米非司酮預處理對葡萄胎患者N6-甲基腺嘌呤水平的影響研究*

鐘少平

嘉興學院附屬婦幼保健院婦產科，浙江省嘉興市 314015

葡萄胎以妊娠后絨毛滋養細胞增生水腫及絨毛間質血管減少等病理特征表現為主[1]。目前隨著二胎政策放開，葡萄胎及由葡萄胎轉化而來的絨癌增多明顯[2],嚴重影響孕婦安全。清宮是治療葡萄胎的有效方式。但清宮前是否需米非司酮等藥物預處理仍存在爭論[3-4]； N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenine，m6A)是真核生物最常見和最豐富的RNA分子修飾，目前研究發現DNA存在m6A修飾來影響DNA甲基化水平，正常妊娠過程中，適量孕激素通過影響滋養細胞DNA甲基化水平來參與胎盤形成的調控[5-8]。米非司酮具有抗孕激素的作用，它是否通過影響滋養細胞DNA甲基化水平而參與葡萄胎的轉歸，期間是否存在m6A作用？據此，本文對葡萄胎患者清宮前采用米非司酮預處理，分析患者手術相關指標及血清中m6A水平，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月—2019年6月我院因葡萄胎需行清宮術者62例，年齡33～39歲，體重58～67kg，孕周9～14周，按隨機分成觀察組、對照組，每組31例。兩組患者年齡、孕周及體質量指數(BMI)比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。所有患者按美國麻醉醫師協會(ASA)分級為Ⅰ級或Ⅱ級，心肺功能未見異常，術前半年未接受米非司酮、甲氨蝶呤(MTX)等藥物治療；術前2周未接受抗凝治療，凝血功能正常，術前血紅蛋白(Hb)≥110g/L，血細胞比容(Hct)>0.35，血小板計數(PLT)≥100×109/L且<300×109/L，白蛋白>35g/L。

表1 兩組手術患者的一般資料

1.2 方法 兩組患者術前接受常規檢查, 包括血、尿常規，血凝血功能及生化功能檢測，血型鑒定等,同時接受盆腔彩色多普勒超聲、心電圖、β-人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)測定以及胸部 X 線等實驗室檢查。選擇同一有經驗的副主任醫師實施清宮術。所有患者均備血。對照組患者術前保持空腹，建立靜脈通道，給予丙泊酚全身麻醉，隨后給予清宮術的治療。實驗組患者入院完善相關檢查后,次日于空腹狀態下給予米非司酮片(浙江仙琚制藥股份有限公司,國藥準字H20000648)進行治療，50mg/次， 2次/d。患者用藥3d后行清宮術。

1.3 觀察指標 (1)分別于入院空腹(T0)、清宮后 (T1)、術后24h(T2)及術后48h(T3)抽取兩組肘靜脈血樣，檢測Hb、Hct、β-HCG、P及m6A變化情況。(2)DNA甲基化水平檢測。采用ELISA方法檢測兩組標本血清DNA甲基化水平，相應檢測試劑為DNA甲基化m6A定量分析試劑盒(武漢艾美捷科技有限公司，p-9010)，其中人DNA甲基化檢測敏感度為15pg/ml。

2 結果

2.1 兩組患者Hb、Hct指標變化 兩組患者Hb、Hct指標在T0、T1、T2及T3檢測點間無明顯差異(P均>0.05)；同時，兩組患者同一時間點Hb、Hct無明顯差異，見表2。

表2 兩組患者Hb、Hct指標變化

2.2 兩組患者β-HCG、P及m6A指標比較 兩組患者β-HCG、P及m6A在T0檢測點無明顯差異(P>0.05)；β-HCG在觀察組內T1、T2及T3檢測點較T0檢測點下降明顯(P<0.05)，對照組內T2及T3檢測點較T0檢測點下降可呈相同的變化，但對照組內T1檢測點與T0檢測點無明顯變化，并且在相同的T1、T2及T3檢測點, 觀察組β-HCG較對照組下降明顯(均P<0.05)；兩組患者P及m6A在組內T1、T2及T3檢測點與T0檢測點比較，可見與β-HCG相同的變化；同時P及m6A在兩組組間比較，可見與β-HCG相同的變化。見表3。

表3 兩組患者血液流變學變化

注：*與T0比較，P<0.05；#與對照組比較，P<0.05。

2.3 兩組手術指標比較 對照組患者手術時間、出血時間分別為 (4.88±0.37)min、(4.37±1.03)d, 觀察組手術時間、出血時間分別為 (4.81±0.43)min、(4.42±1.07)d,兩組相比無明顯差異(P均>0.05)。觀察組二次清宮率為16.13%(5/31),低于對照組的 64.52%(20/31),差異具有統計學意義 (P<0.05)。

3 討論

胚泡著床后，滋養干細胞分為內外滋養細胞層。其中內層滋養細胞主要為分裂增長的細胞滋養細胞。其中部分細胞滋養細胞還可脫離固有的滋養細胞聚集于一起的滋養細胞柱，侵襲母體子宮螺旋小動脈，參與絨毛形成[9-10]。在這一過程中，細胞滋養細胞受到細胞本身、母體血內激素水平及子宮蛻膜局部的影響。當細胞及機體環境變化時，滋養細胞可發生變性，出現絨毛水腫后，形成水泡狀物質，即葡萄胎發生[1]。相應葡萄胎亦具有生長活躍以及潛在惡性的特點, 如不及時干預，可進一步惡性變，從而侵蝕性葡萄胎及絨毛膜癌可能發生，嚴重影響患者健康、甚至危及生命。通過早期采取清宮術進行治療，能夠達到滿意的治療效果。但由于葡萄胎清宮過程中可能存在再次清宮的風險，在研究過程中我們發現，采用米非司酮預處理雖然不會對患者手術時間、出血時間、Hb及Hct造成影響，但能顯著降低二次清宮率，相應改善患者預后。DNA通過轉錄及翻譯將遺傳物質忠實地在世代中進行傳遞。DNA m6A存在于秀麗隱桿線蟲和果蠅的多細胞真核生物中調控DNA復制，從而幫助決定基因組，在細胞生命活動過程中起到重要作用。DNA的動態和可逆化學m6A修飾也可以作為具有深刻生物學意義的新型表觀遺傳標記。

葡萄胎表現為滋養細胞過度增生，與基因組異常有關。腺嘌呤甲基化通過效應蛋白來改變DNA結構，m6A可能通過效應蛋白改變DNA的二級結構，相應改變配對堿基的穩定性，從而影響DNA雙螺旋結構的形成，影響細胞活動及功能，以致疾病發生。在本研究中亦發現實施米非司酮預處理的葡萄胎患者，β-HCG、P及m6A水平均明顯降低，且呈現相同的趨勢，據此推斷葡萄胎可能與DNA甲基化有關，DNA甲基化可能參與了葡萄胎發生，但具體機制仍有待進一步研究，相關工作正在進行中。對葡萄胎給予米非司酮預處理后實施清宮術, 能夠降低二次清宮率，值得臨床推廣。