Apelin-13通過調節YAP入核抵抗缺氧誘導的視網膜Müller細胞凋亡

孫 磊，陶 勇

0引言

愛帕琳肽(Apelin/APLN)是由77個氨基酸構成的多肽，為血管緊張素樣G蛋白偶聯受體(APJ)的配體[1]。Apelin-13是Apelin的亞型之一，在心血管系統、神經系統、內分泌系統及消化系統中發揮重要生物學作用[2]。Müller細胞為脊髓動物視網膜中的主要神經膠質細胞，表達多種功能性的酶，對視網膜結構和功能維持具有重要作用[3]。生理條件下，Müller細胞能支持血-視網膜屏障的完整性，而病理條件下其可參與視網膜水腫形成[4]。研究顯示，Apelin能誘導Müller細胞對缺氧或葡萄糖剝奪的耐受[5]。另有研究報道，Apelin-13通過GLP-1R/PI3K/Akt信號通路抑制神經細胞凋亡，并減輕蛛網膜下腔出血后的早期腦損傷[6]。還有研究顯示，Apelin-13可能通過調節膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic portein，GFAP)和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表達從而介導Müller細胞的增殖、遷移及存活[7]。提示，Apelin-13與Müller細胞存活或凋亡有關。yes相關蛋白(yes-associated protein，YAP)為一種轉錄共激活因子，主要在Hippo通路下游發揮細胞增殖和凋亡調控作用[8]。目前，還未有研究報道YAP是否與Apelin-13介導的細胞存活或凋亡相關，本研究主要對此進行探討。

1材料和方法

1.1材料胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、DMEM/F12培養基購自美國Gibco公司；YAP抗體(貨號4912)、GFAP抗體(貨號80788S)、Phospho-YAP(Ser127)(D9W2I)抗體(貨號13008)、Phospho-LATS1(Ser909)抗體(貨號9157)購自美國CST公司；LATS1抗體購自美國abcam公司(貨號ab70561)；GAPDH抗體(貨號AP0063)、抗兔IgG-HRP二抗(貨號BS13278)、抗小鼠IgG-HRP二抗(貨號BS12478)購自南京巴傲得公司；總蛋白提取試劑盒和細胞裂解液購自上海碧云天公司；聚偏二氟乙烯膜(PVDF)購自美國Millipore公司。主要儀器設備：Elx808全波段多功能酶標儀，美國BioTek公司；AI600凝膠成像儀，美國GE公司；PIPETMAN L微量可調加樣器，法國Gilson公司產品； Allegra 64R Centrifuge臺式高速冷凍離心機，美國Beckman Coulter公司產品；……