RP-HPLC測定蘭索拉唑制劑中主藥及有關物質的含量

劉丹花，高 青

（鄭州澍青醫學高等?？茖W校，河南 鄭州 450064）

蘭索拉唑是第二個質子泵抑制類抗潰瘍藥物，于1992年正式投放于法國市場，國內劑型主要有兩種，即膠囊劑、片劑，規格同樣有兩種即15、30 mg，注射用已經獲得FDA批準，但是國內市場上尚未進行銷售[1]。為確保國內臨床用藥的需求得到充分滿足，現對注射用與蘭索拉唑腸溶片進行了研究，為更好地控制其治療可使用蘭索拉唑含量測定高效液相色譜法，這種是一種操作簡單、準確、快速、重現性好的方法，能夠更好地分離、測定相關檢測對象物質組成、主藥的具體含量值。

1 儀器和試藥

儀器：本次試驗使用的設備包括高效液相色譜儀、紫外檢測器及工作站。

試藥：準備蘭索拉唑對照品與該藥物的注射劑、口服腸溶片，準備的甲醇包括色譜醇、分析醇。

2 方法與結果

2.1 色譜條件和行為

（1）色譜柱：Shim-packC18；（2）流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸，1.0 ml/min-1；（3）檢測波長：284 nm；（4）進樣量20 uL。理論塔板數應大于1500，具體計算時需要嚴格按照蘭索拉唑峰。

2.2 制備對照品、供試品溶液

（1）在棕色量瓶50ml放置精密稱取的40 mg對照品，溶解時可以加入甲醇，稀釋至刻度，充分搖勻后備用[2]。

（2）取5瓶注射用蘭索拉唑、10片去腸溶衣的蘭索拉唑腸溶片，將內容物傾出以后研細，進行準確的稱量，在25 mL棕色量瓶中放置，溶解時加入流動相并稀釋到刻度，充分搖勻后取精密量2 mL，同樣在25 mL棕色量瓶中放置，組委供試品1、2溶液備用；另外，關于不含主藥空白輔料的制備可分別根據注射用與腸溶片處方比例、制備工藝進行制備，關于空白供試品1、2溶液的制作可嚴格按照“供試品”項下方法。

2.3 考察線性關系

對照品溶液分別精密程度0.5 mL、2.0 mL、、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、10.0 mL，在25 mL棕色量瓶中分別放置，稀釋到刻度，搖勻后便可得到相應系列溶度；然后分別注入液相色譜儀20 uL，以此將色譜圖詳細記錄下來，關于標準曲線地繪制分別取濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標。經結果可知，濃度與色譜峰面積在16～320 ug·mL-1內的線性關系滿足相關要求

2.4 精密度試驗

從蘭索拉唑對照品中，取出一部分溶液進行進樣處理（重復），溶液取出量控制為20 uL，之后進行峰面積積分制測定時，要求嚴格根據上述色譜條件，精密度較好的條件為RSD=0.90%（n=6）[3]。

2.5 重復性試驗

在同一批注射用、腸溶片中進行精密的稱取，關于溶液的制備需要嚴格按照供試品1、2方法，按照對照品同樣的方法進行操作，20 uL進樣，認真記錄色譜圖，其含量的計算需采用外標法，注射用藥物、口服用腸溶片兩種藥物的RSD分別為0.83%、0.90%，結合該結果說明該試驗效果好。

2.6 輔料干擾試驗

待試驗條件最終確定以后，各取20 uL空白供試品1、2溶液，為記錄色譜圖可將液相色譜儀注入。研究發現，對于蘭索拉唑峰輔料不會產生干擾作用，主峰和雜之峰之間具有良好的分離度。

2.7 最低檢測限

試驗條件確定后，在測定最低檢測限進時可根據信噪比（S/N=3）進行，結果可知：在50 ng·mL-1濃度、20ul進樣條件下，其峰信號是噪音的3倍，即最低檢測限=1 ng。

2.8 回收率試驗

稱取10瓶處方量輔料，在研體缽中放置、搖勻后研細，然后取10瓶處方量的80%、100%、120%，加入，制作濃度不同的模擬樣品，即低、中、高，上述細粉取適量，放置在25 mL棕色量瓶中，通過加入適量甲醇并振蕩的方式來溶解主藥，稀釋到刻度后搖勻，作為供試品溶液；另外，在研缽中放置腸溶片10片處方量輔料，以下同注射用回收率試驗制備。取上述兩種溶液進樣各20 uL，關于項下條件的測定需嚴格根據含量進行，對回收率進行計算，以此注射用的平均回收率為100.0%、RSD為1.08%，腸溶片尾99.63%、1.03%[4]。

2.9 測定樣品含量

對照溶液和供試品1、2溶液各取20 uL，注入液相色譜儀，將色譜圖記錄下來，關于其含量的計算可采用外標法，結果如下表1。

2.10 檢測相關物質

精密稱取適量的注射用、腸溶片，在25 mL棕色量瓶中放置，稀釋溶解到刻度、溶解，當作供應品溶液；分別取1 mL，在100 mL棕色量瓶中放置參照量瓶刻度值進行溶液稀釋處理，待該項工作結束后可輕輕搖勻量瓶，于對照溶液中取出適量溶液，取出量控制為20 uL，使用液相色譜儀對這些溶液作以處理，在設備靈敏度符合檢查要求的情況下進行相關物質檢查，要求主成分峰峰高參考滿量程標準，為其20%、不超過25%，然后各稱取20 uL在液相色譜儀中注入，將色譜圖到保留主成分峰的3倍記錄下來。如果色譜圖中存在雜質峰，則需要對各雜質峰面積進行科學的量取，對有關物質量進行科學的計算，如上表1。

表1 樣品含量和有關物質測定結果（%）

3 討 論

為有效分離蘭索拉唑和輔料，可通過HPLC建立的方式，二者之間的分離度不得小于1.5，具有較高的色譜柱效[5]。本品與色譜峰面積具有良好線性關系的濃度范圍為16～320 ug·mL-1，經含量測定所取得回收率較高，且重現性良好，輔料和有關物質均不會對其產生干擾，在臨床上所具有的可靠性、準確性與靈敏度較高，有助于提高相關制劑質量。