高效液相色譜法測定麻黃魚腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量

許世富

摘要 ? ?利用高效液相色譜法測定麻黃魚腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量。采用C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），在室溫下，以乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液（5∶95，V/V）為流動相，檢測波長210 nm，流速1.0 mL/min。結果表明，鹽酸麻黃堿在5～200 μg/mL范圍內，線性關系良好（R2=0.999 9），平均回收率為92.13%，相對標準偏差為2.93%;鹽酸偽麻黃堿在5～200 μg/mL范圍內，線性關系良好（R2=0.999 9），平均回收率為93.64%，相對標準偏差為4.05%。本方法簡單快捷，精密度好，可用于控制麻黃魚腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量。

關鍵詞 ? ?麻黃魚腥草散;鹽酸麻黃堿;鹽酸偽麻黃堿;含量測定;HPLC

中圖分類號 ? ?Q946.88 ? ? ? ?文獻標識碼 ? ?A

文章編號 ? 1007-5739（2020）15-0213-02 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

Abstract ? ?The contents of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Mahuang Yuxingcao powder were determined by HPLC. Using C18 column （5 μm， 4.6 mm×150 mm） at room temperature， acetonitrile-0.02 mol/L phosphoric acid solution （5∶95，V/V） was used as mobile phase， the detection wavelength was 210 nm， the flow rate was 1.0 mL/min. The result showed that the linear range of ephedrine hydrochloride was 5-200 μg/mL （R2=0.999 9）， the average recovery was 92.13% and the relative standard deviation was 2.93%. The linear range of pseudoephedrine hydro-chloride was 5-200 μg/mL （R2=0.999 9）， the average recovery was 93.64% and the relative standard deviation was 4.05%. The method is simple， rapid and accurate， and can be used to control the content of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Mahuang Yuxingcao powder.

Key words ? ?Mahuang Yuxingcao powder; ephedrine hydrochloride; pseudoephedrine hydrochloride; content determination;HPLC

麻黃魚腥草散為獸藥中常用中藥散劑，收載于《中國獸藥典》2015年版二部，由麻黃、黃芩、魚腥草、穿心蓮和板藍根組成，具有宣泄肺熱、平喘止咳的功效，臨床主要用于肺熱咳嗽、雞支原體病的治療[1-2]。近年來，關于麻黃生物堿毒副作用的報道日趨增多[3]。因此，嚴格控制其質量也越來越重要。目前，其質量標準中僅對麻黃、黃芩、魚腥草、穿心蓮和板藍根進行顯微鑒別和鹽酸麻黃堿的薄層色譜鑒別，不能很好地控制其質量。有報道建立高效液相色譜法測定黃芩苷、穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量以控制黃芩、穿心蓮的質量[4-6]。本文參考相關文獻[7-10]，建立了測定麻黃魚腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的高效液相色譜法以控制其中麻黃質量。結果表明，本方法具有結果準確、快速分離、操作簡便、專屬性強、靈敏度高、重復性好等特點，提升了麻黃魚腥草散的質量，為全面有效地控制其質量提供了技術參考。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?試驗材料及設備

1.1.1 ? ?儀器和設備。U3000高效液相色譜儀，配紫外檢測器，美國賽默飛;電子天平，BT-125D，德國賽多利斯;超純水器，Milipo Simplicity，美國密理博;超聲波儀，KQ-300DV，昆山市超聲儀器有限公司。

1.1.2 ? ?試劑和材料。乙腈，為色譜純;磷酸、三乙胺，為分析純;水，為超純水，實驗室自制。對照品：鹽酸麻黃堿，含量100.0%，批號171241-201809;鹽酸偽麻黃堿，含量99.8%，批號171237-201510，均購自中國食品藥品檢定研究院。麻黃魚腥草散3批，批號分別為20190601、20190602、20190603，來源于安徽XX動物藥業有限公司。

1.2 ? ?試驗方法

1.2.1 ? ?溶液制備。①對照品溶液制備。分別稱取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品約10 mg，精密稱定，放入10 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液，每1 mL含鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿各1 mg。②供試品溶液制備。取麻黃魚腥草散約3 g，精密稱定，放入50 mL量瓶中，加1.44%磷酸溶液45 mL，超聲25 min，放至室溫，加1.44%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻。過濾，取濾液1 mL置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液即得。③陰性對照溶液制備。按處方及制法制備不含麻黃的陰性制劑，按 ②方法，制備相應的陰性對照溶液。

1.2.2 ? ?色譜條件。色譜柱為C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）;流動相為乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液（含0.06%三乙胺）（5∶95， V/V）;流速1.0 mL/min;檢測波長210 nm;進樣量20 μL。

1.2.3 ? ?專屬性試驗。分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按1.2.2色譜條件測定。

1.2.4 ? ?線性關系考察。吸取對照品貯備溶液0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL，分別置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為5、10、20、50、100、200 μg/mL的對照品系列溶液，分別取20 μL注入高效液相色譜儀，在1.2.2色譜條件下測定。

1.2.5 ? ?穩定性試驗。取供試品溶液，在0、2、4、8、12、24 h，按1.2.2色譜條件測定峰面積計算。

1.2.6 ? ?精密度試驗。取麻黃魚腥草散（批號為20190601），按1.2.1中②方法制備供試品溶液，按1.2.2色譜條件測定，以峰面積計算。

1.2.7 ? ?準確度試驗。取已知含量的麻黃魚腥草散，研細，稱取6份，每份約1.5 g，分別加入一定的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品貯備溶液，按1.2.1中②方法制備、1.2.2色譜條件測定，以峰面積計算。

1.2.8 ? ?樣品測定。取麻黃魚腥草散3批（批號分別為20190601、20190602、20190603），分別按1.2.1中②方法制備，按1.2.2色譜條件測定，以峰面積用外標法計算。

2 ? ?結果與分析

2.1 ? ?專屬性試驗

鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿峰與其他相鄰峰分離良好，陰性對照色譜在與對照品色譜相同保留時間處無干擾峰，專屬性強，能滿足檢測要求，見圖1～3。

2.2 ? ?線性關系

以峰面積Y為縱坐標，以濃度x（μg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程：Y鹽酸麻黃堿=0.123 4x+0.096 3，R2=0.999 9;Y鹽酸偽麻黃堿=0.123 8x+0.067 3，R2=0.999 9。結果表明，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在5～200 μg/mL濃度范圍內，與其對應的峰面積有良好的線性關系。

2.3 ? ?穩定性試驗

鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的相對標準偏差（n=6）分別為0.42%、0.59%。結果表明，供試品溶液在24 h內基本穩定，說明該方法穩定性較好。

2.4 ? ?精密度試驗

鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的相對標準偏差（n=6）分別為0.28%、0.39%，說明該方法精密度良好。

2.5 ? ?準確度試驗

鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回收率分別為87.82%～96.04%、90.34%～100.20%，平均回收率分別為92.13%、93.64%，相對標準偏差分別為2.93%、4.05%，結果見表1。

2.6 ? ?樣品測定

3批麻黃魚腥草散中鹽酸麻黃堿的含量分別為0.827、0.813、0.836 mg/g，鹽酸偽麻黃堿的含量分別為0.516、0.535、0.529 mg/g，結果見表2。

3 ? ?結論與討論

3.1 ? ?質控成分的選擇

麻黃魚腥草散為《中國獸藥典》2015年版二部[1]收載品種，具有宣泄肺熱、平喘止咳的功效，臨床主要用于肺熱咳嗽、雞毒支原體病的治療[11]。處方中含有麻黃、黃芩、魚腥草、穿心蓮和板藍根，其中麻黃具有解表散寒、宣肺平喘、利水消腫等功能，在整個方劑中起主要治療作用?！吨袊F藥典》2015年版二部[1]僅有顯微鑒別和鹽酸麻黃堿的薄層色譜鑒別，選擇測定其中麻黃有效成分有助于對麻黃魚腥草散進行質量控制。麻黃主要成分為多種生物堿，如鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、鹽酸麻黃次堿以及黃酮類化合物等。鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿均有緩解支氣管平滑肌痙攣的作用[3]?！吨袊F藥典》2015年版二部[1]以及《中國藥典》2015年版一部[12]均對麻黃中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量有具體要求，二者總量不得少于0.80%。因此，選擇鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿作為其中質控方法之一。本方法采用HPLC法測定麻黃魚腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，操作便捷快捷，且二者在5～200 μg/mL范圍內線性關系良好，檢測方法的準確度、精密度、穩定性均能達到要求。

3.2 ? ?提取方法的選擇

本試驗比較了1.44%磷酸溶液[1]、乙腈-0.1 mol/L磷酸溶液（5∶95）[9，11]、乙腈-0.2 mol/L磷酸溶液[10，12]等3種提取溶劑，分別以超聲方式進行提取20、25、30 min。最終選擇1.44%磷酸溶液作為提取溶液、超聲提取25 min為本試驗方法，結果證明該方法提取效果好、速度快，操作簡單，系統適應性好，且陰性對照無干擾。

3.3 ? ?流動相的選擇

鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿在210 nm有最大吸收峰，本試驗選擇210 nm作為測定波長。甲醇在210 nm處有少量紫外吸收[8]，選擇用乙腈作為有機相，考察了不同比例的乙腈對分離效果的影響，通過調整有機相比例不斷優化分離度和檢測效率。隨著乙腈比例的提高，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的保留時間不斷縮短，在滿足分離度要求的前提下，最終選擇了乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液作為流動相，保留時間較短，分離度符合要求。進一步優化后發現，在磷酸溶液中添加0.06%三乙胺，可使制劑中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿分離良好，峰形更佳，減少拖尾及其他雜質峰的干擾。

本研究選擇高效液相色譜法測定麻黃魚腥草散中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，方法快捷簡便、準確可靠、重復性好、回收率高，可有效控制該制劑中麻黃的含量，為麻黃魚腥草散標準修訂提供參考。

4 ? ?參考文獻

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