 14-CH3)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表2。數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，鑒定化合物8為表白術內(nèi)酯Ⅰ。

化合物9：白色粉末。HR-ESI-MSm/z：249.148 5 [M+H]+，分子式為C15H20O3。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 4.82 (1H, dd,J=11.2, 6.4 Hz, H-8β), 2.84 (1H, dd,J=4.6, 1.5 Hz, 15b), 2.75 (1H, dd,J=13.0, 2.9 Hz, H-6α), 2.66 (1H, d,J=4.6 Hz, H-15a), 2.31 (1H, dd,J=12.3, 6.4 Hz, H-9β), 1.87 (1H, m, H-3α), 1.82 (3H, d,J=1.6 Hz, 11-CH3), 1.80 (1H, m, H-2α), 1.77 (1H, dd,J=13.0, 12.8 Hz, H-6β), 1.76 (1H, td,J=13.8, 3.4 Hz, H-2β), 1.72 (1H, dd,J=13.2, 2.9 Hz, H-5α), 1.64 (1H, dt,J=13.4, 3.5 Hz, H-1β), 1.38 (1H, dt,J=13.3, 3.4 Hz, H-3β), 1.28 (1H, td,J=13.4, 5.7 Hz, H-1α), 1.15 (1H, dd,J=12.3, 11.2 Hz, H-9α), 1.07 (3H, brs, 10-CH3)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表2。數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，鑒定化合物9為4R,15-環(huán)氧白術內(nèi)酯Ⅱ。

化合物10：無色油狀。HR-ESI-MSm/z：264.137 1[M]+，分子式為C15H20O4。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 4.86 (1H, s, H-15b), 4.59 (1H, s H-15a), 3.68 (1H, s, H-9β), 2.56 (1H, dd,J=13.2, 3.5 Hz, H-6β), 2.40 (1H, dd,J=13.2, 12.7 Hz, H-6α), 2.33 (1H, dt,J=11.8, 1.9 Hz, H-3β), 2.28 (1H, dd,J=12.6, 3.5 Hz, H-5α), 2.01 (1H, td,J=13.2, 6.3 Hz, H-1α), 1.93 (1H, td,J=11.8, 7.2 Hz, H-3α), 1.82 (3H, s, H-13), 1.73-1.54 (2H, m, H-2), 1.30 (1H, ddd,J=13.2, 3.3, 2.5 Hz, H-1β), 1.05 (3H, s, H-14)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表2。數(shù)據(jù)與文獻[12]報道基本一致，鑒定化合物10為8β，9α-二羥基白術內(nèi)酯Ⅱ。

表2 化合物7～1213C-NMR數(shù)據(jù)

化合物11：白色結(jié)晶(CH3OH)，mp 166～172 ℃。HR-ESI-MSm/z：430.3829 [M]+，分子式為C29H50O2。1H-NMR(600 MHz, CDCl3) δ: 5.64 (1H, dd,J=5.4, 1.7 Hz, H-6), 3.87 (1H, m, H-7), 3.61 (1H, m, H-3), 1.02 (3H, s, H-19), 0.96 (3H, d,J=7.0 Hz, H-21), 0.88 (3H, t,J=7.3 Hz, H-29), 0.87 (3H, d,J=6.5 Hz, H-26), 0.82 (3H, d,J=8.0 Hz, H-27), 0.71 (3H, s, H-18)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表2。數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，鑒定化合物11為7α-羥基-β-谷甾醇。

化合物12：白色無定形粉末。HR-ESI-MSm/z：411.3726 [M-H]-，分子式為C29H48O。1H-NMR(600 MHz, DMSO-d6) δ: 5.37 (1H, d,J= 5.0 Hz, H-6), 5.16 (1H, dd,J= 15.4, 8.6 Hz, H-23), 5.02 (1H, dd,J= 15.4, 9.0 Hz, H-22), 3.55 (1H, m, H-3), 1.03, 1.00, 0.91, 0.83, 0.82, 0.66 (18H, 6 × CH3)；13C-NMR數(shù)據(jù)見表2。數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，鑒定化合物12為豆甾醇。

4 討論

通過對關蒼術石油醚部位的系統(tǒng)分離，共得到12個化合物：其中化合物1～10為倍半萜類化合物、化合物11～12為甾體化合物，化合物4～12首次從關蒼術中分離得到，進一步豐富了關蒼術的化學成分，為其藥效物質(zhì)基礎研究提供理論依據(jù)。