腸炎灌腸液的質量標準研究

羅群　蒲清榮　任桂林　李五生　黃銳

摘要：目的?研究建立腸炎灌腸液的質量標準，為生產質量提供保障。方法?采用薄層色譜法對腸炎灌腸液中白頭翁、秦皮、黃連、木香、當歸進行TLC鑒別;采用HPLC法測定腸炎灌腸液中鹽酸小檗堿的含量。結果?薄層色譜斑點清晰、分離度效果較好、且陰性無干擾;HPLC法測定腸炎灌腸液中鹽酸小檗堿的含量穩定、可靠，且陰性無干擾。結論?該方法準確可靠、專屬性強、重現性好，可作為腸炎灌腸液質量控制的有效方法。

關鍵詞：腸炎灌腸液;薄層色譜法;高效液相色譜法;鹽酸小檗堿

中圖分類號：R927.11?文獻標志碼：A?文章編號：1007-2349（2020）03-0079-04

腸炎灌腸液是是以白頭翁湯為基礎，反復優化而成，具有清熱解毒，涼血止痢，行氣止痛的功效，適用于濕熱內蘊型結腸病，癥見腹瀉、腹痛、黏液血便、里急后重、便秘等。該方由白頭翁、黃柏、酒黃連、秦皮、當歸、木香等8味中藥組成，具有多年臨床使用經驗，療效確切。

方中君藥白頭翁能明顯改善潰瘍性胃腸炎的創面潰瘍程度，能夠緩解里急后重、腹痛等癥狀[1]。故對白頭翁進行薄層鑒別。方中黃連的有效成分為小檗堿及黃連素，其主要藥理作用有抗病原體、抗菌、抗腹瀉、抗炎等[2];黃柏主要含有小檗堿、藥根堿、木蘭堿、黃柏堿等成分，其主要具有抗菌、抗潰瘍、提高免疫力、降血糖、降壓、抗氧化等藥理作用[3]。黃連、黃柏均含有小檗堿成分，而鹽酸小檗堿對痢疾桿菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、金葡菌、鏈球菌、傷寒桿菌及阿米巴原蟲均有抑制作用[4]，且處方用量大，因此鹽酸小檗堿含量直接關系到制劑的有效成分含量和藥物治療效果。故重點對該制劑中鹽酸小檗堿的采用HPLC進行含量測定，并同時對秦皮、當歸、木香、黃連藥材進行薄層鑒別，以期能夠全面掌握其質量控制標準。

1?儀器與材料

1.1?實驗材料?鹽酸小檗堿（批號：110713-201212）、白頭翁對照藥材（批號：121615-201302）、秦皮乙素（批號：110741-200506）、秦皮對照藥材（批號：121415-200702）、木香對照藥材（批號：120921-201309）、當歸對照藥材（批號：120927-201315）、黃柏對照藥材（批號：121510-201105）、黃連對照藥材（批號：120913-201310），均由中國食品藥品檢定研究院提供;去氫木香內酯（批號：MUST-11083101），由由成都曼思特生物科技有限公司提供;乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

1.2?實驗儀器?LC-20A高效液相色譜儀（日本島津）;SPD-20A紫外可見檢測器LCsolution色譜工作站;UltimateTM?C18鍵合硅膠柱（4.6?mm×250?mm，5?μm）;JPCT0328超聲波提取器（武漢嘉鵬電子有限公司）;JA203H電子天平（常州市幸運電子設備有限公司）;AUW120D電子天平（日本島津）GOODLOOK-LOOK型薄層色譜成像系統（上海科哲生化科技有限公司）;HH數顯電熱恒溫水浴箱（江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠）。

2?方法與結果

2.1?TLC鑒別

2.1.1?腸炎灌腸液中白頭翁的薄層色譜鑒別?取本品20?mL，用正丁醇振搖提取2次，每次30?mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇5?mL使溶解，作為供試品溶液。另取白頭翁對照藥材1?g，加甲醇10?mL，超聲處理30?min，濾過，取濾液作為對照藥材溶液。除白頭翁外，其余藥材按照腸炎灌腸液制備方法，制備方式同供試品溶液，作為陰性對照。照薄層色譜法（中國藥典2015版四部通則0502）試驗，吸取供試品溶液3～4?μL，對照藥材溶液5?μL，分別點于同一硅膠G?薄層板上，以正丁醇-醋酸-水（4：1：2）上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性樣品無干擾[5-6]，見圖1。

圖1?腸炎灌腸液白頭翁薄層色譜圖

1.白頭翁對照藥材;2～4.供試品;5.陰性樣品

2.1.2?腸炎灌腸液中秦皮的薄層色譜鑒別?取本品20?mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20?mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1?mL使溶解，作為供試品溶液。另取秦皮對照藥材1?g，加甲醇10?mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1?mL，作為對照藥材溶液。另取秦皮乙素對照品，加甲醇制成每1?mL含1?mg的溶液，作為對照品溶液。按處方（除秦皮藥材外）與制法，制成陰性對照樣品，其余處理同供試品溶液，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015版四部通則0502）試驗，吸取上述溶液各10?μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：3：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365?nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性樣品無干擾[7]，見圖2。

圖2?腸炎灌腸液秦皮薄層色譜圖

（1.秦皮對照藥材;2.秦皮乙素;3～5.供試品;6.陰性樣品）

2.1.3?腸炎灌腸液中木香的薄層色譜鑒別?取本品50?mL，用三氯甲烷振搖提取2次，每次50?mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1?mL使溶解，作為供試品溶液。另取木香對照藥材1?g，加甲醇10?mL，超聲處理30?min，濾過，濾液濃縮至1?mL，作為對照藥材溶液。另取去氫木香內酯，加甲醇制成每1?mL含1?mg的溶液，作為對照品溶液。按處方（除木香藥材外）與制法，制成陰性對照樣品，其余處理同供試品溶液，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2015版四部通則0502）試驗，吸取上述溶液各10?μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-丙酮（10：3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105℃下加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性樣品無干擾[8-9]，見圖3。