不同采摘時間天胡荽揮發(fā)油成分GC-MS分析

熊 峻，佘金明，劉宏偉*，王 虹，龔力民

(1.常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 常德 415000；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，湖南 長沙 410000)

天胡荽為傘形科天胡荽屬植物天胡荽HydrocotylesibthorpioidesLam的全草，具有清熱利濕、解毒消腫等功效，主要用于治療黃疸、痢疾、水腫、淋癥、目翳、喉腫、癰腫瘡毒、帶狀皰疹、跌打損傷等[1]。目前對天胡荽化學(xué)成分揮發(fā)油、黃酮類等物質(zhì)的提取和含量測定較多[2-8]，而對于不同采收時間天胡荽揮發(fā)油的組分分析尚未見報道。為了更好地開發(fā)湖南的天胡荽資源，本實驗采用水蒸氣蒸餾法提取不同采收時間天胡荽的揮發(fā)油，通過GC-MS對其成分進(jìn)行分析鑒定，定量定性分析不同采收時間天胡荽揮發(fā)油的含量及組分變化，探討天胡荽揮發(fā)油組分的季節(jié)性差異，以期為湖南天胡荽資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材、試劑與儀器

實驗用天胡荽樣品共6批分別于2019年3月12日(編號20190312)、4月15日(編號20190415)、5月14日(編號20190514)、6月12日(編號20190612)、7月11日(編號20190711)、8月10日(編號20190810)采自湖南省常德市穿紫河沿岸，經(jīng)常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)系佘金明教授鑒定無誤。

氣質(zhì)聯(lián)用儀為GC-MS QP2010(日本島津公司)，彈性石英毛細(xì)管柱DB-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm，日本島津公司)，GC-MS Solution色譜工作站(日本島津公司)。萬分之一電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)，乙酸乙酯(湖南匯虹試劑有限公司)，無水硫酸鈉(湖南匯虹試劑有限公司)，水蒸氣蒸餾簡易裝置。

1.2 實驗方法

1.2.1 揮發(fā)油提取 將6批不同時間采收的天胡荽半陰干品剪碎，各精密稱取50 g，分別置于1 000 mL圓底燒瓶中，加入500 mL蒸餾水，上接揮發(fā)油提取器和冷凝管，回流提取8 h。用適量乙酸乙酯洗脫揮發(fā)油，充分搖勻靜止后，取油層，用無水硫酸鈉干燥，用乙酸乙酯定容至4 mL，用0.45 μm微孔濾膜過濾，得供試品。

1.2.2 氣相色譜-質(zhì)譜條件 設(shè)置程序，程序升溫：起始溫度40 ℃，保持6 min，以10 ℃/min升溫到150 ℃保持1 min，再以5 ℃/min升溫到240 ℃保持11 min至完成分析；氣化室溫度為250 ℃；載氣為氦氣，流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為1 μL，分流比為15∶1；電離方式為EI源，70 eV；離子源溫度為200 ℃；溶劑延遲3 min；質(zhì)量掃描范圍35～500 amu；SCAN掃描。質(zhì)譜檢索標(biāo)準(zhǔn)庫：美國NIST質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，人工圖譜解析，采用峰面積歸一化法定量分析各組分相對百分含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 揮發(fā)油總量比較

按“1.2.1”所述方法分別提取6批天胡荽的揮發(fā)油，所得的揮發(fā)油含量均約為0.15 mL，表明不同時間采收的天胡荽揮發(fā)油含量無顯著差異。

2.2 不同采收期揮發(fā)油組分分析

注：1.醋酸正丙酯；2.欖香烯；3.(E)-β-法呢烯；4.氧化石竹烯；5.α-紅沒藥醇；6.新植二烯；7.n-棕櫚酸；8.鐮葉芹醇；9.葉綠醇。

按“1.2.2”所述方法分別獲得6批天胡荽揮發(fā)油成分總離子流色譜，如圖1所示。對色譜圖中匹配度>85%的成分進(jìn)行分析鑒定，共鑒定出60個化合物。3月、4月、5月、6月、7月、8月樣品中鑒定出的揮發(fā)油成分分別為27個、29個、22個、29個、29個和27個。見表1。

表1 不同采摘時間天胡荽揮發(fā)油成分和相對面積

續(xù)表1

結(jié)果表明，3-8月樣品中共有揮發(fā)油成分9個，分別為醋酸正丙酯、欖香烯、(E)-β-法呢烯、氧化石竹烯、α-紅沒藥醇、新植二烯、n-棕櫚酸、鐮葉芹醇、葉綠醇。這9個共有揮發(fā)油成分占3-8月樣品的總比率分別為83.41%、85.10%、95.26%、92.98%、91.88%、88.09%。由此可見，6批不同采摘時間天胡荽共有揮發(fā)油成分總含量大致相同，其余含量較低成分有所差異。鐮葉芹醇是含量最高的成分，在3-8月的樣品中占揮發(fā)油成分總量依次為44.68%、68.46%、85.19%、83.40%、84.58%、81.08%，其中5-8月相對穩(wěn)定；葉綠醇的相對含量在5月最高；β-法呢烯的相對含量在3月高達(dá)30.82%，而其他月份均不超過1%；另外6種共有成分相對含量均較低。主成分鐮葉芹醇具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗癌、抗細(xì)菌、抗真菌和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)等藥理作用[9]，由此推斷，不同采摘時間天胡荽的功效會有所不同。

2.3 不同采收期揮發(fā)油成分種類分析比較

對3-8月樣品中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分類，見表2。結(jié)果表明3-8月樣品中均含有脂肪酸、酯類、烯烴、醇類、醚類，其中醇類是3-8月樣品中相對峰面積最大的成分(3月至8月樣品中醇類的相對峰面積依次是 50.26%、74.34%、91.80%、88.08%、89.18%、85.00%)，烯烴次之(3-8月樣品中烯烴的相對峰面積依次是40.18%、19.43%、1.99%、3.95%、4.60%、8.80%)，同時烯烴也是所含成分?jǐn)?shù)量最多的一類，這與之前已報道的黔產(chǎn)天胡荽揮發(fā)油種類規(guī)律較一致[2]。這兩類主要揮發(fā)油成分占3-8月樣品相對峰面積依次為90.44%、93.77%、93.79%、92.04%、93.78%、93.80%。對不同采摘時間天胡荽中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分類可見，兩類主要揮發(fā)油成分醇類和烯烴占3月至8月樣品的相對峰面積均在90%～94%之間，較為穩(wěn)定。

表2 不同采摘時間天胡荽揮發(fā)油成分種類和相對峰面積

3 討論

不同采摘時間的天胡荽樣本揮發(fā)油成分含量表現(xiàn)出一定差異性。天胡荽中含量最大的揮發(fā)油成分為鐮葉芹醇，其含量由3月的44.68%上升為5月的85.19%，5-8月含量沒有明顯的時間性變化規(guī)律，但其含量變化在整個揮發(fā)油組分中已經(jīng)趨于相對穩(wěn)定，這與天胡荽的花、果期處于4-9月較為一致。

天胡荽揮發(fā)油成分以醇類和烯烴類為主，醇類含量由3月50.26%升至5月91.80%，6月、7月、8月依次有少許下降，烯烴含量由3月的40.18%降至5月的1.99%，6月、7月、8月又依次有少許上升，而3-8月這兩類成分的總量穩(wěn)定集中在90%～94%之間，說明不同采摘時間天胡荽揮發(fā)油成分的變化主要是醇類和烯烴類組分的變化。

天胡荽揮發(fā)油成分隨采摘時間的變化對于評價天胡荽揮發(fā)油整體功效及驗證其鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗癌、抗細(xì)菌、抗真菌和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)等可能具有重要的研究意義。因此，可根據(jù)天胡荽揮發(fā)油的組分變化，對其藥理藥用價值進(jìn)行進(jìn)一步開發(fā)利用。