污泥中糞大腸菌群測定的方法驗證

2020-11-05 05:27:08章維維顧其波

綠色科技 2020年18期

章維維，顧其波

(1.杭州嘉澍環境監測有限公司，浙江杭州 311100;2.杭州市交通運輸行政執法隊，浙江杭州 310004)

1 引言

隨著經濟發展和環保意識的增強，我國城鎮污水處理以及各類型工業污水處理事業不斷發展，隨之產生的污泥量也日益增加。污泥是在污水處理廠凈化污水過程中產生的沉淀物，其中含有大量需氧菌、兼性厭氧菌和異養菌[1]。污泥中的病原物進入環境后，會污染周圍環境，威脅人類健康[2]。USEPA和歐盟(EU)都以糞大腸菌群數量為標準判斷污泥是否適用于土地利用[3]，同時糞大腸菌群菌值也是城鎮污水處理廠的污泥穩定化控制指標[4]。本文以杭州嘉澍環境監測有限公司創新課題《污泥特性分析與分類處置技術研究》為依托，開展污泥中糞大腸菌群新項目驗證，按要求完成相關試驗分析，在此與同行做個簡單交流。

2 實驗部分

2.1 儀器和設備

采樣瓶(500 mL帶螺旋帽或磨口塞的廣口玻璃瓶)；高壓蒸汽滅菌器(115 ℃、121 ℃可調)；恒溫培養箱或水浴鍋(允許溫度偏差36 ℃±1 ℃、44 ℃±0.5 ℃)；天平(感量0.001 g)；革蘭氏染色用有關器材；顯微鏡；振蕩器；一般實驗室常用儀器和設備。注：玻璃器皿及采樣器具試驗前要按無菌操作要求包扎，121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min備用。

2.2 試劑

乳糖膽鹽培養基(廣東環凱微生物科技有限公司)；乳糖復發酵培養基(青島海博生物技術有限公司)；伊紅美藍瓊脂、革蘭氏染色套裝(北京路橋技術股份有限公司)。

2.3 樣品采集、運輸與保存

用于糞大腸菌群測定的采樣瓶，應用可耐滅菌處理的廣口玻璃瓶。滅菌前，把具有玻璃塞的采樣瓶用鋁箔或厚的牛皮紙包裹，瓶頂和瓶頸都要裹好，在115 ℃經高溫滅菌20 min。采得的泥樣應立即送檢，時間不超過2 h，如不能立即送檢，應置于冰箱內，時間不超過24 h，否則將影響檢驗結果[5]。

2.4 檢測方法

稱取充分混勻污泥樣品10 g，放于裝有90 mL滅菌生理鹽水(.8%)的三角瓶內，充分搖勻，制成1∶10均勻稀釋液。用1 mL滅菌吸管吸取1∶10菌液，注入9 mL滅菌試管內，搖勻，制成1∶100均勻菌液。另取一支1 mL吸管，按照上述操作步驟，依次制10倍稀釋菌液，如此每遞增稀釋一次，即換用一支1 mL滅菌吸管。不同的污泥樣品，要選擇適宜的稀釋度。

分別用1 mL滅菌吸管吸取4個稀釋度污泥樣品，接種于乳糖膽鹽發酵管內，置(44±0.5)℃培養箱中培養24 h，此為初發酵試驗。將培養后，產酸產氣或只產酸的發酵管，用接種環取發酵液，劃線接種于伊紅美藍瓊脂平板，置(36±1)℃培養24 h。培養后，用接種環挑取糞大腸菌群可疑菌落的一小部分，進行革蘭氏染色，鏡檢。經鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，挑取蓋該可疑菌落的另一部分接種乳糖發酵管，置(44±0.5)℃培養箱中培養24 h，如產酸產氣，即證實有糞大腸菌群存在。通過查糞大腸菌值表，報告樣品糞大腸菌值/g(mL)。