TREM-1在大鼠腦出血后繼發(fā)性腦損傷中的作用機制〔1〕

段紅玲，孫新剛，張咪咪，侯雅芝

(1.山西醫(yī)科大學(xué)，山西 太原 030001；2.山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，山西 太原 030001；3.山西省心血管病醫(yī)院，山西太原 030024)

髓系細胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)是介導(dǎo)炎癥發(fā)生與放大并導(dǎo)致組織損傷的關(guān)鍵介質(zhì)[1]，但與腦出血(ICH)后繼發(fā)性腦損傷形成的關(guān)系不明[2]。本研究擬探索TREM-1在大鼠ICH后繼發(fā)性腦損傷形成中的作用機制，報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

健康雄性SD大鼠36只，體質(zhì)量250～300 g。采用隨機數(shù)字表法將大鼠分為假手術(shù)組、ICH組、ICH+LP17組，每組12 只，其中6 只用于檢測腦組織含水量，6只用于實時熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測TREM-1通路的表達。

1.2 動物模型制作

參照文獻[3]方法，采用自體注血法制作ICH模型。將100 μL自體新鮮股動脈血注入大鼠尾狀核，制作大鼠腦出血模型；所有動物均于術(shù)后3 d處死。ICH+LP17組采用上述相同手術(shù)后，再于術(shù)后30 min使用TREM-1特異性抑制劑(LP17)實施干預(yù)，LP17(3.5 mg/kg)使用時將其溶于0.5 mL生理鹽水中經(jīng)大鼠腹腔注射[4]；假手術(shù)組采用相同手術(shù)過程但不注血。

1.3 腦組織含水量檢測

大鼠麻醉后迅速斷頭取腦，用濾紙吸干腦組織表面水分，稱量濕重，再將腦組織置于100 ℃的恒溫干燥箱烘烤24 h稱取其干重，腦組織含水量(%)=(濕重-干重)/濕重×100%[5]。

1.4 RT-PCR法檢測TREM-1通路的表達

采用TRI zol法提取血腫周圍腦組織細胞總RNA[6]，嚴格按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作步驟將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并進行熒光定量PCR操作，分別以TREM-1、P38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)與β-actin的比值表示其相對水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠腦組織中TREM-1和p38MAPK及ERK1/2表達水平比較

與假手術(shù)組相比，ICH組血腫周圍腦組織中TREM-1，p38MAPK及ERK1/2的表達均升高；與ICH組比較，使用LP17后，TREM-1及其下游的p38MAPK和ERK1/2表達均明顯減少，但仍高于假手術(shù)組(見表1)。

表1 三組腦組織中TREM-1和p38MAPK 及ERK1/2表達水平比較

2.2 三組大鼠腦組織含水量比較

與假手術(shù)組相比，ICH組和ICH+LP17組大鼠腦組織含水量顯著增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與ICH組相比，ICH+LP17組的大鼠腦含水量顯著降低(P<0.05)(見圖1)。

圖1 三組大鼠腦含水量比較圖

2.3 大鼠腦組織TREM-1表達與p38MAPK/ERK1/2表達及腦含水量的相關(guān)性

大鼠腦組織中TREM-1的表達與p38MAPK(r=0.850，P<0.001)(見圖2A)及ERK1/2(r=0.815，P<0.001)(見圖2B)的表達和腦組織含水量(r=0.827，P<0.001)(見圖2C)均呈正相關(guān)。

3 討 論

ICH是一種具有高病死率及高致殘率的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，繼發(fā)性腦損傷是導(dǎo)致其預(yù)后不佳的重要原因[2]，積極探討繼發(fā)性腦損傷的形成機制并進行干預(yù)，其臨床意義重大。炎癥反應(yīng)在ICH后繼發(fā)性腦損傷形成過程中起重要作用[7]，多種炎性介質(zhì)已被證實與ICH后繼發(fā)性腦損傷的形成密切相關(guān)[7-8]，但到目前為止，尚無針對這些炎癥介質(zhì)的藥物可應(yīng)用于臨床并觀察到明確療效[8]，提示仍有其他炎性因子的參與。TREM-1是導(dǎo)致多種炎癥反應(yīng)發(fā)生與放大的關(guān)鍵介質(zhì)[9]，TREM-1是否與ICH后炎癥反應(yīng)及后續(xù)腦損傷有關(guān)目前尚無研究。本研究發(fā)現(xiàn)ICH大鼠血腫周圍腦組織中TREM-1表達明顯升高，說明TREM-1可能與ICH后腦組織損傷的形成密切相關(guān)。結(jié)果表明，TREM-1可通過激活下游p38MAPK/ERK1/2途徑參與ICH后繼發(fā)性腦損傷的形成，抑制TREM-1的表達，可使ICH大鼠腦組織損傷明顯減輕，這一研究結(jié)果可為探索ICH后繼發(fā)性腦損傷的形成機制提供新思路，提示TREM-1有望成為治療ICH后繼發(fā)性腦損傷的藥物作用新靶點。

圖2 大鼠腦組織中TREM-1表達與p38MAPK(A)和ERK1/2(B)的表達及腦組織含水量(C)相關(guān)性示意圖