老年冠心病病人循環lncRNA UCA1表達及其與預后的關系探討

李文杰，張 方，李曉蘭

冠心病(coronary heart disease，CHD)是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的簡稱，是老年人最常見的心臟病。高血脂、高血壓、吸煙是老年冠心病的危險因素，冠心病的臨床表現為心律失常、心絞痛、心肌梗死、心力衰竭和猝死，嚴重影響老年人的身體健康[1]。長鏈非編碼 RNA尿路上皮癌胚抗原 1(long non-coding RNA urothelialcarcinoma associated 1，lncRNA UCA1)在多種腫瘤中差異表達，對多種信號通路進行調控，也可參與轉錄后調控[2]。有關研究表明，lncRNA UCA1在心臟組織中呈現高表達的趨勢，因此，認為lncRNA UCA1是心血管疾病潛在的生物學標志物[3]，但是目前關于其在老年冠心病病人中的表達情況及與預后的關系尚不明確。因此，本研究通過檢測老年冠心病病人血清中lncRNA UCA1的表達情況，探討其與老年冠心病病人預后的關系，以期為老年冠心病病人的預后判斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1月—2018年5月在我院治療的老年冠心病病人154例作為冠心病組，年齡60～80(70.12±5.89)歲。另選取同期在我院進行體檢的健康者160名作為對照組，年齡61～80(69.47±6.19)歲。統計兩組總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇水平；Gensini評分根據冠狀動脈血管圖像進行評價，記錄無癥狀、心律失常、心絞痛、心肌梗死、心力衰竭例數，對冠狀動脈血管狹窄程度進行評價[4]。冠心病診斷標準：以冠狀動脈造影為依據，冠狀動脈中任何1支冠狀動脈狹窄程度≥50% 即為冠心病[5]。病例納入標準：①符合冠心病診斷標準；②經冠狀動脈造影確診；③年齡60～80歲；④冠心病病程>1年。排除標準：①近1年由于外因刺激引起的精神刺激者；②其他疾病引起的心律失常、心絞痛、心肌梗死、心力衰竭者；③病人之間有血緣關系者；④濫用藥物者。

1.2 主要儀器與試劑 實時熒光定量(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)儀(中國賽默飛世爾科技有限公司生產，型號：4375305)，低溫離心機(湖南凱達科學儀器有限公司生產，型號：GL21M)，TrizolTMLS Reagent(中國賽默飛世爾科技有限公司生產，貨號：10296028)，逆轉錄cDNA合成試劑盒(中國賽默飛世爾科技有限公司生產，貨號：K1622)，AceQ qPCR SYBR Green Master Mix(南京諾唯贊生物科技有限公司生產，貨號：Q111-01/02/03)。

1.3 qRT-PCR法檢測血清中lncRNA UCA1表達水平 分別采集冠心病病人、健康體檢者靜脈血4 mL，低溫離心機4 ℃下以4 000 r/min 的速率離心10 min，吸取上清液置于無RNA酶的已經標記好的5 mL 離心管中，置于-80 ℃冰箱中備用。

Trizol法提取總RNA后檢測RNA濃度，逆轉錄cDNA合成試劑盒合成cDNA。qRT-PCR儀檢測血清中lncRNA UCA1表達水平。根據GenBanK中lncRNA UCA1序列設計引物：lncRNA UCA1上游引物為5′-TGCCAGCCTCAGCTTAATCC-3′；lncRNA UCA1下游引物為5′-TCCCTGTTGC-TAAGCCGATG-3′。GADPH為內參序列：GADPH上游引物 為5′-GAAGGTGAAGGTCGGA-3′；GADPH下游引物為5′-GAAGATGGTGATGGGAT-3′。反應條件：95 ℃預變性60 s，95 ℃變性30 s，62 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，45個循環。2-△△CT法對lncRNA UCA1表達水平進行定量分析。

1.4 隨訪 所有病人出院后通過門診隨訪或電話隨訪，隨訪時間從出院后第1天開始，末次隨訪時間截至2018年10月31日，隨訪時間為5個月至2年，平均(15.36±3.17)個月，死亡病人以死亡時間為截止期。觀察記錄隨訪期間病人預后情況，預后不良情況即為隨訪期間出現終點事件，終點事件主要為心血管事件，包括心源性死亡、再發急性心肌梗死、非致死性心肌梗死、必須住院治療的再發心絞痛、血運重建等情況，其中心肌梗死判定方法為持續20 min以上胸痛或心電圖出現異常改變并伴有肌鈣蛋白異常增高；血運重建判定方法：經過外科手術或介入手術對以往病變血管再次治療或對血管新發狹窄的治療。不存在上述情況則為預后良好。

2 結 果

2.1 冠心病組和對照組血清lncRNA UCA1表達比較 冠心病組血清lncRNA UCA1表達水平低于對照組(P<0.05)。詳見表1。

表1 冠心病組和對照組血清lncRNA UCA1表達比較(±s)

2.2 冠心病組和對照組臨床資料比較 冠心病組與對照組男性比例、高血壓病史、吸煙史、低密度脂蛋白膽固醇、Gensini評分比較差異均有統計學意義(P<0.05)，體質指數(BMI)、糖尿病病史、高脂血癥史、飲酒史、總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖、餐后2 h血糖、血尿酸、收縮壓、舒張壓等比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 冠心病組和對照組臨床資料比較

2.3 冠心病組lncRNA UCA1表達水平與血脂、Gensini評分的相關性分析 采用Pearson法分析冠心病組lncRNA UCA1與血脂、Gensini評分的相關性，結果顯示，lncRNA UCA1表達水平與總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇水平無明顯相關(P>0.05)，與低密度脂蛋白膽固醇呈正相關(P<0.05)，與Gensini評分呈負相關(P<0.05)。詳見表3。

表3 lncRNA UCA1表達水平與血脂、Gensini評分的相關性分析

2.4 不同預后結局冠心病病人血清lncRNA UCA1水平比較 預后良好病人血清中lncRNA UCA1表達量高于不良預后病人(P<0.05)。詳見表4。

表4 不同預后結局冠心病病人血清lncRNA UCA1水平比較(±s)

2.5 影響老年冠心病病人不良預后的危險因素分析 單因素分析顯示，lncRNA UCA1表達、高血壓病史、低密度脂蛋白膽固醇、Gensini評分均是影響老年冠心病病人預后的危險因素；多因素分析顯示，lncRNA UCA1表達和Gensini評分是影響老年冠心病病人預后的獨立危險因素[HR=3.451，95%CI(2.424，4.629)，P<0.05；HR=2.632，95%CI(2.151，4.529)，P<0.05]。詳見表5。

表5 影響老年冠心病病人預后的危險因素分析

3 討 論

冠心病又稱冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，世界衛生組織將冠心病分為無癥狀心肌缺血、心絞痛、心肌梗死、心力衰竭和猝死5大類。冠心病是隨著冠狀動脈血管中內膜脂質和復合糖類積聚、出血及血栓的形成，病變積累纖維組織增生、鈣質沉著、動脈中層逐漸蛻變和鈣化造成動脈粥樣硬化，進而造成血管腔狹窄甚至阻塞，引起心肌缺血、缺氧、壞死而發生心臟病[6]。老年人隨著年齡增長身體各項機能逐步退化，體質較差且慢性病纏身，較易罹患心臟病，其中以冠心病最常見。與中青年冠心病病人相比，老年冠心病病人動脈粥樣硬化程度、血管腔狹窄更嚴重，預后也相對較差[7]。冠心病嚴重威脅老年人生命安全，其發病原因復雜，是臨床研究的熱點之一。老年冠心病病人預后情況受多種因素的調控[8]，伴有心絞痛、心肌梗死、缺血性心力衰竭和猝死影響老年冠心病預后情況[9-10]。目前尚無可作為老年冠心病預后判斷的有效生物指標，因此，本研究分析影響老年冠心病病人預后情況的因素。

長鏈非編碼 RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一段長度>200個堿基、缺少或無開放閱讀編碼框、不編碼蛋白質的RNA，循環系統中的lncRNA成為近兩年研究熱點。Li等[11]芯片檢測發現循環lncRNA在小鼠全血、血漿中均顯著高表達，lncRNA有望作為生物標志物。其中lncRNA UCA1是在膀胱移行上皮細胞癌中發現并命名，在膀胱癌中高表達，可作為診斷膀胱癌的生物學標志物，隨后研究發現lncRNA UCA1作為一種致癌基因在多種腫瘤中都表達異常[12]。Nie等[13]研究發現lncRNA UCA1在非小細胞肺癌組織中高表達與非小細胞肺癌病人存活時間縮短有關，低表達影響非小細胞肺癌細胞增殖和脫落。有研究顯示lncRNA UCA1在食管癌組織中顯著上調，且與預后不良相關，在食管癌細胞中高表達lncRNA UCA1可促進食管癌細胞增殖，低表達lncRNA UCA1可抑制食管癌細胞生長[14]。另有研究報道lncRNA UCA1可影響胰腺癌細胞的增殖、侵襲、遷移[15]。還有研究顯示，lncRNA UCA1基因僅在成人組織脾臟及心臟中表達，且在心臟表達水平較高，因此，認為lncRNA UCA1可能是急性心肌梗死的生物學標志物[16]。Pezawas等[17]研究發現，lncRNA UCA1在急性心肌梗死病人血漿中早期表達量明顯降低，第3天后逐漸升高，被認為是急性心肌梗死新的標志物。還有研究顯示，lncRNA UCA1可通過抑制P27的表達而加重心肌細胞的凋亡，從而參與心肌缺血再灌注過程中心肌損傷的發展[18]。本研究發現，冠心病組血清中lncRNA UCA1的表達水平低于對照組，與潘洪川等[19]研究結果一致，提示冠心病組血清中lncRNA UCA1的表達降低可能與冠心病發生有關。本研究結果顯示，冠心病組和對照組男性比例、高血壓病史、吸煙史、低密度脂蛋白膽固醇、Gensini評分比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，提示性別、高血壓病史、吸煙史、低密度脂蛋白膽固醇、Gensini評分水平都可能影響冠心病疾病發生。進一步分析發現血清中lncRNA UCA1水平與低密度脂蛋白膽固醇呈正相關，與Gensini評分呈負相關，提示冠心病病人血清中lncRNA UCA1水平可能影響低密度脂蛋白膽固醇、Gensini評分。預后分析發現，預后良好的冠心病病人血清lncRNA UCA1表達量高于不良預后的冠心病病人，提示血清中lncRNA UCA1表達情況可能影響冠心病病人預后。進一步分析發現，lncRNA UCA1表達和Gensini評分是影響老年冠心病病人預后的獨立危險因素，提示檢測血清中lncRNA UCA1表達和Gensini評分可以判斷病人預后恢復情況，從而加強對預后不良病人的監控，及時進行治療，以改善預后。

綜上所述，老年冠心病病人血清中lncRNA UCA1低表達，可能通過影響體內低密度脂蛋白膽固醇含量、Gensini評分影響冠心病發生，與病人預后情況有關。由于考慮到冠心病可能受其他因素的影響，本研究沒有充分研究lncRNA UCA1表達量和冠心病的相關性，存在一定的缺陷。