不同采收期亳白芍淀粉含量比較

韓 婷，胡 雨，許鳳清，金傳山*

(1.安徽中醫藥大學第一附屬醫院，安徽 合肥 230031；2.安徽中醫藥大學 藥學院，安徽 合肥 230012)

白芍始載于《神農本草經》，為毛茛科植物芍藥(PaeoniaelactifloraPall) 的干燥根，具有平肝止痛、養血調經、斂陰止汗的功效[1]。白芍主產于我國四川、貴州、安徽、山東、浙江等省[2]，據《中國中藥區劃》一書記載，主產于亳州沿渦河兩岸潮沙土一帶的芍藥稱“亳白芍”。 藥材中富含以芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥苷等為主的蒎烷型單萜及其苷類化合物，其內在質量的優劣亦是以該類成分含量的多寡為評價依據[3-8]。白芍傳統以質堅實、粗肥勻、粉性足者為佳[9-10]。“粉性”作為白芍外觀性狀，未見相關研究。研究白芍淀粉含量與質量之間的相關性，將在一定程度上揭示白芍“粉性”描述的科學內涵。本文建立了高氯酸水解-蒽酮法測定亳白芍淀粉的含量，并對7月-11月時間段內采收的亳白芍中淀粉含量進行測定。

1 儀器與材料

UV759CRT紫外可見分光光度計(上海佑科儀器儀表有限公司)；Centrifuge 5810R離心機；MiLLi-QAdvantage 超純水機(美國 MiLLipore 公司)；HL-200A型打粉機(上海塞耐機械有限公司)；淀粉對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號140602-200313)；蒽酮試劑(實驗室現配)，乙醇，高氯酸分析純，水為超純水。

白芍藥材于2015年7月-11月采于安徽亳州市譙城區十九里鎮，經安徽中醫藥大學彭華勝教授鑒定為毛茛科植物芍藥P.lactifloraPall.的干燥根。標本存放于安徽中醫藥大學炮制研究室，標本號為BS2015YP-1～ BS2015YP-10。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液制備

取淀粉對照品適量，精密稱定。置于50 mL 燒杯中，加入2.5 mL水和32.5 mL 50 % 高氯酸溶液，攪拌至完全溶解，轉移至容量瓶中，加水定容至50 mL。精密吸取上述溶液1 mL，加水定容至50 mL，得到濃度為41.84 μg/mL的淀粉對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備[11]

取亳白芍藥材粉末0.1 g，精密稱定。置于50 mL 離心管中，加入80%乙醇潤濕藥材粉末，加5 mL水，搖勻；續加80% 乙醇(25 mL)，震蕩混勻后，靜置5 min，3 000 rpm 離心5 min，傾出上清液。殘渣加30 mL 80% 乙醇溶液重復上述操作1次。沉淀中加入17.5 mL的水-50% HClO4(1∶6，v/v)，震蕩10 min，靜置，以3 000 rpm離心10 min，上清液轉移至50 mL容量瓶中；殘渣用17.5 mL 50% HClO4溶液按上述操作提取1次。合并兩次提取液，加水定容、過濾，棄去5 mL 初濾液。精密吸取2 mL 濾液轉移至100 mL 容量瓶中，加水定容，得到供試品溶液。

2.3 最大吸收波長的確定

精密吸取淀粉標準溶液及隨機供試品溶液2 mL，分別置于10 mL具塞試管中，加入6 mL 蒽酮-硫酸溶液，搖勻，冰水中冷卻3 min，沸水浴5 min，取出，冷卻至室溫。用2 mL 蒸餾水同法制得空白液，記錄紫外-可見分光光度儀400～800 nm波長范圍內吸收曲線。結果表明，對照品及供試品溶液在455 nm處均有最大吸收。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察 精密吸取0.4 、0.6 、0.8 、1.0 、1.2、 1.4、1.6 mL 淀粉標準溶液，置于10 mL 潔凈具塞試管中，加水調整各試管溶液均為 2.0 mL，按“2.3”項下方法，在455 nm 波長處測定吸光度。以淀粉質量(μg)為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，回歸得線性方程：y=0.007 8x-0.010 4，r= 0.999 5。結果表明，淀粉在16.736～66.964 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取淀粉對照品溶液2.0 mL，置于10 mL 潔凈具塞試管中，按“2.3”項下方法，在455 nm 波長處測定吸光度，平行5次，RSD=1.49%(n=5)。結果表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復性試驗 取亳白芍粉末適量，精密稱取，按照“2.2”項制備供試品溶液，平行5份。分別取制備的樣品溶液2.0 mL，測定沸水浴顯色后溶液的吸光度，計算其淀粉含量。測得亳白芍淀粉平均含量為43.35%，RSD=1.79%。結果表明供試品重現性良好。

2.4.4 穩定性試驗 取沸水浴顯色后的同一樣品溶液，分別在0、20 、40、60 、80 、100 min后測定吸光度，記錄吸光度值，計算其淀粉含量，其RSD=1.67%。結果表明樣品常溫放置，100 min內穩定。

2.4.5 加樣回收率試驗 稱取已知淀粉含量的同一樣品6份，分別添加適量淀粉對照品，按“2.2”項下制備進行處理并進行含量測定，計算加樣回收率，結果見表1。加樣回收率在99.10%～102.14%之間，平均回收率為100.33%，符合含量測定的要求。

表1 加樣回收率試驗結果

2.5 樣品測定

按照上述方法，測定樣品溶液的吸光度。計算公式：淀粉(%)={M淀粉/[8M樣品(1-W水分)]}%，其中M淀粉是由亳白芍樣品溶液的吸光度經過線性公式計算出來的質量，單位是μg；M樣品為稱樣量，單位是g；W水分為樣品含水量。分別測定不同采收期亳白芍樣品中淀粉的質量分數，結果見表2和圖1。結果表明亳白芍藥材的采收期不同，其淀粉含量相差較大。亳白芍中淀粉的含量在7月下旬至11月上旬之間呈現先升高后降低的趨勢，在9月中旬至10月上旬淀粉含量較高且穩定。

表2 不同采收期亳白芍樣品淀粉含量測定結果 (n=3)

圖1 淀粉含量與采收期關系

3 討論

研究采用高氯酸水解-蒽酮法對白芍傳統的采收時間內，各采收時間點的亳白芍藥材中淀粉的含量進行測定，結果表明亳白芍淀粉的含量在7月下旬至11月上旬之間呈現先升高后降低的趨勢，在9月中旬至10月上旬淀粉含量較高且穩定，與白芍傳統的采收季節多為農歷的8月中旬至9月中旬相一致[12]。對亳白芍不同采收期芍藥苷與白芍總苷的含量變化考察時亦發現該時間段內亳白芍的有效成分的含量處于相對穩定的狀態[13-14]。

傳統上白芍以“粉性足、質堅體沉”為優。借鑒《76種藥材商品規格標準》，本試驗結合藥材的外觀性狀，得出淀粉含量高低與白芍藥材的表面粗糙程度，即藥材的表面越糙，其粉性小，淀粉含量也低，反之亦然。由此可見白芍藥材表面粗糙程度與淀粉含量的高低直接相關。因此，淀粉含量可以作為白芍“辨狀論質”或分級的內控指標之一。至于“粉性足”與其藥材質量間的科學內涵有待更為深入的探討。