基于“白芍不同炮制方法的對比研究”探討《中藥炮制學》實驗教學改革

杜洪志，柴慧芳，李 瑋，陳志琳，迮薇薇，王建科

(貴州中醫(yī)藥大學，貴州 貴陽 550025)

中藥炮制學是中醫(yī)藥高等院校中藥學、中藥制藥、中醫(yī)學等相關專業(yè)的必修課，該課程以研究中藥炮制原理及理論、改進炮制工藝、制定飲片質量標準等為主要任務，是保證臨床用藥的安全有效、穩(wěn)定可控的重要學科。炮制技術是我國具有自主知識產權、保證飲片質量的關鍵技術，該技術的傳承與創(chuàng)新，除了要有扎實的理論作指導，更要有熟練的實踐操作技能和準確的判斷標準[1]。

中藥材經炮制后得到中藥飲片，其質量的好壞直接關系到臨床療效，飲片質量又包括內在質量和外在質量[2]，外在質量主要通過成品性狀來評價，內在質量主要以有效成分或組分含量的高低進行質量控制。然而，中藥炮制中影響成品質量的因素較多(如火力、火候、操作、輔料等)。因此，對于初學者來說，不同炮制方法，如何有效、直觀地判斷飲片質量，其內在質量和外在質量有著怎樣的聯系，是本門課程實驗教學改革中存在的問題和研究方向。

基于此，本文以中藥炮制學中設計性實驗——白芍不同炮制方法的對比研究為例，通過教學設計、文獻檢索、課程安排、結果分析、討論交流、教學反饋等實驗教學思路，逐步建立學生對中藥炮制中質量變化的感官判斷標準，提高對該門課程的學習興趣，進一步培養(yǎng)學生的綜合實踐能力和自主創(chuàng)新精神[3]。本研究結果為探討中藥炮制學實驗教學改革與學生科研能力培養(yǎng)提供依據和參考。

1 課程教學背景

中藥炮制學是遵循中醫(yī)藥理論體系，在繼承中藥傳統(tǒng)炮制技術和理論的基礎上，研究中藥炮制的理論、工藝、規(guī)格、質量標準、歷史沿革及其發(fā)展方向的學科，具有實踐性強、知識面廣的特點。中藥炮制學的學習與研究既要繼承傳統(tǒng)中藥炮制技術與經驗，領會炮制精神，又要秉持創(chuàng)新發(fā)展理念，結合現代研究方法，改進炮制工藝，汲取精華，創(chuàng)新炮制技術，進一步提高中藥飲片質量。

2 研究內容

2.1 教學內容

以白芍為研究對象，采用HPLC法，探討白芍不同炮制方法對芍藥苷和芍藥內酯苷的影響，通過學生設計實驗方案，開展實驗研究。

2.2 實施方案

2.2.1 實驗安排與設計 選擇30人進行實驗。自由組合成4組，每組約7～8人，指定組長，統(tǒng)一負責安排小組具體實驗任務。通過查閱文獻資料，撰寫相關文獻綜述，根據實驗要求和研究思路，設計相關實驗方案，再由指導老師審核其方案的可行性，審核通過后，開始實驗研究，實驗過程中為學生提供相關的研究平臺和條件，并對學生進行實時指導和分析。

2.2.2 儀器與試藥 LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津：二元泵、SPD-20A檢測器)；Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；千分之一電子天平(型號JT-5003，余姚市金諾天平儀器有限公司)；真空干燥箱(型號DZ-2BC，天津市泰斯特儀器有限公司)；超聲波清洗儀(型號HS10260D，天津恒奧科技公司)。

芍藥內酯苷(批號：GZDD-0690，≥99%，貴州迪大科技有限責任公司)；芍藥苷(批號：GZDD-0045，≥99%，貴州迪大科技有限責任公司)；乙醇、磷酸為分析純；乙腈、甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水。

白芍藥材購自四川省，經貴州中醫(yī)藥大學藥用植物與栽培教研室魏升華教授鑒定為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根。

2.2.3 方法與結果 炮制方法：①生品：取白芍片，大小分檔，除去雜質，即可。②炒黃：取凈白芍片，置預熱鍋中，用文火炒至表面微黃色至黃色，取出，攤開放涼。③炒焦：取凈白芍片，置預熱鍋中，用中火炒至表面棕黃色至焦黃色，取出，攤開放涼。④土炒：取灶心土(或黃土)細粉置鍋中，用中火加熱至靈活狀態(tài)，加入凈白芍片，拌炒至白芍表面均勻掛土粉時，微顯焦黃色，取出，篩去土粉，攤開放涼。每100 kg白芍片，灶心土(或黃土)30 kg。⑤麩炒：取凈白芍片備用，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時立即投入白芍片，不斷翻動，炒至顏色為亮黃色時，取出，篩去麥麩，攤開放涼。每100 kg白芍片，麥麩10 kg。⑥酒炙：取凈白芍片，加黃酒拌勻，悶潤至透，待酒被吸盡后，置炒制容器內，用文火加熱，炒至近干，取出晾涼。每100 kg白芍片，黃酒10 kg。⑦酒潤麩炒：取凈白芍片，加黃酒拌勻，悶潤至透，待酒被吸盡后，晾涼備用，每100 kg白芍片，黃酒10 kg；取晾干后的酒潤白芍片，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時立即倒入白芍片，不斷翻動，炒至顏色變亮黃色時，取出，篩去麥麩，放涼。每100 kg酒潤白芍片，麥麩10 kg。⑧醋炙：取凈白芍片，加米醋拌勻，悶潤至透，待醋被吸盡后，置炒制容器內，用文火加熱，炒干，取出晾涼。每100 kg白芍片，米醋15 kg。⑨醋潤麩炒：取凈白芍片，加米醋拌勻，悶潤至透，待醋被吸盡后，晾涼備用。每100 kg白芍片，米醋15 kg；取晾干后的醋潤白芍片，先將鍋燒熱，快速均勻撒入麥麩，用中火加熱，待麩下濃煙起時立即投入白芍片，不斷翻動，炒至顏色變亮黃色至深黃色時，取出，篩去麥麩，放涼。每100 kg醋潤白芍片，麥麩10 kg。不同炮制方法樣品見圖1。

注：A.生品；B.炒黃；C.炒焦；D.土炒；E.麩炒；F.酒炙；G.酒潤麩炒；H.醋炙；I.醋潤麩炒。

芍藥苷和芍藥內酯苷的含量測定：①對照品溶液的制備：分別精密稱取干燥至恒重質量的芍藥內酯苷、芍藥苷對照品適量，加甲醇溶解，制成含芍藥內酯苷0.038 mg/mL、芍藥苷0.062 mg/mL的混合對照品溶液，經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

②供試品溶液的制備：取白芍粉末約0.1 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加入70%乙醇45 mL，稱定重量，超聲提取(功率300 W，50 kHz)30 min，取出放冷，稱重，加70%乙醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

③色譜條件：Agilent HC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈-0.1%磷酸(16∶84)為流動相進行洗脫；檢測波長為230 nm；柱溫30 ℃；流速為1 mL/min；進樣體積為10 μL。理論塔板數不低于2 000。對照品及樣品色譜見圖2。

注：A.芍藥內酯苷對照品；B.芍藥苷對照品；C.白芍樣品。

④方法學考察：精密吸取混合對照品溶液2 μL、6 μL、10 μL、14 μL、18 μL注入高效液相色譜儀中，以峰面積積分值為縱坐標(Y)，進樣體積為橫坐標(X)進行線性回歸，得芍藥內酯苷回歸方程為：Y=1×106X-6128，R2=1；芍藥苷回歸方程為：Y=1×106X-31340，R2=0.999 9；結果表明芍藥內酯苷在0.076～0.684 μg，芍藥苷在0.124～1.116 μg范圍內呈良好的線性關系。

通過精密度試驗，穩(wěn)定性試驗，重復性試驗，RSD均小于3%，符合相關要求，通過加樣回收率試驗，平行制備6份樣品，減半稱樣，平均回收率為100.93%，RSD值為2.13%。

樣品含量測定：按照“2.2.3”項下供試品溶液的制備方法制備樣品，精密吸取白芍樣品溶液，按照“2.2.3”項下色譜條件進樣分析，測定白芍不同炮制方法樣品中芍藥苷和芍藥內酯苷的含量，采用外標工作曲線法進行含量計算。每個樣品平行3份樣，分別計算平均百分含量(%)及相關RSD值。含量測定結果見表1。

表1 白芍不同炮制方法中芍藥苷和芍藥內酯苷含量測定結果 (n=3)

由研究結果可知，白芍經過炮制后，芍藥苷的含量均有所降低，而不同炮制方法中，以醋炙法含量最高，以炒焦法含量最低，而芍藥內酯苷的含量，除醋炙外，均有所下降，但下降的趨勢不明顯。結果表明，不同炮制方法對白芍內在成分芍藥苷、芍藥內酯苷有一定影響，芍藥苷受炮制方法的影響較大。

2015版《中國藥典》白芍的炮制方法為酒白芍和炒白芍，根據研究結果，酒炙后芍藥苷和芍藥內酯苷含量均有所下降，炒白芍主要以炒黃為主，若溫度過高，時間過長(如炒焦)，對內在成分芍藥苷的影響較大；而醋炙后，與生品比較，芍藥苷含量下降相對較少，芍藥內酯苷含量甚至有所升高，而醋炙的炮制目的是緩和寒性，增強養(yǎng)血斂血、疏肝解郁之功，表明不同炮制方法與內在成分之間有一定的相關性，然其關聯性如何判定，內在成分的變化是否與炮制目的、功效的變化相關，有待進一步研究論證。

2.3 實驗總結和討論

每個實驗小組根據實驗結果，并結合相關炮制方法、炮制目的、關鍵工藝、影響成品性狀的因素、注意事項等進行總結和討論，并書寫實驗報告。指導老師根據研究結果，并結合實驗過程進行評價，再將相關的注意事項、重點和難點、炮制前后藥性的變化與成分變化的相關性等進行具體分析，使學生對中藥炮制的認識更加明確，進一步提高學生的學習興趣，加深對知識點的掌握。

3 教學效果反饋

通過學生參與設計實驗方案、撰寫研究綜述、實驗前期培訓、后期數據處理分析等過程，進一步提高了學生創(chuàng)新學習和自主學習的能力。

(1)經過整個實驗，使學生明白白芍的炮制方法，并掌握不同炮制方法的注意事項。

(2)通過HPLC色譜分析，使學生掌握白芍炮制前后芍藥苷、芍藥內酯苷的變化及HPLC色譜分析操作注意事項。

(3)針對同一藥材，通過不同炮制方法的比較，使學生對不同炮制工藝的成品性狀有非常直觀地認識和了解，再結合內在成分的變化，對相關影響質量的因素更為清晰，掌握重要知識點更為牢固。

(4)貴州特色炮制方法主要為潤藥后麩炒(如酒潤麩炒、蜜潤麩炒等)，經過開展該實驗，為設計其他藥材炮制方法奠定了良好的實驗基礎。

4 實驗教學反思

4.1 存在的問題

(1)中藥炮制學實驗課多采用課前講解、學生實驗、教師巡回指導的教學方法。整個過程被動接受，學習興趣不高，沒有較好發(fā)揮學生的創(chuàng)造性思維。

(2)具體實驗操作中，只能對中藥飲片的外觀性狀有一個感官認識，不同炮制方法對其內在質量的影響不清楚。

(3)由于對中藥炮制認識不夠，相關炮制方法關鍵工藝點不清晰，使得不能較好地傳承與創(chuàng)新“中藥炮制”這一特色技術。

4.2 解決措施

根據中藥炮制存在的問題，結合本次設計性實驗“白芍不同炮制方法的對比研究”，若能在中藥炮制學的實驗教學中，引入科研思維，融入科研實驗，逐漸闡明炮制關鍵工藝點，將會有效提升學生學習興趣，提高創(chuàng)新思維能力。

(1)做好實驗設計，豐富課堂教學。學生作為中藥炮制的初學者，不清楚這門傳統(tǒng)學科存在的相關問題，這就需要指導老師做好實驗設計并進行引導，層層深入，結合不同教學方法豐富實驗課堂，逐漸激發(fā)學生的學習興趣，開拓學生思維，激發(fā)自主探究的欲望。

(2)積極引導，傳承與創(chuàng)新。提高學生的學習能力，首先要激發(fā)學生學習的主動性、積極性。根據學生提出的實驗方案，教師要結合具體實驗平臺對實驗的可行性進行判斷，針對擬解決的關鍵問題著重論述，積極引導學生。經過一到兩次的實驗設計，使學生對其他同類藥材的炮制研究有了實驗思路，為其他藥材的深入研究奠定了良好的實驗基礎，開拓了學生的創(chuàng)新思維能力[4]。

(3)提供良好平臺，提高綜合實踐能力。實驗課堂主要是為了提高學生的綜合實踐能力，然而，實踐能力的提高，與實驗平臺密切相關。當前，高校學生實驗課不僅僅是簡單的驗證性實驗，要培養(yǎng)學生對實驗現象的深刻認識，闡明實驗原理，科學解釋實驗現象，則需要良好的實驗平臺。特別是中藥炮制這類傳統(tǒng)與現代緊密結合的學科，很多炮制目的只有理論，沒有實驗數據支撐，此時，更需要學生積極探索，整體感知實驗內容，進一步培養(yǎng)刻苦鉆研、積極探索的精神[5]。

5 結語

中藥炮制學是一門傳統(tǒng)與現代密切結合的綜合性專業(yè)技術學科，藥材經過炮制成飲片后才能入藥是中醫(yī)藥學的一大特色，中藥飲片質量的好壞直接影響著中醫(yī)臨床療效。因此，秉承中藥炮制“傳承創(chuàng)新”的教學理念，改進教學方法，提高學生對中藥炮制的認識，領會炮制精神，有效培養(yǎng)相關的專業(yè)技術人才是中藥飲片行業(yè)、中醫(yī)藥行業(yè)的迫切需要。而在具體實踐教學中，要加強教學改革，積極探討，并結合中藥炮制學科特色，靈活地將科研和教學有機結合[6]，進一步激發(fā)學生創(chuàng)造性思維，培養(yǎng)學生積極探索精神，提高學生自主學習能力，讓新時代中醫(yī)藥專業(yè)的大學生成為知識的主動獲取者和解決實際問題的設計者，為中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展貢獻一份力量。