外周血炎癥標志物聯合T淋巴細胞亞群檢測在新型冠狀病毒肺炎的臨床價值探討

屈滿英，孫瑞琳，劉慶峰，劉靜，李瑞璞

（廣東省第二人民醫院，廣東 廣州 510317）

2019年12月末爆發至今仍肆掠全球的由嚴重急性呼吸系統綜合征冠狀病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）感染的新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）是一種新發的急性呼吸道感染性疾病，具有極高的傳染性和一定的致死性，其傳染源隱蔽、傳播途徑多樣、臨床表現不典型、確診方法局限等特點[1]，人類普遍易感，尚無特效藥物。因此全球對COVID-19 的防控都較棘手。如何在COVID-19 疫情流行期間更好地管理COVID-19 疑似患者，防治潛在的疑似患者或者病毒攜帶者引起繼發感染，進行綜合防控具有重要的臨床價值和社會意義。本研究回顧性分析廣東省第二人民醫院確診的COVID-19 患者和細菌性肺炎患者的臨床資料，為臨床診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2019年10月1日—2020年1月31日本院收治的細菌性肺炎40 例（細菌性肺炎組），以及2020年1月25日—2020年2月28日COVID-19 患者35 例（COVID-19 組）的臨床資料。細菌性肺炎的診斷參照《中國成人社區獲得性肺炎診斷和治療指南（2016年版）》診斷標準[2]，COVID-19 診斷符合《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第7 版修正版）》的診斷標準[3]。COVID-19 臨床表現以發熱為主（90.5%），可有干咳、咽痛、頭痛、乏力及肌痛，極少數出現腹瀉等癥狀；而細菌性肺炎臨床以咳嗽、咳痰為主（93.6%），可合并發熱、乏力等癥狀；兩者借助流行病學、病原學、臨床癥狀，及胸部CT、實驗室檢驗等輔助診斷方法明確。兩組患者留取標本前均排除未使用糖皮質激素、免疫抑制劑或免疫調節劑。

1.2 方法

所有患者于入院后24 h 內，在使用抗生素治療前采集適量靜脈血送檢，采用自動全血細胞分析儀（日本東亞全自動血液分析儀，SYSMEX XN-3000）檢測血常規；采集患者靜脈血5 ml，以1 500 r/min離心20 min，取上層清液備檢，采用全自動生化分析儀（日本日立HITACHI 7600）以乳膠免疫透射比濁法及配套試劑檢測血清CRP 水平；采用全自動免疫分析儀（法國梅里埃生物技術公司，MINI-VIDAS2.0）以酶聯熒光法及配套試劑檢測血清PCT 水平；采用流式細胞儀（美國BD 公司）檢測外周血T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平，計算CD4+/CD8+值，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。外周血各值正常范圍：白細胞數（WBC）3.5×109～9.5×109個/L，淋巴細胞絕對值1.1×109～3.2×109個/L，CRP 0～8 mg/L，PCT＜0.05 ng/ml；T 淋巴細胞亞群各值正常范圍：CD3+絕對計數770～2 860 個/μl，CD4+絕對計數500～1 440 個/μl，CD8+絕對計數238～1 250 個/μl，CD4+/CD8+值1.00～2.47。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 20.0 統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗；計數資料以例（%）表示，比較用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別構成比、年齡、吸煙史比較，差異無統計學意義（P＞0.05）（見表1）。其中COVID-19 組有SARS-CoV-2 感染接觸史者32 例占91.4%，50 歲以上16 例，占45.7%。

2.2 兩組外周血炎癥標志物比較

兩組外周血WBC、淋巴細胞絕對值、PCT 和CRP 水平比較，差異有統計學意義（P＜0.05），細菌性肺炎組均高于COVID-19 組。見表2。

表1 兩組一般資料比較

2.3 兩組外周血T 淋巴細胞亞群

細菌性肺炎組和COVID-19 組外周血T 淋巴細胞亞群的CD3+、CD4+、CD8+細胞絕對計數比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），細菌性肺炎組高于COVID-19 組；而兩組CD4+/CD8+比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表3。

表2 兩組外周血WBC、淋巴細胞絕對值、CRP、PCT 比較 （±s）

表2 兩組外周血WBC、淋巴細胞絕對值、CRP、PCT 比較 （±s）

組別 n WBC/（×109/L） 淋巴細胞絕對值/（×109/L） PCT/（ng/ml） CRP/（mg/L）細菌性肺炎組 40 12.60±5.70 2.85±0.82 3.28±2.41 49.50±24.50 COVID-19 組 35 4.28±0.98 1.19±0.41 0.05±0.1 17.07±20.35 t 值 9.080 11.292 8.468 6.183 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

表3 兩組的T 淋巴細胞亞群絕對計數及比值比較 （±s）

表3 兩組的T 淋巴細胞亞群絕對計數及比值比較 （±s）

組別 n CD3+/（個/μl） CD4+/（個/μl） CD8+/（個/μl） CD4+/CD8+細菌性肺炎組 40 1 257±354 711±281 657±215 1.98±0.75 COVID-19 組 35 433±132 253±94 164±68 1.72±0.73 t 值 13.675 9.706 13.738 1.516 P 值 0.000 0.000 0.000 0.134

3 討論

COVID-19 傳染性強，截至2020年5月31日全球已確診病例超600 萬，重癥病例占15%～25%[4]，累計死亡超37 萬例，嚴重者可并發呼吸衰竭、急性呼吸窘迫綜合征（ARDS），病死率高[5]。本研究結果顯示，COVID-19 組有SARS-CoV-2 感染接觸史者32例（91.4%），50 歲以上的中老年人16 例（45.7%）。目前人類對于其致病機制還未完全明確，確診方法局限，且尚無特效藥物治療。對于不能排除潛在接觸史的疑似患者，臨床癥狀不典型，影像學表現為肺部感染，反復多次病毒核酸陰性時，臨床診斷及鑒別診斷有一定的難度。這部分無癥狀的SARS-CoV-2 感染者成為全球疫情防控的隱形危險因素[6]。臨床如何借助現有的檢驗技術聯合檢測，以便快速甄別COVID-19患者和疑似病例，對防治重癥新冠病毒性肺炎繼發細菌感染問題尤為關鍵。

感染相關生物標志物是肺部感染性疾病診斷和治療中常用實驗室指標，包括WBC、CRP、PCT 等。外周血WBC 是鑒別細菌感染的常用指標之一，易受機體應激反應、藥物等因素影響，存在一定的個體差異。CRP 是由肝細胞合成的急性時相反應蛋白，可準確、快速反映人體的急性感染狀況，敏感性高，臨床常用于早期感染性疾病的鑒別診斷[7]。PCT 是一種感染相關的生物標志物，由甲狀腺C 細胞合成和分泌的降鈣素前肽物質，不具備激素活性。PCT 的敏感性和特異性比較高，一般在人血清中很難檢測到，一旦遭受病毒、細菌、真菌等感染時將明顯升高，動態監測PCT 可用于臨床指導肺炎的診斷和抗菌藥物的使用療程[8]，而WBC、CRP、PCT 聯合檢測對細菌感染性疾病診斷及病情的評估具有一定的臨床價值[7]。本研究發現COVID-19 組WBC、淋巴細胞絕對值、CRP、PCT 水平均低于細菌性肺炎組，提示這些特點可作為肺部SARS-CoV-2 感染與細菌感染的鑒別要點之一。

T 淋巴細胞亞群是免疫系統中最重要的細胞群，其中CD3+是T 淋巴細胞表面表達分子，通過測定CD3+絕對計數可以反映T 淋巴細胞的數量；CD4+通過分泌細胞因子和表達不同的表面分子各自調節免疫網絡中其他細胞的生物活性，是具有輔助T、B 淋巴細胞應答功能的Th 細胞，能優先分化及引發吞噬細胞介導的宿主防御應答，在對抗細胞內病原體感染中發揮重要的作用；CD8+具有抑制T 淋巴細胞的細胞毒性作用；CD4+/CD8+值是直接反映宿主T 細胞免疫功能的重要指標。機體通過T 淋巴細胞亞群相互作用，維持良好的免疫功能狀態，對呼吸系統感染性疾病的治療及預后尤為重要[9]。臨床監測T淋巴細胞亞群各值絕對計數及比值的改變，能夠評估和判斷重癥肺炎患者預后[10]。血淋巴細胞功能的檢測是一種判斷機體細胞免疫功能的重要方法。目前對T 細胞亞群在COVID-19 這個新發流行病的研究較少。本研究結果顯示，COVID-19 組CD3+、CD4+和CD8+細胞絕對計數同步降低，均低于細菌性肺炎組，而兩組CD4+/CD8+值無差異；說明COVID-19患者外周血中T 細胞亞群其自身的變化規律；SARSCoV-2 較細菌感染明顯加劇宿主的細胞免疫功能損壞，導致免疫調控網絡失衡。有學者提出的細胞因子風暴學說在SARS-CoV-2 感染導致的ARDS 中起主要作用[11]導致出現不同程度的全身炎癥反應綜合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS），若SIRS繼續加重，全身靶器官功能損害則難以避免。COVID-19 患者CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細胞同步下降，下降的嚴重程度可能與肺部病變有關，進一步研究SARS-CoV-2 感染的發生機制，對重癥肺炎的早期預警、早期炎癥控制及免疫干預具有重要意義。

綜上所述，COVID-19 患者發病早期外周血炎癥標志物水平較細菌性肺炎低，而T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+細胞絕對計數均同步降低，上述特征可作為COVID-19 與細菌性肺炎的早期鑒別的重要依據之一。對SARS-CoV-2 疑似感染者應盡早完善外周血炎癥指標及T 淋巴細胞亞群，有利于快速識別及盡可能減少COVID-19 漏診，減少對社會的危害，也可評估有無繼發細菌感染，為全面診治、評估病情提供客觀依據，降低并發癥、改善預后、提高患者生存率等具有積極的重要意義。