人胃癌組織中Runx3表達水平與淋巴結轉移的相關性研究

王 暉，趙亞剛

1.江西省九江市第三人民醫院重肝科，江西九江 332000；2.中國人民解放軍南部戰區總醫院消化內科，廣東廣州 510010

胃癌發病相對隱匿，手術切除后的5年生存率與淋巴結轉移灶是否清除密切相關，早期研究發現，Runx3表達異常可影響胃癌分化，且Runx3表達水平與患者預后呈明顯負相關關系[1]。近期有研究發現Runx3表達水平與結直腸癌的淋巴結轉移有關，是影響結直腸癌患者預后的重要因素[2]。此外，溫機靈等[3]研究顯示，膀胱B超檢查與尿沉渣Runx3基因甲基化的聯合檢測診斷膀胱癌復發的靈敏度為92.86%，特異度為91.62%，陰性預測值為99.35%，提示了Runx3與腫瘤的密切關系。本研究旨在通過探討胃癌組織中Runx3的表達水平與胃癌淋巴結轉移的關系，明確胃癌組織中Runx3能否作為遠處淋巴結轉移的監測指標，為臨床實踐提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月至2019年1月在九江市第三人民醫院經胃鏡檢查、病理活檢確診為胃癌并行手術治療的患者30例為研究對象，其中男21例、女9例，平均年齡(50.20±12.71)歲。根據淋巴結活檢結果，未發生腫瘤轉移的患者為未轉移組，共13例；發生第2站淋巴結腫瘤轉移的為轉移A組，共7例；發生第2站以上淋巴結腫瘤轉移的為轉移B組，共10例。納入標準：同意加入本研究，并簽署知情同意書；經胃鏡檢查、病理活檢診斷為胃癌，并行手術治療，術前經全腹部CT平掃+增強掃描檢查未能明確是否有第2站及以上淋巴結轉移的患者。排除標準：合并其他類型腫瘤患者。本研究經九江市第三人民醫院倫理委員會批準。

1.2方法 腫瘤組織均取自腫塊中央非壞死部分，組織離體后在0.5 h內置液氮中凍存。組織RNA提取：取組織100 mg,徹底勻漿后按Trizol一步法提取總RNA。反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測Runx3表達水平:2.5 μL反轉錄反應體系中依次加入39 μL RNase Free dH2O、0.5 μL TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μL)、0.5 μL Primer-Runx3 Antisense、0.5 μL Primer-Runx3 Sense、2 μL dNTP Mixture(10 mmol/L each)、5 μL 10×PCR BufferⅡ混勻。Runx3產物大小為181 bp，上游引物序列為5′GGTTCAACGACCTTCGCTTC3′，下游引物序列為5′AACGGCTTGGTCTGGTCCTC3′；Gst-π產物大小為180 bp，上游引物序列為5′AGGACGGAGACCTCACCCTGTA3′，下游引物序列為5′CCTTGCCCGCCTCATAGTTG3′；反應終體積為50 μL；β-actin產物大小為130 bp，上游引物序列為5′CCAGGGCGTTATGGTAGGCA3′，下游引物序列為5′TTCCATATCGTCCCAGTTGGT3′(本研究引物由上海捷瑞公司設計及合成)。RT-PCR反應產物于2%的瓊脂糖凝膠進行電泳，凝膠成像分析儀進行攝像分析。使用Quantity One軟件計算條帶灰度水平，目的基因相對表達水平=目的基因灰度水平/β-actin灰度水平。

2 結 果

2.13組患者Runx3表達水平比較 未轉移組患者胃癌組織中Runx3表達水平最高，為0.787±0.227，轉移A組Runx3表達水平為0.583±0.135，轉移B組Runx3表達水平最低，為0.362±0.040，3組間比較，差異有統計學意義(F=7.425，P<0.05)；3組間兩兩比較差異也均有統計學意義(P<0.05)。RT-PCR反應產物電泳圖見圖1。

注：M代表DL3000 Mark，從上至下片段大小分別為3 000、2 000、1 000、750、500、250、100 bp。

圖130例患者腫瘤組織RT-PCR反應產物電泳圖

2.2Runx3表達水平與胃癌淋巴結轉移距離的相關性分析 Spearman等級相關分析結果顯示，Runx3表達水平與胃癌淋巴結轉移距離呈明顯負相關(r=-0.993，P<0.05)。

3 討 論

Runx3是一種抑癌基因，其表達下降或缺失可導致胃黏膜腸化，并進一步發展癌變[4]。HSU等[5]研究顯示，Runx3表達的缺失與胃癌的淋巴結轉移和不良預后密切相關；XUE等[6]通過對結直腸癌組織中Runx3的表達水平及其與微血管密度(MVD)關系的研究發現，Runx3的表達水平與MVD水平呈負相關，從病理生理學角度闡明了Runx3的表達下降與腫瘤轉移的聯系。

早期的研究多注重Runx3甲基化與表達的關系，以及Runx3甲基化表達下降后與胃癌發生的關系，而Runx3的表達與胃癌患者臨床病理參數的關系仍存在較大爭議。近期有學者通過對9項研究涉及796例患者的薈萃分析發現，Runx3的表達與胃癌的分化、浸潤深度、淋巴結轉移有明顯的相關性(P<0.05)[7]。

大量研究證實胃癌患者手術后5年生存率與能否完整清除淋巴結轉移灶相關，所以部分研究認為無論有無淋巴結轉移均應給予淋巴結清掃。過度的淋巴結清掃會影響消化系統的淋巴回流，影響患者后期的生活質量；但對于部分未進行淋巴結清掃的患者卻存在術后復發、轉移的風險[7]。薛軍等[8]研究顯示，Runx3的表達水平與大腸癌的TNM分期及淋巴結轉移距離呈負相關。本研究發現，未轉移組患者胃癌組織中Runx3表達水平最高，為0.787±0.227，轉移A組Runx3表達水平為0.583±0.135，轉移B組Runx3表達水平最低，為0.362±0.040，差異有統計學意義(P<0.05)；Spearman等級相關分析結果顯示，Runx3表達水平與胃癌淋巴結轉移距離呈明顯負相關(r=-0.993，P<0.05)，說明胃癌組織中的Runx3表達水平下降可能提示胃癌發生轉移，且Runx3表達水平越低，胃癌淋巴結轉移的距離越遠。所以胃癌患者在等待術中病理結果的同時，如果能夠進行胃癌組織Runx3的及時RT-PCR檢測，對Runx3表達下降的患者行第2站淋巴結清掃，可提高胃癌根治效果；而對于Runx3表達正常的患者，可考慮保留第2站淋巴結，提高患者的術后生存質量。

綜上所述，Runx3可作為判斷胃癌患者是否存在淋巴結轉移的檢測指標，且其表達水平與胃癌淋巴結轉移的距離呈負相關。但本研究納入的樣本量較少，結果可能存在偏倚，后期將會進行大樣本量研究進一步證實。