骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞玻璃體腔移植對大鼠青光眼模型視神經(jīng)的保護(hù)作用

田洪益，謝碧華，羅清禮

0 引言

青光眼(glaucoma)是老年人群中常見的眼科疾病，具有不可逆性[1]。青光眼的特征是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells,RGCs)的進(jìn)行性退化和不能分裂或再生，被視為神經(jīng)干細(xì)胞生成性疾病，與其他疾病如阿爾茨海默氏癥或帕金森病一樣，最終由神經(jīng)功能缺陷引起[2]。青光眼的臨床治療主要有藥物和手術(shù)治療，但其治療效果不是很理想，不能有效阻止視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡[3]。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一種能夠自我更新的多能干細(xì)胞，具有多向分化潛能和免疫調(diào)節(jié)作用，包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)等[4]。其中，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是具有自我更新的非造血干細(xì)胞，具有多系分化潛能，能夠分化為多種細(xì)胞譜系，如：脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、表皮細(xì)胞等[5-6]。因此，本實驗研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞玻璃體腔移植是否對大鼠青光眼模型有改善作用，是否對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞有保護(hù)作用。

1 材料和方法

1.1 材料35只體質(zhì)量180～220g Lewis大鼠購自中國科學(xué)院上海斯萊克實驗動物有限公司。IMDM培養(yǎng)基和胎牛血清購自美國Gibco公司。Percoll分離液、PBS溶液、茜素紅S、油紅O和葡聚糖四甲基羅丹明購自美國Sigma公司。pGFP-N試劑購自美國Clontech公司。CD29抗體、CD45抗體、CD44抗體、CD90抗體、CD106抗體和CD14抗體購自美國Abcam公司。HE試劑盒購自北京中杉金橋公司。RIPA裂解液購自北京索萊寶公司。IGF1抗體、BDNF抗體、β-actin抗體和山羊抗兔(鼠)IgG二抗購自美國Cell Signaling Technology公司。PVDF膜購自美國Millipore公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)取5只雄性Lewis大鼠，采用麻醉處死，立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺內(nèi)，固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。……