胃癌患者外周血中膽固醇與淋巴細胞檢測的臨床意義及兩者的相關性

吳宏偉 王子安

[摘要] 目的 測定胃癌患者外周血中的總膽固醇（TC）與總淋巴細胞數（LYM），探討膽固醇、淋巴細胞總數的測定在臨床中的意義及兩者之間是否有相關性。方法? 方便選取2017年 1 月—2019年1 月該院收治的胃癌患者100例作為胃癌組，同期該院體檢中心健康體檢者50名作為對照組，檢測兩組研究對象外周血中總膽固醇及總淋巴細胞并進行統計分析，同時將胃癌組中膽固醇、淋巴細胞分別與臨床病理特征進行分析并探討兩者之間的相關性。結果? 胃癌組外周血中膽固醇水平高于對照組（t=-2.447，P=0.016），淋巴細胞水平低于對照組（t=3.886，P=0.000），差異有統計學意義（P<0.05）;胃癌組中膽固醇、淋巴細胞與性別、浸潤程度、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移及TNM分期差異無統計學意義（P>0.05），但隨著分化程度及TNM分期情況有明顯上升及下降趨勢（分化程度：膽固醇： t=0.560，P=0.573;低分化（4.34±1.03）mmol/L;中分化（4.38±0.96）mmol/L;高分化（4.02±0.89）mmol/L;（TNM分期：淋巴細胞：t=0.606，P=0.613;I期（1.78±0.54）×109/L;II期（1.72±0.53）×109/L;III期（1.70±0.61）×109/L;IV期（1.57±0.55）×109/L;胃癌組中膽固醇和淋巴細胞有顯著正相關性（r=0.218，P=0.029）。結論 膽固醇及淋巴細胞的異常在胃癌患者中可反應患者的病情情況及營養、免疫狀態，通過干預膽固醇的含量可影響機體的免疫狀態進而改變其抗腫瘤免疫能力，并為腫瘤的免疫治療提供新的思路及臨床依據。

[關鍵詞] 胃癌;膽固醇;淋巴細胞;腫瘤免疫

[中圖分類號] R73? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2020）06（a）-0175-04

Clinical Significance of Peripheral Blood Cholesterol and Lymphocyte Detection in Patients with Gastric Cancer and Their Correlation

WU Hong-wei， WANG Zi-an

Department of Oncology， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Bengbu， Anhui Province， 233004 China

[Abstract] Objective To determine the total cholesterol （TC） and total lymphocytes （LYM） in the peripheral blood of patients with gastric cancer， and to explore the clinical significance of the determination of cholesterol and total lymphocytes and whether there is a correlation between the two. Methods A total of 100 patients with gastric cancer treated from January 2017 to January 2019 were conveniently selected as the gastric cancer group， and 50 healthy patients from the physical examination center of the hospital were used as the control group. Total cholesterol and total lymphocytes in the peripheral blood of the two subjects were measured and analyzed. At the same time， the cholesterol and lymphocytes in the gastric cancer group were analyzed with clinicopathological characteristics and the correlation between the two was explored. Results The levels of cholesterol in the peripheral blood of gastric cancer group were higher than those in the control group （t=-2.447， P=0.016）， and the levels of lymphocytes were lower than those in the control group （t=3.886， P=0.000）. The differences were statistically significant（P<0.05）. Cholesterol， lymphocytes and gender， degree of infiltration， degree of differentiation， lymph node metastasis， distant metastasis， and TNM staging were not statistically significant and had no significant correlation （P>0.05）， but with the degree of differentiation and TNM staging significant upward and downward trends （differentiation degree： cholesterol： t=0.560，P=0.573;poorly differentiated （4.34±1.03）mmol/L; moderately differentiated （4.38 ± 0.96）mmol/L; highly differentiated （4.02±0.89）mmol/L; （TNM stage： lymphocytes： t=0.606， P=0.613; Stage I （1.78 ± 0.54）×109/L; Stage II （1.72 ± 0.53）×109/L; Stage III （1.70±0.61）×109/L; Stage IV （1.57 ± 0.55）×109/L; There was a significant positive correlation between cholesterol and lymphocytes in the gastric cancer group （r=0.218， P=0.029）. Conclusion Cholesterol and lymphocyte abnormalities can reflect the patient's condition and nutrition and immune status in patients with gastric cancer. Intervention of cholesterol content can affect the body's immune status and thus change its anti-tumor immune ability， and provide new opportunities and clinical basis for tumor immunotherapy. [Key words] Gastric cancer; Cholesterol; Lymphocyte; Tumor immunity

膽固醇與多種腫瘤存在相關性，但與胃癌的關聯性至今并未達到一致，近年，基于T淋巴細胞的腫瘤免疫治療取得新進展，研究發現膽固醇水平可影響CD8+T細胞的免疫功能[1]，而外周血中膽固醇與淋巴細胞的相關性未得到驗證;淋巴細胞作為能反應機體免疫能力的細胞，與臨床病理特征間關系的研究相對較少，該研究方便選取2017年 1 月—2019年1 月入住該院的100例胃癌患者病例，研究外周血中總膽固醇、總淋巴細胞水平，探討它們之間的相關性及與胃癌臨床病理特征的關系，為腫瘤免疫治療提供臨床依據，報道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選取入住該院的胃癌患者100例作為胃癌組，所有患者均經胃鏡和活檢或手術與病理確診，未行抗腫瘤治療。其中男72例，女28例;年齡25～81歲;分化程度：低分化63例，中分化15例，高分化12例;TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期14例，Ⅲ期37例，Ⅳ期38例。另將同期健康體檢者50名作為對照組，其中男24名，女26名;年齡 25～72歲。兩組性別、年齡差異無統計學意義（P>0.05），兩組患者均排除體重超過標準體重15%和原發性血脂代謝異常疾病、自身免疫性疾病、心肺肝腎嚴重功能障礙、高血壓病、甲狀腺疾病、糖尿病、中重度貧血者。所選病例均經過倫理委員會批準，且獲得患者及其家屬的知情同意。

1.2? 方法

分析兩組的血漿膽固醇、淋巴細胞，測定方法為：收集受試者空腹12 h后靜脈血2 mL，加入0.2 mL肝素抗凝，離心分離血清，用酶法測定TC水平，所用試劑為日立7600-120E全自動生化儀配套的試劑。使用流式細胞術測定兩組血漿中總淋巴細胞計數，美國BECKMAN-COULTER公司 EPICS-XL型流式細胞儀，試劑原裝進口，采用CD3-FITC/CD16+56-PE、CD4-FITC/CD8-PE鼠抗人雙色熒光抗體，OptilyseC溶血劑。取 100 μL抗凝外用靜脈血與20 μL熒光抗體充分混勻 ，室溫避光放置20 min后，加入500 μL溶血劑，搖勻后避光放置15 min，離心2 000 r/min離心10 min，去上清，加1 mL的PBS緩沖液，混勻后上機檢測。

1.3? 統計方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，用t檢驗。相關性采用Pearson相關性分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2? 結果

2.1? 胃癌組與健康對照組膽固醇、淋巴細胞含量的比較

胃癌組膽固醇水平高于對照組，胃癌組淋巴細胞水平低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2? 胃癌患者外周血膽固醇、淋巴細胞水平與臨床病理特征的關系

胃癌患者外周血膽固醇、淋巴細胞水平與其性別、浸潤程度、淋巴結轉移、遠處轉移、分化程度及TNM分期差異無統計學意義 （P>0.05），但有遠處轉移者膽固醇水平高于無遠處轉移者;中、低分化程度膽固醇水平高于高分化程度者;且隨著TNM分期越晚，外周血膽固醇水平有上升趨勢。有遠處轉移者淋巴細胞水平低于無遠處轉移者;且隨著TNM分期越晚，外周血淋巴細胞水平有下降趨勢。見表2。

2.3? 胃癌患者外周血膽固醇、淋巴細胞水平與臨床病理特征的相關性

胃癌患者外周血中總膽固醇、總淋巴細胞水平與其臨床病理特征均無相關性（P>0.05）。見表3。

2.4? 胃癌患者外周血總膽固醇與總淋巴細胞水平的相關性

胃癌患者外周血總膽固醇與總淋巴細胞水平之間有相關性（r=0.218，P<0.05）。見表3。

3? 討論

腫瘤患者普遍存在血脂紊亂現象，胃癌患者更傾向于高脂血癥，既往研究表明：膽固醇在胃癌及前期病變既胃高級別瘤變中呈高水平（P=0.013）[2-3]，TC與TNM分期及遠處轉移差異有統計學意義（P<0.05）。該研究發現胃癌患者外周血中總膽固醇含量（4.28±0.98）mmol/L高于正常（3.82±0.65）mmol/L;有遠處轉移者含量（4.46±0.97）mmol/L高于無遠處轉移者（4.17±0.97）mmol/L;分化程度低者含量較高[低分化（4.34±1.03）mmol/L;高分化（4.02±0.89）mmol/L];且隨著TNM分期越晚，外周血TC水平有上升趨勢I（4.18±0.88）mmol/L;Ⅱ（4.22±0.78）mmol/L;Ⅲ（4.16±1.07）;Ⅳ（4.45±0.98），與既往結果一致。胃癌患者外周血中TC的升高可能與脂蛋白酯酶 （LPL）及腫瘤壞死因子（TNF-α）有關：LPL是調節脂肪合成的重要酶之一，TNF-α由腫瘤細胞產生，進展期胃癌患者中TNF-α通過抑制LPL參與癌性惡液質的發生發展，從而降低 LPL活性及脂肪酸轉變能力，使外周血中TC不易向組織轉化，既血漿TC水平升高[4]。TC水平升高通過誘導促炎性細胞因子、趨化因子等高表達、增加氧化應激產物、引發 DNA突變、增加癌基因的表達，促使癌癥的發生和發展;同時增加腫瘤血管內皮生長因子的表達、促進腫瘤血管生成、增加血管通透性，促進腫瘤生長，提高腫瘤的轉移風險[5]。這些均表明高膽固醇與胃癌的發生、發展息息相關。但是本研究中，胃癌患者外周血總膽固醇與各臨床病理特征無明顯關聯（分化程度r=-0.105，浸潤程度r=0.154，淋巴結轉移r=0.021，TNM分期r=0.114;P>0.05），考慮可能為納入實驗組人數相關較少、較多晚期患者所致，因既往有研究表明TC與胃癌各臨床病理特征之間無相關性（分化程度r=-0.004，浸潤程度r=0.003，淋巴結轉移r=-0.005，TNM分期r=-0.056;P>0.05）[6]，所以不排除實際差異無統計學意義（P>0.05）的可能。

抗腫瘤免疫中發揮重要作用的細胞包括T、B、NK淋巴細胞，外周血T淋巴細胞亞群相互協調，維持機體正常的免疫功能，當其數量、比例異常時，機體會出現免疫功能紊亂并引發一系列病理改變;B細胞作為抗原提呈細胞誘導T細胞活化發揮細胞免疫作用，在腫瘤免疫中發揮正向作用;NK細胞通過增加MHCⅠ類分子表達參與適應性T細胞免疫應答，是天然免疫系統的重要組成部分，三者相輔相成發揮免疫監視作用。學術上認為，胃癌患者血清T細胞亞群中，CD3+T、CD4+T細胞表達較正常人和癌前病變者少，CD4+T/CD8+T細胞比值降低，且淋巴細胞的表達水平由其TNM分期決定[7];B細胞計數較正常人雖差異無統計學意義，但其絕對數值低于正常人（P>0.05），早期（Ⅰ、Ⅱ期）含量高于晚期（Ⅲ、Ⅳ期）（P<0.01）[8];NK細胞亞群（CD16、CD57、CD69）數量減少，且多為抑制性表型[9]，這些異常均說明機體出現負性調節的免疫抑制，識別和殺傷突變細胞的能力下降，從而有利于腫瘤細胞的生長、侵襲和轉移，這是胃癌發病的免疫學基礎。以上，既往研究大都集中在淋巴細胞亞群的探究中，表明胃癌患者外周血中各淋巴細胞計數較正常人降低，且與淋巴結轉移無相關性，差異無統計學意義（P=0.367），Ⅲ、Ⅳ期淋巴細胞水平較Ⅰ、Ⅱ期及正常人明顯較少，差異具有顯著性（P<0.01）[10]，該實驗證實胃癌患者總淋巴細胞計數（1.67±0.57）×109/L較正常人（1.90±0.48）×109/L低，同時也證實其與淋巴結轉移無相關性（r=-0.122，P=0.226）但隨著TNM分期遞增有明顯下降趨勢[I （1.78±0.54）;Ⅱ（1.72±0.53）×109/L;Ⅲ（1.70±0.61）×109/L;Ⅳ（1.57±0.55）×109/L]，說明不管基于總淋巴細胞還是各亞群，數量都較正常人低，隨著腫瘤的發展，機體免疫能力呈現下降趨勢，由于各免疫細胞的類型、密度、位置、表達模式及免疫應答狀態不同導致腫瘤的免疫控制失去協調性，所以總淋巴細胞計數與臨床病理特征間無明顯關聯。

HMG-CoA還原酶是膽固醇生物合成中的限速酶，抑制其活性減少TC的合成可抑制淋巴細胞擴增[11]，抑制膽固醇酯化酶ACAT1活性，增加細胞膜游離膽固醇水平可增強CD8+T細胞的抗腫瘤免疫反應[1]，上述研究證實TC的代謝調節會影響淋巴細胞增殖、信號傳導及免疫功能，該實驗首次研究兩者的相關性，證實具有顯著正相關性（r=0.218;P=0.029），可為腫瘤代謝免疫治療提供新的研究方向及臨床依據。既往研究發現高膽固醇組的記憶B細胞STAT3活性較正常膽固醇組顯著升高[12]，結合最新研究：EB病毒相關性胃癌與包括JAK2擴增在內的免疫應答基因異常調節有關[13]，有理由推測胃癌中TC可通過JAK2/STAT3信號通路發揮調節淋巴細胞免疫功能的作用，并可由相關拮抗劑調節轉化胃上皮細胞進而改變其表觀遺傳，因此，下一步可就其信號通路進行基因方面的研究，有望發現更高效的靶向治療藥物。

綜上所述，胃癌患者外周血中膽固醇、淋巴細胞水平與胃癌息息相關，監測其變化可判斷疾病進展情況及預后，同時本研究表明膽固醇與淋巴細胞正相關，從臨床層面證實了膽固醇代謝的調節可影響免疫細胞的適應性免疫應答活性，并為腫瘤的免疫治療提供新的思路。

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（收稿日期：2020-03-04）