LncRNA SNHG7在肝癌組織中的表達水平及臨床意義

郭克鋒 常英英 李宗民 柳玉花

肝細胞癌(HCC)是一種常見的惡性腫瘤,具有發展迅速、侵襲性強、預后差等特點[1-2]。長非編碼RNA(lncRNA)是指長度超過200個核苷酸，缺乏蛋白質編碼能力的RNA[3]。很多lncRNA已被證實在腫瘤中異常表達，參與各種腫瘤的發生和進展過程[4]。這些異常表達的lncRNA可以作為生物學標志物用于判斷腫瘤的進展情況及評價預后[5-6]。

Cui等人[7]通過比較早期復發的有轉移的HCC組織和晚期復發的無轉移的HCC組織的lncRNA表達譜，確定了SNHG7可能參與HCC細胞轉移，并在體外證實SNHG7參與了肝細胞癌細胞的侵襲。然而，SNHG7與HCC患者臨床指標及預后的關系尚未有相關報道。因此，本研究通過檢測SNHG7在HCC組織中的表達情況，分析其表達的臨床意義。

資料和方法

一、研究對象

本研究經本院研究倫理委員會批準，所有患者均獲得知情書面同意。組織從我院60例肝癌患者的術后腫瘤組織及相應的正常肝組織標本中采集，所有腫瘤均經手術標本病理證實。所有患者均未接受術前放化療，臨床基本特征見表1。

二、細胞培養

采用含90%DMEM高糖+10%FBS的培養基培養人肝癌細胞系HepG2、Huh6、Huh7、Hep3B和人正常肝細胞系LO2(ATCC)。細胞培養環境為37℃和5%二氧化碳。

三、組織RNA提取及qRT-PCR

根據說明書，用Trizol試劑(Invitrogen)提取總RNA。采用Primer- Script one step RT-PCR kit試劑盒(Takara)將RNA逆轉錄成cDNA，使用ABI Prism 7900HT(Biosystems)系統進行qPCR。以GAPDH的表達為內參，SNHG7的相對表達量用2-ΔΔCt法計算。引物序列，SNHG7-F: 5′-GTGTGTCCCT-TGGTGGAGAG-3′, SNHG7-R: 5′-TCCCAGATACCAGCG-AAGGA-3′；GAPDH-F: 5′-CGCTCTCTGCTCCTCCTGTTC-3′, GAPDH-R: 5′-ATCCGTTGACT-CCGACCTTCAC-3′。

四、統計學分析

采用SPSS 17.0軟件對數據進行分析，數據以均數±標準差表示。使用t檢驗或χ2檢驗比較兩組間差異，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Cox比例風險回歸模型進行單因素及多因素分析。P<0.05為差異具有統計學意義。

結 果

一、SNHG7在HCC組織和細胞系中高表達

首先，我們采用qRT-PCR檢測了60對肝癌組織及相應的肝正常組織(NLT)中SNHG7的表達水平。結果顯示，肝癌組織中SNHG7的表達水平明顯高于正常肝組織(P<0.05)。而且，人肝癌細胞系HepG2、Huh6、Huh7和Hep3B中SNHG7的表達水平明顯高于人正常肝細胞系LO2(P<0.05)。此結果表明SNHG7在HCC組織和細胞系中高表達。

二、 SNHG7表達與HCC患者臨床病理因素的相關性

用SNHG7表達的中位數將HCC患者分為SNHG7高表達組(n=30)和SNHG7低表達組(n=30)，并與患者臨床病理因素進行比較。結果表明SNHG7表達與TNM分期、腫瘤數目及腫瘤微血管侵犯密切相關(P<0.05)(表1)。

表1 SNHG7表達與HCC患者臨床病理因素比較

三、SNHG7高表達與HCC患者低生存率有關

我們用Kaplan-Meier法對兩組患者進行生存分析。結果顯示，SNHG7高表達的HCC患者無瘤生存時間(DFS)和總體生存時間(OS)較短(P<0.05)(圖1)。這個結果表明SNHG7高表達提示HCC患者低生存率。

圖1 SNHG7高表達與低表達的HCC患者的無瘤及總體生存比較

四、SNHG7表達是影響HCC患者預后的獨立危險因素

用COX單因素分析尋找影響HCC患者預后的因素，將P<0.05的因素納入COX多因素分析，結果表明，TNM分期、腫瘤數目、腫瘤微血管侵犯和SNHG7表達是影響HCC患者無瘤生存的獨立危險因素；TNM分期、腫瘤微血管侵犯和SNHG7表達是影響HCC患者總體生存的獨立危險因素。因此，SNHG7表達是影響HCC患者預后的獨立危險因素。

討 論

我們的研究發現，SNHG7在HCC組織中的表達明顯高于正常肝組織，而且，SNHG7在HCC細胞系中的表達亦明顯高于人正常肝細胞系。研究表明，SNHG7可作為癌基因在多種腫瘤中表達上調并發揮促進腫瘤發展的作用。例如，Zhang等[8]報道SNHG7在黑色素瘤中高表達，可通過上調SOX4促進黑色素瘤細胞的侵襲和遷移；Sun等[9]證實SNHG7在乳腺癌中上調，并通過miR-34a啟動EMT和Notch-1通路促進乳腺癌的發生和進展。因此，HCC中高表達的SNHG7也可能發揮癌基因的作用促進腫瘤進展。

也有研究表明，SNHG7的表達與腫瘤的預后相關。例如，Cheng等[10]的研究表明SNHG7在胰腺癌組織和細胞系中高表達，其高表達與胰腺癌預后不良相關；Chi等[11]發現在神經母細胞瘤中上調的SNHG7與神經母細胞瘤患者的低生存率相關。本研究中，我們將SNHG7的表達與HCC患者的臨床病理因素進行了對比，結果表明SNHG7的表達與TNM分期、腫瘤數目及腫瘤微血管侵犯密切相關。生存分析發現，SNHG7高表達提示HCC患者低無瘤生存率和總體生存率。同時，COX單因素和多因素分析表明SNHG7表達是影響HCC患者預后的獨立危險因素。因此我們認為SNHG7在HCC中有作為臨床生物學標志物的潛力。

綜上，我們的結果表明，SNHG7在HCC中高表達，其表達與腫瘤的進展情況及不良預后密切相關。SNHG7在HCC發生和發展過程中的作用及相關分子機制需進一步研究。