復方冰甲乳膏長期毒性試驗研究

邱 洪，王 慧，李新順（解放軍第九二五醫院藥劑科，貴州 貴陽 550009）

復方冰甲乳膏來源于我院皮膚科臨床經驗方，為中西藥結合的復方，該方通過驗方配比及工藝篩選出由冰片、硫磺、硼砂、甲硝唑、制霉菌素等按照最佳比例組成[1]，臨床具有明顯療效[2]，具有清熱燥濕、收斂生肌之功效，主要用于真菌感染引起的手足癬等。本課題組已完成了急性毒性試驗研究[3]，為確保臨床用藥的安全性，以及為進一步的作用機制研究提供客觀依據，本課題組對此方進行了長期毒性試驗研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

實驗動物為SD大鼠，80只，雌雄各半，體質量（220±30）g，由貴陽醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（黔）2012-001。

1.2 儀器與試藥

電子天平（梅特勒托利多上海有限公司）；日本OLYMPUS BH-2顯微鏡（日本奧林巴斯有限公司）；SC-970全自動血細胞分析儀（瑞士貝肯公司）；日立7170A全自動生化分析儀（美國柯達公司）；HPIAS-1000高清晰度彩色圖文病理分析系統、光鏡（武漢千屏影像技術有限責任公司）。復方冰甲乳膏（由貴陽中醫學院中藥制劑研究中心提供，批號：20150126）。

1.3 方法[4-12]

1.3.1 動物分組及給藥方法 給藥前先讓大鼠適應環境，觀察3 d大鼠的一般狀況，無異常變化，用硫化鋇脫毛劑給大鼠背部脫毛，脫毛區域大小為3 cm×3 cm。將SD大鼠（80只，雌雄各半）隨機分為4組，每組20只，分別作為復方冰甲乳膏高、中、低三個劑量組及空白對照組。給藥組劑量分別為3.00、1.50、0.75 g·kg-1，含藥量分別為34.34%、17.17%、8.58%（即為該制劑擬定臨床成人日用最大劑量0.05 g·kg-1的60倍、30倍、15倍）。每日上午8：00-10：00時進行皮膚涂抹給藥一次，給藥方法為用棉簽取稱量好的相應藥物均勻涂抹大鼠背部脫毛區皮膚部位，空白對照組給予等量的賦形劑。每周皮膚涂抹給藥6 d，第7天再用硫化鋇脫毛劑給大鼠背部脫毛，連續給藥13周，后2周停藥。

1.3.2 檢查指標 每天觀察動物一般狀況，每周記錄各組動物體質量及進食量一次，根據動物體質量增長變化，調整給藥量。給藥13周時，于末次給藥后禁食不禁水12 h，每組取10只動物（雌雄各半）稱重后股靜脈取血，測定動物血常規指標、血生化指標，同時處死動物進行系統尸解，觀察動物各臟器組織有無充血、腫大、出血等異常變化后，再取各鼠主要臟器分別稱重，計算臟器系數后及其他臟器組織標本仔細剝離周圍脂肪組織等浸入10%甲醛固定，進行病理組織形態學檢查。停藥期，其余動物停藥常規飼養2周，每天進行一般狀況觀察，每周記體質量及進食量，禁食不禁飲12 h處死動物，檢測上述各項指標。

1.3.3 統計學處理 數據以（均數±標準差）表示，采用SPSS17.0統計分析軟件進行統計學處理，多組間計量資料及兩兩比較應用單因素方差分析，P ＜0.05表示具有顯著性差異。

2 結果

2.1 復方冰甲乳膏對大鼠一般情況及進食的影響

在連續給藥13周及停藥2周內，將各給藥組與空白對照組比較，觀察動物活動、行為、飲食、大便、毛發光澤等，4組動物情況相似，未見明顯異常變化。在同一時間內大鼠攝食量亦無明顯差異。結果見表1。

2.2 復方冰甲乳膏對大鼠體質量的影響

觀察期內，各組雌雄大鼠體質量均逐漸增加，生長發育良好；各給藥組與同期空白對照組相比，各時間點大鼠體質量與空白對照組相比無明顯差異（P ＞ 0.05）。表明大鼠連續皮膚涂抹給予復方冰甲乳膏13周及停藥2周，對雌雄大鼠體質量無明顯毒性影響，詳見表2。

2.3 復方冰甲乳膏對大鼠血常規指標的影響

復方冰甲乳膏高、中、低三種劑量連續給藥13周及停藥2周，對大鼠的血常規指標未見顯著影響，經統計學處理，P ＞ 0.05。因此，可以認為復方冰甲乳膏較大劑量、較長時間（13周）給藥及停藥2周，對大鼠的造血功能無顯著的毒性影響，見表3。

表1 復方冰甲乳膏對大鼠日平均進食量的影響Tab 1 The effect of compound Bingjia cream on the average daily intake of rats

表2 復方冰甲乳膏對大鼠體質量的影響Tab 2 Effect of compound Bingjia cream on rat body weight

表3 復方冰甲乳膏對大鼠血常規指標的影響Tab 3 Effect of compound Bingjia cream on blood routine index in rats

2.4 復方冰甲乳膏對大鼠血生化指標的影響

復方冰甲乳膏高、中、低三種劑量連續給藥13周及停藥2周，對大鼠的血生化指標均未見顯著影響，大鼠的肝功能及腎功能等各項生化指標數值分別與空白對照組相應數值比較，未見明顯差異（P ＞ 0.05），表明復方冰甲乳膏較大劑量連續給藥13周及停藥2周對大鼠肝功能、腎功能等指標均無顯著毒性作用，詳見表4。

表4 復方冰甲乳膏對大鼠血生化指標的影響Tab 4 Effect of compound Bingjia cream on blood biochemistry index in rats

表5 復方冰甲乳膏對雌性大鼠主要臟器指數的影響Tab 5 Effect of compound Bingjia cream on main organ index in female rats

表6 復方冰甲乳膏對雄性大鼠主要臟器指數的影響Tab 6 Effect of compound Bingjia cream on main organ index in male rats

2.5 復方冰甲乳膏對大鼠主要臟器指數的影響

復方冰甲乳膏給大鼠皮膚涂抹給藥13周和停藥2周，系統尸體解剖示：大腦、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腎上腺、胸腺、甲狀腺、胃、腸、睪丸、附睪、前列腺、子宮、卵巢等臟器的形態、大小、顏色均未發現肉眼可見的變化。與空白組對照組比較，均無明顯差異，詳見表5、表6。

2.6 復方冰甲乳膏對大鼠重要臟器組織器官病理形態的影響

將復方冰甲乳膏分為高、中、低三個劑量組及空白對照組進行涂抹皮膚給藥，連續給藥13周及停藥2周后解剖各組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、大腦、子宮、卵巢、睪丸、附睪、前列腺、甲狀腺、氣管、食管、胃、主動脈、十二指腸、結腸、膀胱、胰腺、淋巴結、視神經、坐骨神經、皮膚等組織器官，進行組織病理學檢查，病理觀察結果表明：各給藥組大鼠諸多臟器的組織細胞無損害，形態學結果提示該藥物對各臟器組織無毒性作用。

3 討論

本研究對復方冰甲乳膏的長期毒性進行研究，為臨床用藥提供毒理學依據。復方冰甲乳膏臨床推薦成人日用量為0.05 g·kg-1。本實驗給予相當于成人日用劑量的60倍、30倍、15倍的高、中、低（3.00 g·kg-1、1.50 g·kg-1、0.75 g·kg-1）劑量，SD大鼠皮膚給藥，qd，每周6 d，連續13周，停藥2周。在給藥期及停藥期，復方冰甲乳膏各劑量組大鼠一般狀況良好，攝食量、體質量增長正常；血常規指標、血生化指標、主要臟器指數、器官組織形態與對照組比較，均無顯著性差異，表明復方冰甲乳膏對大鼠血常規指標和大鼠肝功能、腎功能均無明顯影響；解剖大鼠主要臟器未見明顯肉眼可見的病理性改變，病理學檢查顯示，復方冰甲乳膏各劑量組未出現藥物致病理性改變，停藥2周后，也未出現與藥物相關的不良反應。本研究結果表明，給大鼠長期皮膚涂抹復方冰甲乳膏不會引起器官組織形態學變化。