蘋果ANR基因沉默的原因分析

印邁 吳玉杰 蔡夢

摘要 ? ?檢測了一個具有紫黑色果肉的蘋果的ANR基因，發現了該基因被沉默。為了分析其沉默的原因，通過試驗分析了該啟動子序列上的順式作用元件、內含子序列、外顯子序列等的變異。結果表明，其ANR基因沉默可能是由內含子產生的變異引起，上述研究結果為今后的進一步研究打下了基礎。

關鍵詞 ? ?蘋果;ANR基因;內含子;基因沉默

中圖分類號 ? ?S661.1 ? ? ? ?文獻標識碼 ? ?A

文章編號 ? 1007-5739（2020）15-0057-03 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

Abstract ? ?The ANR gene of an apple with purple-black pulp was detected， and it was found that the gene was silenced. In order to analyze the causes of ANR gene silencing， the variations of cis-acting elements， intron sequences and exon sequences on the promoter sequence were experimentally studied. The results indicated that the ANR gene silencing may be caused by the variation produced by the intron. The above results laid a foundation for further research in the future.

Key words ? ?Malus domestica; ANR gene; intron; gene silencing

花青素還原酶（簡稱ANR酶）是花青素代謝途徑中的關鍵酶，隨著其在植物不同部位表現出不同的活性，使得果實以及花瓣呈現不同的顏色[1]。在ANR酶催化作用下，花青素會被轉化成原花青素（PA），而不會生成花青苷[2]。在擬南芥中過量表達ANR基因，會增加細胞中的原花青素含量、減少花青素含量[3-4]。研究ANR基因的表達調控將為通過基因工程改良植物的花青素合成性狀打下基礎，目前已經有一些關于ANR基因研究的文獻報道[5-7]。前期研究發現，一個蘋果（Malus domestica）種質材料的ANR基因不表達，擬通過本試驗尋找可能的原因。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?試驗材料

3種蘋果的嫩葉。

1.2 ? ?DNA的提取

采用北京艾德萊生物科技有限公司的DN14-植物基因組DNA快速提取試劑盒提取DNA。

1.3 ? ?RNA的提取和cDNA的合成

采用北京艾德萊生物科技有限公司的RN53-多糖多酚復雜植物RNA快速提取試劑盒進行總RNA的提取，用同一公司的PC44-第一鏈60 ℃高溫反轉錄試劑盒合成cDNA第一鏈。

1.4 ? ?引物

用于檢測蘋果ANR基因mRNA（GenBank中的登錄號為XM_029110431.1，基因編號為LOC114827797）表達的上游引物序列為TCAACAAAAGATACCCCCAG，下游引物序列為GATAGCTAGCTCGATACATGC。……