斷血流中總黃酮的提取工藝優化

張曉沖 張穎

摘要：斷血流為唇形科風輪菜屬植物燈籠草（蔭風輪）Clinopodium polycephalum（Vaniot）C.Y.Wu etHsuan 和風輪菜 C.chinense（Benth.）O.Kuntze 干燥地上部分。含有皂苷、黃酮、揮發油等成分。本實驗對斷血流中的總黃酮的提取工藝進行了探討，確定了乙醇提取總黃酮的優化工藝為乙醇濃度80%、提取時間90min、提取溫度60℃，為進一步開發斷血流藥材進行了科學的探討。

關鍵詞：斷血流;黃酮;提取

斷血流為唇形科風輪菜屬植物燈籠草（蔭風輪）Clinopodium polycephalum（Vaniot）C.Y.Wu etHsuan和風輪菜C.chinense（Benth.）O.Kuntze 干燥地上部分。具有收斂止血的功效，用于崩漏、尿血、鼻衄、牙齦出血、創傷出血，適用于臨床上各種出血癥，尤其對婦科出血性疾病有較好的療效，味微苦、澀，性涼，歸肝經[1，2]。風輪菜和蔭風輪原為民間用藥，風輪菜始載于《救荒本草》（1406 年），蔭風輪始載于《植物名實圖考》（1848年），后被1977年版《中國藥典》收錄[3]，斷血流中的化學成分主要包括皂苷、黃酮、氨基酸、多糖、酚性成分和揮發油等成分[4，5]，其中黃酮類化合物已發現為17種，主要為黃酮和二氫黃酮，其中總黃酮含量約為2.0-2.3%[6]。斷血流的主要藥理作用來源于皂苷，有關皂苷的含量測定及藥理作用研究較豐富，黃酮類成分亦是具有多種明確藥理作用的天然成分之一，也有研究表明斷血流中的黃酮成分具有活血化瘀的作用，但其有關的提取分離工作鮮見報道，本實驗對斷血流中的總黃酮的提取工藝進行了探討，確定了乙醇提取總黃酮的優化工藝，為進一步開發斷血流藥材進行了科學的探討。

1 儀器與試劑

756型紫外可見分光光度計（上海元析），分析天平（上海蒲春），9015電熱鼓風恒溫干燥箱（上海環峰）;S26電熱恒溫水浴鍋（上海精宏）;斷血流（購自安徽亳州，經鑒定為藥材斷血流）篩盡泥土，低溫烘干至恒重，粉碎后備用;蘆丁（中國藥品生物制品檢定所），無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純，用水為蒸餾水。

2 實驗方法

2.1 供試品的制備

精密稱取斷血流藥材于圓底燒瓶中，在瓶中加入乙醇加熱回流提取，重復2次，合并提取液后回收乙醇至浸膏狀，乙酸乙酯萃取后備用。

2.2 標準曲線

稱取干燥后的蘆丁標準品0.001g加甲醇定容至100ml，職稱濃度0.1mg/ml的標準品溶液備用。吸取標準溶液0.00、1.00、2.00、4.00、8.00ml，依次加入水6ml、5%亞硝酸鈉溶液1ml、10%硝酸鋁溶液1ml、1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，每次加液后應放置6min，最后放置15min后測定波長510nm處的吸光度，得回歸方程Y=8.953X+0.0384，R2=0.9996。

2.3 含量測定

取各種工藝的斷血流藥材提取液1ml，加入甲醇定容至100ml，依次加入水6ml、5%亞硝酸鈉溶液1ml、10%硝酸鋁溶液1ml、1mol/L氫氧化鈉溶液10ml，每次加液后應放置6min，最后放置15min后測定波長510nm處的吸光度，計算提取液中總黃酮含量。

2.4 正交實驗設計

采取L9（34）正交表進行斷血流總黃酮提取工藝篩選，實驗因素見表1.

3實驗結果

3.1 單因素實驗

不同因素水平下斷血流的總黃酮提取結果表明在選取的因素范圍內，提取時間和乙醇濃度對于總黃酮提取率的影響基本為隨因素水平上升而上升的趨勢，提取溫度對總黃酮提取率的影響呈現先上升后下降的趨勢，其中乙醇濃度對提取率的影響最大，而提取溫度和時間則相對影響較小。

3.2正交實驗

在前期實驗基礎上，按表1的設計方案進行斷血流總黃酮提取工藝測試，以乙醇濃度、加熱時間和加熱溫度為因素，選擇三個水平進行正交實驗，結果見表2。

從表2結果可見斷血流總黃酮的最佳提取工藝為A3B3C2，即乙醇濃度80%、提取時間90min、提取溫度60℃，乙醇濃度對提取率的影響最大，而提取溫度和時間則相對影響較小。

4 討論

斷血流為唇形科風輪菜屬植物燈籠草（蔭風輪）和風輪菜干燥地上部分。具有收斂止血的功效，臨床上適用于各種出血癥。實驗結果顯示，乙醇回流提取法提取斷血流中的總黃酮，提取最佳工藝為：乙醇濃度80%、提取時間90min、提取溫度60℃。

斷血流藥理作用豐富，目前已由實驗證實具有止血作用、抗菌作用、降血糖作用、對心血管作用、抗炎作用、抗氧化作用、活血作用和收縮子宮作用等。由于斷血流的主要作用物質為皂苷類，目前該藥物的研究主要集中在皂苷的藥理和提取分離，斷血流中已發現17種黃酮類成分，主要為黃酮和二氫黃酮，有研究表明風輪菜的醇提物中以香蜂草苷為代表的水溶性較好的二氫黃酮類成分和以醉魚草皂苷 IV為代表的皂苷類成分是活血作用的主要物質基礎，且具有雙向作用即小劑量止血，大劑量活血[7]，CPS各劑量組具有活血化瘀的功效，能降低急性血瘀大鼠的全血比粘度、血漿比粘度和紅細胞壓積[8]。基于較好的藥理作用，本研究著眼于斷血流中黃酮類化合物的提取工藝，擴展了斷血流藥材的研究范圍，為規模提取分離其中的黃酮類成分并進一步開發利用藥材提供科學依據。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中國藥典（一部）.北京：中國醫藥科技出版社.2010.

[2]蔣凌云，劉圣.斷血流研究進展[J].基層中藥雜志.1999，13（3）：48-50

[3]昝麗霞.超聲提取-分光光度法測定斷血流總皂苷含量.西北大學學報（自然科學版）.2007，37（6）∶1016～1018.

[4]遲海東.路金才.風輪菜屬藥用植物研究進展[J].沈陽藥科大學學報.2006.23（2）：123-128.

[5]程霞.陳國廣.石紹華.止血中草藥斷血流研究進展[J].安徽醫藥.2007.11（5）：454-456.

[6]年四輝.劉麗敏.廖啟元，等.斷血流及其制劑中總黃酮的含量測定研究[J].中國民族民間醫藥，2012（4）∶37-38.

[7]陳靖宇.陳建民.肖培根.風輪菜屬植物蔭風輪和風輪菜的有效成分研究.北京：中國協和醫科大學中國醫學科學院博士學位論文.1997.

[8]余世春.許旭東.李亞偉.等.一種治療心血管疾病的中藥及制備方法.CN201010106719.5，2010-02-08.

基金：安徽中醫藥高等專科學校校級科研項目ZRKXY 201915。