寬葉獨(dú)行菜提取物對(duì)大鼠胃腸動(dòng)力及SP和Ghrelin的影響

趙乙樺 鐘江斌 李威霖 祁得勝 孫士浩 鄒登朗 都玉蓉 馬建濱

摘要：為研究寬葉獨(dú)行菜（Lepidium latifolium L.）提取物對(duì)胃腸動(dòng)力障礙大鼠的影響，并初步探討其作用機(jī)制，選取24只SPF級(jí)SD大鼠，體重180～200g，隨機(jī)分成空白組、模型組和受試藥物組，每組8只，雌雄各半，各組大鼠灌胃給予相應(yīng)的藥物，受試藥物組每只大鼠灌胃2mL寬葉獨(dú)行菜提取物溶液（0.36g/mL），空白組和模型組每只大鼠灌胃等體積去離子水。每天1次，連續(xù)灌胃6d后禁食不禁水24h，第7天正常給藥lh后，模型組和受試藥物組大鼠腹腔注射硫酸阿托品2mg/kg，空白組大鼠腹腔注射等體積的生理鹽水。20min后，所有大鼠均灌胃0.4mL 2%藍(lán)色憑聚糖-2000溶液30min后腹腔注射4mL/kg的10%水合氯醛溶液麻醉大鼠，取材測(cè)定胃排空率和小腸推進(jìn)率，ELISA法測(cè)定胃和十二指腸勻漿中P物質(zhì)（SP）和饑餓素（Ghrelin）濃度。結(jié)果表明，與空白組比較，模型組大鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率極顯著降低（P<0.01），胃、十二指腸中SP濃度和胃中Ghrelin濃度無(wú)明顯變化（P>0.05），十二指腸中Ghrelin濃度極顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，受試藥物組大鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率均極顯著升高（P<0.01），胃中SP濃度顯著升高（P<0.05）;胃中Ghrelin濃度和十二指腸中SP、Ghrelin濃度均極顯著升高（P<0.01）。表明寬葉獨(dú)行菜提取物能改善硫酸阿托品致胃腸動(dòng)力障礙大鼠的胃腸動(dòng)力，提高其胃和十二指腸中SP和Ghrelin濃度可能是其發(fā)揮促胃腸動(dòng)力作用的機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：寬葉獨(dú)行菜（Lepidium latifolium L.）;大鼠胃腸動(dòng)力;P物質(zhì)（SP）;饑餓素（Ghrelin）

中圖分類號(hào)：S567.23+9;R915 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2020）09-0130-03

DOI：10.14088/i.cnki.issn0439-8114.2020.09.027

寬葉獨(dú)行菜（Lepidaum latifolium L.）系十字花科獨(dú)行菜屬多年生草本植物，又稱大辣辣、止痢草，世界各地均有分布，在中國(guó)主要產(chǎn)于內(nèi)蒙古、西藏、青海等地海拔1800～4250m的村旁、田邊、山坡及鹽化草甸;全草人藥，有清熱燥濕，治菌痢、腸炎作用[1]。本研究選用寬葉獨(dú)行菜提取物作為受試藥物，研究其對(duì)胃腸動(dòng)力障礙大鼠胃排空和腸推進(jìn)的影響，并觀察其對(duì)大鼠胃、腸組織勻漿中P物質(zhì)（SP）和饑餓素（Ghrelin）的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠，24只，體重180～200g，雌雄各半，購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)為SCXK（陜）2017-003。

1.1.2 藥物與試劑 寬葉獨(dú)行菜（采自青海省海西州德令哈市郊，由中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所吳玉虎研究員鑒定）;2%藍(lán)色葡聚糖-2000溶液（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)W29N8E49020）;硫酸阿托品注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，批號(hào)1611231）;RAT SP ELISA KIT、RAT Ghrelin ELISAKIT（武漢基因美生物科技有限公司，批號(hào)GR201812-1）。

1.1.3 儀器 752型紫外可見分光光度計(jì)（上海菁華科技儀器有限公司）;S-35K型手持勻漿機(jī)（萊普特科學(xué)儀器有限公司）：xMark^TMMicroplate Spectro-photometer酶標(biāo)儀（BIO-RAD美國(guó)伯樂）。

1.2 方法

1.2.1 寬葉獨(dú)行菜提取物的制備 寬葉獨(dú)行菜全草陰干后粉碎，按料液比1：12（g/mL），浸提溫度80℃，浸提時(shí)間1h，浸提2次，濃縮、干燥[2]。

1.2.2 造模與給藥 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后隨機(jī)分成3組，即空白組、模型組和受試藥物組，每組8只，雌雄各半。各組大鼠稱重后灌胃給予相應(yīng)的藥物，受試藥物組每只大鼠灌胃2ml，寬葉獨(dú)行菜提取物溶液（0.36g/mL），空白組和模型組每只大鼠灌胃等體積的去離子水，每天1次，連續(xù)灌胃6d后禁食不禁水24h，第7天正常給藥1h后，模型組和受試藥物組腹腔注射硫酸阿托品2mg/kg[3]，空白組腹腔注射等體積的生理鹽水。

1.2.3 胃排空和腸推進(jìn)試驗(yàn) 造模20min后，所有大鼠均灌胃0.4mL 2%藍(lán)色葡聚糖-2000溶液[4]，30min后腹腔注射4mL/kg的10%水合氯醛溶液麻醉大鼠，開腹，結(jié)扎賁門、幽門和回盲部，取全胃和小腸。沿胃大彎剪開胃，用10mL去離子水將胃內(nèi)容物沖洗于巧mL離心管中，3500r/min離心15min，取上清液，用紫外分光光度計(jì)于620nm處測(cè)吸光度。另取0.4mL 2%藍(lán)色葡聚糖-2000溶液，溶于10mL去離子水，用紫外分光光度計(jì)于620nm處測(cè)得的吸光度為標(biāo)準(zhǔn)吸光度。將小腸平鋪于用生理鹽水潤(rùn)濕的試驗(yàn)臺(tái)上，自然拉直，測(cè)量小腸全長(zhǎng)和幽門至藍(lán)色前沿距離。胃內(nèi)色素排空率=（1-胃內(nèi)殘留色素吸光度標(biāo)準(zhǔn)吸光度）×100%，小腸推進(jìn)率=（幽門括約肌至色素前沿距離/小腸全長(zhǎng)）×100%[5]。

1.2.4 SP和 Ghrelin含量測(cè)定 取大鼠胃和十二指腸組織，用PBS液洗凈后稱重，按1：10（g/mL）的比例加入預(yù)冷的PBS液，勻漿。將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管，3000r/min離心20min，取上清液-20℃保存?zhèn)溆谩Ｈ〈郎y(cè)組織勻漿液，按照試劑盒說明書操作，檢測(cè)大鼠胃和十二指腸組織勻漿中SP和Ghrelin的含量。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 21.0進(jìn)行單因素方差分析，處理后的數(shù)據(jù)均用“x±s”表示，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 寬葉獨(dú)行菜提取物對(duì)大鼠胃排空和腸推進(jìn)的影響

由表1可見，模型組大鼠與空白組比較，其胃排空率和小腸推進(jìn)率極顯著降低（P<0.01）。受試藥物組大鼠胃排空率雖還未恢復(fù)至空白組水平，但與模型組相比極顯著升高（P<0.01）;受試藥物組大鼠小腸推進(jìn)率與模型組相比極顯著升高（P<0.01），與空白組相比差異不顯著（P>0.05）。

2.2 寬葉獨(dú)行菜提取物對(duì)大鼠胃腸激素的影響

由表2可見，模型組大鼠胃和十二指腸中SP濃度與空白組比較無(wú)顯著差異（P>0.05）;模型組大鼠胃中Ghrelin濃度與空白組比較無(wú)顯著差異（P>0.05），十二指腸中Ghrelin濃度與空白組比較極顯著降低（P<0.01）。受試藥物組大鼠與模型組比較，胃中SP和Ghrelin濃度顯著升高（P<0.05，P<0.01）;十二指腸中SP和Ghrelin濃度均極顯著升高（P<0.01）。受試藥物組大鼠與空白對(duì)照組比較，胃中SP和Ghrelin濃度顯著升高（P<0.05，P<0.01）;十二指腸中SP濃度極顯著升高（P<0.01），十二指腸中Ghrelin濃度無(wú)顯著差異（P>0.05）。

3 小結(jié)與討論

近年來，隨著生活節(jié)奏的加快，人們的飲食和生活規(guī)律發(fā)生了巨大改變，胃腸動(dòng)力障礙疾病發(fā)病率也顯著提高，嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量。硫酸阿托品是M膽堿受體阻斷劑，腹腔注射硫酸阿托品是經(jīng)典的胃腸動(dòng)力障礙模型造模方法，成功率高[6]。SP是一種重要的胃腸膚，廣泛分布于整個(gè)胃腸道和腸神經(jīng)系統(tǒng)，是調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的主要神經(jīng)遞質(zhì)之一[7，8]。Ghrelin是一種由28個(gè)氨基酸組成的多膚，整個(gè)胃腸道均有分布[9]。研究表明，Ghrelin參與體內(nèi)食欲、胃腸運(yùn)動(dòng)和胃酸分泌等的調(diào)控[10]。本研究采用腹腔注射硫酸阿托品制造胃腸動(dòng)力障礙模型大鼠，以胃排空率和小腸推進(jìn)率為指標(biāo)檢測(cè)寬葉獨(dú)行菜提取物對(duì)胃腸動(dòng)力障礙大鼠的影響，并取胃和十二指腸組織，以SP和Ghrelin為指標(biāo)初步探討其作用機(jī)制。試驗(yàn)結(jié)果顯示，受試藥物組大鼠胃排空率和小腸推進(jìn)率與模型組比較均顯著升高，表明寬葉獨(dú)行菜提取物能改善硫酸阿托品致胃腸動(dòng)力障礙大鼠胃腸動(dòng)力。受試藥物組大鼠胃和十二指腸中SP、Ghrelin濃度與模型組比較均顯著升高，胃和十二指腸中SP濃度、胃中Ghrelin濃度與空白組比較也顯著升高，表明寬葉獨(dú)行菜提取物可提高胃和十二指腸中SP、Ghrelin濃度。綜上，寬葉獨(dú)行菜提取物能有效改善硫酸阿托品致胃腸動(dòng)力障礙大鼠的胃腸動(dòng)力，提高胃和十二指腸中SP和Ghrelin濃度可能是其發(fā)揮作用的機(jī)制之一，其起效成分和具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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收稿日期：2019-07-16

基金項(xiàng)目：青海省基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目（2019-ZJ-916）;青海省重點(diǎn)研發(fā)與轉(zhuǎn)化項(xiàng)目（2019-SF-124）

作者簡(jiǎn)介：趙乙樺（1993-），女，江蘇鹽城人，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)閼?yīng)用植物學(xué)，（電話）18862005520（電子信箱）2973976914@qq.com;通信作者，馬建濱（1965-），男，青海西寧人，教授，碩士生導(dǎo)師，碩士，主要從事青藏高原特色生物資源應(yīng)用與開發(fā)研究，（電子信箱）mjb_117@163.com;都玉蓉（1968-），女，青海西寧人，教授，碩士生導(dǎo)師，博士，主要從事生理生態(tài)學(xué)研究，（電子信箱）xndyr@163.com。