MMP-9、CD15s在乳腺癌組織中的表達及其相關(guān)性①

尹佳新，田 寅，葛忠耀，劉應紅，徐 雷，于 娜

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院腫瘤外科，黑龍江 佳木斯 154003)

女性乳腺癌發(fā)病率呈逐年升高。觀察統(tǒng)計近年來女性乳腺癌發(fā)病情況，從地方范圍到全國范圍發(fā)病率均呈現(xiàn)逐年上升的趨勢[1]。Jin[2]統(tǒng)計研究得出各個年齡段的乳腺癌發(fā)病率都有所增加,其中青年女性(24～35歲)增高比例最大。由以上數(shù)據(jù)可看出，女性乳腺癌發(fā)病率的增長已不容忽視,如何根據(jù)其臨床病理學特點有針對性的制定綜合治療方案,從而提高患者的早期診斷成為了臨床重點。

1 材料與方法

1.1 材料

收集佳木斯大學附屬第一醫(yī)院病理科2012-02～2018-09收撿的手術(shù)標本存檔蠟塊118例，依據(jù)其免疫組化染色結(jié)果分為陽性表達組(實驗組)和陰性表達組(對照組)，所有標本均經(jīng)術(shù)后病理證實為乳腺癌，年齡在22～68歲。

1.2 試劑

免疫組化s-p法鼠抗人 MMP-9 單克隆抗體、鼠抗人 CD15s 單克隆抗體、 DAB顯色試劑盒等試劑盒購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。文中主要涉及的儀器為倒置顯微鏡及顯微鏡照相系統(tǒng),病理組織包埋機,免疫組化專用抗原修復架及修復盒。

1.3 方法

運用免疫組織化學技術(shù)檢測乳腺癌患者組織中MMP-9、CD15s的表達情況，由兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師進行雙盲閱片。

1.4 結(jié)果判定

組織結(jié)構(gòu)及背景清晰,MMP-9蛋白陽性表達為胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，CD15s抗原陽性表達為在腺腔緣、細胞膜和( 或) 細胞漿中信號呈棕黃色。無陽性染色細胞為“-”，陽性細胞數(shù)<25%為“+”，陽性細胞數(shù)25%～50%為“”，陽性細胞數(shù)>50%為“”。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用 SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。根據(jù)實驗要求，標本的陽性率的比較采用χ2檢驗，分析MMP-9 及CD15s在乳腺癌組織中的表達是否具有相關(guān)性，采用Spearman 相關(guān)等級分析，P<0.05為有顯著性的檢驗標準。

2 結(jié)果

2.1 病理結(jié)果

通過免疫組織化學方法對實驗標本進行檢測，結(jié)果顯示MMP-9蛋白陽性表達為在細胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒、CD15s抗原陽性表達為在細胞膜和細胞漿中呈棕黃色信號，本實驗標本中MMP-9的陽性表達68例，CD15s陽性表達81例。見圖1～4。

圖1 MMP-9在乳腺癌組織中高表達(×400)

圖2 MMP-9在乳腺癌組織中低表達(×400)

圖3 CD15s在乳腺癌組織中高表達(×400)

圖4 CD15S在乳腺癌中低表達(×400)

2.2 MMP-9、CD15s與相關(guān)臨床參數(shù)

本組實驗對118例乳腺癌組織進行免疫組化染色，其中MMP-9陽性表達組患者同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例(67.6%)顯著高于陰性表達組23例(46.0%)，有統(tǒng)計學差異(χ2=5.560，P=0.015)；MMP-9陽性表達組患者有脈管癌栓39例(57.3%)顯著高于陰性表達組19例(38.0%)，差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=7.408，P=0.006)；CD15s陽性表達組患者同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例(70.4%)顯著高于陰性表達組15例(40.5%)，有統(tǒng)計學差異(χ2=9.778，P=0.002)；CD15s陽性表達組患者有脈管癌栓45例(55.6%)顯著高于陰性表達組11例(29.7%)，差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=6.506，P=0.009)。按照癌癥聯(lián)盟委員會( AJCC) TNM分期標準進行分期，MMP-9陽性表達組I期、II期患者 48例、陰性表達組I期、II期患者42例，陽性表達組III期患者20 例，低表達組III患者 8例，兩組數(shù)據(jù)相比較，MMP-9高表達III期患者比例高于陰性表達組，差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=2.865 ,P=0.049)。CD15s陽性表達組I期、II期患者60 例、陰性表達組I期、II期患者 30 例，陽性表達組III期患者19 例，陰性表達組III患者9 例，兩組數(shù)據(jù)相比較，CD15s陽性表達組III期患者比例高于陰性表達組，差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=6.145,P=0.015)。見表1。

表1 MMP-9、CD15s與臨床參數(shù)分析

2.3 MMP-9、CD15s與相關(guān)病理參數(shù)

MMP-9高表達組患者ER陽性表達26例顯著低于低表達組36例，差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)；MMP-9陽性表達組患者PR陽性表達32例(47.5%)顯著低于陰性表達組34例(68.0%)，差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)；MMP-9陽性表達組Ki67值>14%為46例(61.8%)高于陰性表達組27例(54.0%)但統(tǒng)計學分析并無明顯差異(P﹥0.05)；.MMP-9陽性表達組HER-2高表達33例(48.5%)顯著高于陰性表達組16例(30.6%)，差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達組ER陽性表達35例(43.2%)陽性表達率顯著低于陰性表達組25例(67.6%)，差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達組PR陽性表達35例(43.2%)其與陰性表達組19例(51.3%)相比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；CD15s陽性表達組KI67值>14%為55例(67.9%)顯著高于陰性表達組14例(37.8%)，差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)；CD15s陽性表達組HER-2高表達45例(55.6%)顯著高于陰性表達組15例(40.5%)，差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)。見表2。

表2 MMP-9、CD15S與病理參數(shù)的分析

2.4 MMP-9、CD15s與年齡因素的影響

染色分析比較年齡≤40歲患者乳腺癌組織中MMP-9的染色強度()比例顯著高于>40歲患者,差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)；年齡≤40歲患者乳腺癌組織中CD15S的染色強度()比例顯著高于>40歲患者,差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)。見表3。

表3 年齡與MMP-9、CD15s表達強度的關(guān)系

3 討論

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多環(huán)節(jié)影響的十分復雜的過程。區(qū)分良性腫瘤和惡性腫瘤最重要的特征是惡性腫瘤細胞可以相對無限地浸潤、增殖和轉(zhuǎn)移。如何控制腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥治療中的重難點。

本研究結(jié)果認為同側(cè)腋窩淋巴結(jié)情況隨MMP-9的表達增高而增高。Yang證實了MMP-9的高表達能影響乳腺癌的生物學行為并與其淋巴結(jié)受累有關(guān)，與本實驗結(jié)果相一致。研究表明Basal-like型乳腺癌患者MMP-9 陽性者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于非Basal-like型[3]。結(jié)果提示MMP-9陽性表達組患者ER、PR陽性表達率顯著低于陰性表達組，研究認為雌激素在大部分組織中都表現(xiàn)出對MMP-9的抑制效應,在不同的組織器官中可能會通過不同的途徑對MMP-9進行調(diào)控。本研究認為MMP-9的高表達與雌激素的作用紊亂相關(guān)，可能與某種調(diào)節(jié)機制解除了雌激素對MMP-9的抑制作用有關(guān)，有待進一步研究，本組數(shù)據(jù)顯示MMP-9陽性表達組患者有脈管癌栓顯著高于陰性表達組，國外學者研究認為MMP- 9在乳腺侵襲性導管癌中高表達，與組織學分級和總的生存率密切相關(guān)[4]。

本實研究結(jié)果認MMP-9的染色強度與年齡及乳腺癌的侵襲性相關(guān)。與Cepeda[5]研究結(jié)果認為MMP-9在乳腺癌中的表達強度越高其預后越差的報道相一致。Liang[6]研究通過COX 多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)是影響總生存的獨立危險因素。研究表明MMP-9可以通過增強血管內(nèi)皮因子和其受體的結(jié)合體功能，從而促進血管和淋巴管的生長。另外，MMP-9通過能加工GTGF，阻止其與VEGF結(jié)合釋放血管內(nèi)皮因子，從而促進血管新生的過程，腫瘤組織內(nèi)豐富的血管網(wǎng)為腫瘤細胞的增殖、生物侵襲提供所需的營養(yǎng)物質(zhì)。

本組實驗數(shù)據(jù)顯示CD15s陽性表達組患者同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于陰性表達組同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。與Renkonen研究結(jié)果相同認為乳腺癌組織中E-選擇素和其配體CD15s同時表達,腫瘤細胞具有更高的侵襲性。此外Wata[7]通過監(jiān)測小細胞肺癌患者術(shù)前的血清唾液酸路易斯酶X值來預測患者術(shù)中的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和術(shù)后的生存率，結(jié)果認為CD15s的檢測對于術(shù)前評估及預后有重要臨床價值。研究認為PR是除腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況外另一個重要的預后指標, PR陽性患者較ER陽性患者更能從內(nèi)分泌治療中獲益。PR陰性導致癌細胞在增殖過程激素受體表達減少造成對內(nèi)分泌治療反應差或無反應, 加之HER-2過表達, 因此多數(shù)患者需要行化療及靶向治療。

有研究認為腫瘤細胞表面CD15s表達量與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、預后密切相關(guān)。其表達強度與患者預后生存期呈負相關(guān)性。有研究發(fā)現(xiàn)選擇素配體CD15s在乳腺癌組織中濃度增加，其遠處轉(zhuǎn)移的患者血漿中增加顯著。Dong[8]研究認為SLeX表達狀況與乳腺癌轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)且SLeX陽性患者復發(fā)率較高，發(fā)現(xiàn)年齡為影響其表達的因素，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移屬于保護性因素, 而較小的年齡是復發(fā)的危險因素。

尚培中等[9]在胃癌中進行的MMP-9與CD15s實驗分析，其結(jié)果認為共同表達組胃癌微血管密度高于單表達組胃癌的微血管密度,共同表達組的臨床分期、組織學分級均高于對照組。認為MMP-9降解細胞外基質(zhì)消除了基質(zhì)中抑制內(nèi)皮細胞增殖的物質(zhì), 給CD15s促進內(nèi)皮細胞的增殖表達CD62創(chuàng)建了條件，CD62與其配體CD15s相結(jié)合在腫瘤細胞中發(fā)揮特定的生物學作用，通過將編碼人類α1,2-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因的一部分cDNA轉(zhuǎn)染到卵巢癌中，建立了組成型表達Lewis抗原的穩(wěn)定細胞系RMG-1，發(fā)現(xiàn)RMG-1-hFUT細胞顯示出比對照組更高的侵襲能力，認為Lewis抗原可以下調(diào)MMPs抑制劑TIMP-1、2從而上調(diào)MMP-9是Lewis抗原促進細胞侵襲的機制之一。MMP-9、CD15s在腫瘤細胞中協(xié)同發(fā)揮作用促進腫瘤細胞的浸潤及轉(zhuǎn)移[10]。揭示了MMP-9和CD15s在惡性腫瘤中的相互協(xié)調(diào)促進作用。

本研究認為MMP-9在女性乳腺癌中的表達隨著同側(cè)淋巴結(jié)處轉(zhuǎn)移的增多、脈管癌栓、HER-2過表達發(fā)生率的逐漸增高，CD15s的表達也隨之升高。本實驗表明MMP-9、CD15s的表達與乳腺癌腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為聯(lián)合檢測的相關(guān)指標。但是本實驗樣本量較小，其結(jié)果具有一定局限性,尚需進一步實驗研究。