病理診斷中快速冷凍切片的應用分析

范軍軍

冷凍切片技術是由Pieterde Riemer首創，手術中的新鮮標本應在最短時間內冷凍，組織變硬后進行切片處理。目前冷凍切片技術在臨床中運用廣泛，尤其是對于腫瘤患者，病理診斷結果直接影響治療方案[1-2]。為了做出全面完整的術中快速病理診斷，本實驗以200例患者為分析對象，探討病理診斷中快速冷凍切片的臨床應用價值，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2017年12月～2018年12月我院存檔的200例組織標本，男性92例，女性108例，年齡22～66歲，平均(33.14±7.22)歲；組織標本包括50例肝脾腎結腸等內臟組織、60例乳腺組織、20例卵巢組織、4例腦組織、56例甲狀腺組織、10例胃壁組織。所有組織標本均分別進行冷凍切片與常規石蠟切片病理診斷。本實驗經中國科學院大學附屬腫瘤醫院倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

1.2 方法組織標本取材以大小1.5 cm×1.5 cm×0.5 cm為宜，部分組織進行快速冷凍處理，按照組織類型的不同，冷凍的溫度也不同：腦組織為-16～-18 ℃，乳腺組織為-22～-30 ℃，胃壁與卵巢組織為-20～-22 ℃，甲狀腺組織為-18～20 ℃，冷凍時間為3～4 min，肝腎、淋巴結以及甲狀腺組織的冷凍時間約2 min。冷凍完成后進行切片處理，厚度為5～8 μm，將切片組織投入AF固定液約2 min后使用蘇木精染色[3]，水洗后運用鹽酸乙醇(1%)分化數秒之后再次水洗，水中返藍后加入水溶性伊紅(1%)約5 s，梯度乙醇脫水處理后中性樹脂封固。另外，部分組織按常規方法進行石蠟切片病理診斷。

2 結果

在200例組織標本中，冷凍切片診斷惡性腫瘤者81例，良性者119例；常規石蠟切片診斷惡性腫瘤者86例，良性者114例，術中冷凍切片與常規石蠟切片診斷一致者195例，符合率為97.50%，冷凍切片的漏診數為5例，誤診率為5.81%(5/86)。快速冷凍切片技術染色，切片染色鮮艷、質量佳，鏡下細胞形態清晰、組織結構明確，質、核對比確切(圖1)。

ABCD

3 討論

冷凍切片要求在較短時間內對病變做出精準的病理診斷，因此快速制作1張優質的冷凍切片具有重要意義。在臨床工作中冷凍切片機應保證24 h備用狀態，取材時若厚度超過5 mm時則需延長冷凍時間，若取材厚度低于2 mm，在切片時切片刀極易切到組織托頭，使切片刀損壞。因此，保證適當的切片厚度非常重要[4]。另一方面，全層凍硬的組織表層通常由于較硬且脆難以切片，操作時需于室溫下靜置20～30 s后再行切片處理。

人體組織內的液體成分為無機物與有機物的混合成分，大多需要在-1～-5 ℃才能將約80%的水分凍結成冰，該溫度范圍被稱為“最大冰晶生成帶”[5]。細胞速凍時組織細胞內外會形成較多晶核，呈現出細小針狀結晶體且均勻分布，組織內冰層推進速度比水的移動速度快，不對細胞形成機械損傷的同時維持細胞原本的狀態結構。若凍結的速度較慢則會因較大的冰晶顆粒損傷細胞。因此，在操作時要確保組織的驟冷效果，使其在最短時間內以最快的速度通過最大冰晶生成帶[6]。快速冷凍切片過程中所使用的刀片要保證其鋒利性，才能切出高質量的片子；同時適宜的切片厚度可有助于獲得染色鮮明清晰的片子。組織切片貼附于載玻片上，可以沿同一方向輕輕外展，有助于防止出現褶皺。常規制作過程中，冷凍切片在完成脫水后需經二甲苯處理以確保切片的透明度，然后使用中性樹膠進行封片處理，樹膠滴加時需注意適量，樹膠太濃稠容易溢出玻片，太稀則易出現空泡情況[7]。

冷凍切片的制冷方式分為二氧化碳法、氯乙烷法、半導體制冷法、恒冷箱式冷凍法等。二氧化碳法經10%中性福爾馬林加熱煮沸的過程中組織細胞會收縮變形；氯乙烷法中將氯乙烷試劑于標本噴射過程凍結，由于此試劑已停止生產，因此該方式亦逐漸被淘汰。半導體制冷法是運用水循環將電偶發熱端熱量帶走后使組織標本冷凍制冷的方法，其制冷效果與機器所設計的電流大小有影響。恒冷箱式冷凍法是當前運用最廣泛的類型，冷凍速度迅速，提供的性能可以完全滿足各類室溫下的切片工作。與常規的石蠟切片相比，冷凍切片的新鮮標本盡管未被固定液完全固定，但通過物理降溫法可以確保組織標本的基本形態，經福爾馬林、乙醇以及冰醋酸固定液的穿透作用，可以使細胞蛋白質得以沉淀，從而有效預防標本組織出現過渡收縮。切片在固定時，雖然切片厚度較薄，但有玻片作為支撐依托，因此不易產生變形問題，有利于保證組織細胞在顯微鏡下呈現完整的結構關系，提高診斷的準確性。

本組結果顯示，術中冷凍切片與常規石蠟切片診斷一致者195例，符合率為97.50%。快速冷凍切片技術染色的切片顏色鮮艷、質量佳，鏡下細胞形態清晰、組織結構明確，核質對比明確，值得臨床推廣使用。