自然早產與足月分娩中胎盤Survivin表達量及妊娠時間的相關性研究

金亞玲　王祥珍

【摘要】 目的 探討自然早產與足月分娩中胎盤Survivin表達量與妊娠時間的相關性。方法 60例分娩產婦， 按照是否足月分娩分為早產組與足月產組， 每組30例。在產婦分娩后提取胎盤組織， 使用反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）定量檢測胎盤Survivin mRNA相對表達量， 比較兩組胎盤組織中Survivin mRNA相對表達量， 分析Survivin mRNA相對表達量與妊娠時間的相關性。結果 早產組產婦胎盤組織中Survivin mRNA相對表達量（0.78±0.27）明顯低于足月產組的（1.41±0.23）， 差異具有統計學意義（P<0.05）。經過相關性分析結果提示， 早產組產婦平均 Survivin mRNA相對表達量與妊娠時間呈線性正相關（r2=0.680， F=6.025， P<0.05）， 足月產組平均Survivin mRNA相對表達量與妊娠時間無線性相關性（r2=0.337， F=0.385， P>0.05）。結論 胎盤滋養細胞凋亡與早產有關， 而Survivin因子表達不足會使胎盤滋養細胞凋亡， Survivin表達量降低與早產的時間密切相關， 足月后Survivin表達量與妊娠時間無相關性。

【關鍵詞】 早產;足月分娩;Survivin表達;相關性;胎盤組織

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.28.016

Study on the correlation between placental Survivin expression and gestational time between Spontaneous preterm delivery and full-term delivery? ?JIN Ya-ling， WANG Xiang-zhen. Obstetrics and Gynecology Department， Shenzhen Nanshan District Maternity and Child Health Hospital， Shenzhen 518067， China

【Abstract】 Objective? ?To discuss the correlation between placental Survivin expression and gestational time between spontaneous preterm delivery and full-term delivery. Methods? A total of 60 cases of delivery women were divided into preterm delivery group and full-term delivery group according to whether they delivered at full term， with 30 cases in each group. The placental tissue was extracted after the parturients gave birth， and the relative expression of Survivin mRNA in the placenta was quantitatively detected by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR）， and the relative expression of Survivin mRNA in the placental tissues of the two groups was compared. The correlation between Survivin mRNA relative expression and gestational time was analyzed. Results? ?The expression of Survivin mRNA in the placenta （0.78±0.27） of preterm delivery group was obviously lower than （1.41±0.23） of full-term delivery group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The results of correlation analysis showed that the mean relative expression of Survivin mRNA

was positively correlated with gestational time in preterm delivery group （r2=0.680， F=6.025， P<0.05）， but there was no linear correlation between gestational time and mean survivin mRNA expression in term delivery group （r2=0.337， F=0.385， P>0.05）. Conclusion? The apoptosis of placental trophoblast is related to premature delivery， and insufficient expression of Survivin factor can cause placental trophoblast cell apoptosis. The decrease of Survivin expression is closely related to the time of preterm delivery， and there is no correlation between Survivin expression after full-term and pregnancy time.

【Key words】 Preterm labor; Full-term labor; Survivin expression; Correlation; Placental tissue

早產是產科面臨的棘手問題， 且全球發病率逐年增加， 給提高孕產婦安全帶來了極大的挑戰。導致早產的因素眾多， 主要包括胎盤因素和胎盤外因素。胎盤因素包括胎膜早破、雙胎及多胎、前置胎盤、胎盤早剝等， 胎盤外因素包括妊娠期高血壓綜合征、妊娠合并癥、妊娠期糖尿病或糖耐量異常[1]， 甚至孕婦微生態菌落均可影響分娩結局。目前， 主要研究更多關注在胎盤病變， 其中胎盤滋養細胞的異常發育是導致早產的重要原因。研究表明， 胎盤滋養細胞凋亡與早產有關， 其中胎盤滋養細胞Survivin因子表達不足所致的細胞過度凋亡可能是其引起胎盤功能低下的原因， 最終導致早產發生的重要機制[2]。盡管抗凋亡因子Survivin與早產關系密切， 但是否與早產分娩的時間有相關性尚未見相關報道。為此， 本研究選擇本院的孕產婦為研究對象， 進一步分析Survivin表達量與妊娠時間的相關性， 現在報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年5月～2019年5月收治的60例分娩產婦， 年齡22～35歲， 妊娠時間28～42周， 本研究經本院醫學倫理委員會審批。按照是否足月分娩分為早產組與足月產組， 每組30例。早產組產婦平均年齡（28.4±3.8）歲， 平均妊娠時間（32.7±3.2）周;足月產組產婦平均年齡（29.2±4.5）歲， 平均妊娠時間（39.2±2.2）周。兩組年齡比較， 差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。

納入標準：①產婦均經過嚴格產檢， 不具有妊娠高血壓綜合征;②無糖尿病、肝炎、甲狀腺功能亢進（甲亢）、心臟病、肺結核、陰道炎等合并癥;③無子宮占位性病變及子宮肌層、宮頸等異常發育;④精神無異常;⑤全部患者均自愿參與研究并簽署知情同意書。

排除標準：①產婦產檢過程有異常指標， 如胎兒窘迫、凝血異常等高風險并發癥;②拒絕捐獻胎盤進行醫學研究;③有遺傳學異常或家族性疾病史。

1. 2 方法 收集產婦妊娠時間。在產婦自然分娩出（或剖宮產娩出）胎盤后， 迅速在無菌條件下轉移胎盤至冰塊上， 提取胎盤母體面中央垂直位置至胎兒面， 約1 cm3 大小的組織， 放入-80℃液氮罐中速凍。取出標本冰上超聲勻漿機研磨， 參照TRizol法提取總RNA， 用ddH2O稀釋1 μl樣品200倍后測定RNA濃度與純度。引物由Primer軟件設計、Takara公司合成， 參照反轉錄試劑盒自帶實驗流程建議說明， 選擇42℃反轉錄50 min， 95℃ 5 min滅活反轉錄酶。使用ABI 7300 Real-Time PCR System進行Syber Green 熒光定量RT-PCR檢測， 其反應體系為 SYBR Premix Ex Taq II（2X）12.5 μl、上下游引物各1 μl、cDNA 2 μl和dH2O 8.5 μl， 擴增條件為95℃預變性30 s;95℃變性5 s， 60℃退火30 s， 共40個循環。分析Survivin mRNA/ GADPH mRNA， 采用2-ΔΔCt法進行計算。本研究中的Survivin mRNA引物序列F-5′-GCAGGGGACAGGTGGGAAGT3′， R-5′GACTCCTGCCACTGGTTCATAC3′。GADPH mRNA引物序列F-5′CGGAGTCAACGGATTTGGTCGTAT 3′， R-5′AGCCTTCTCCATGGTGGTGAAGAC 3′。

1. 3 觀察指標 比較兩組胎盤組織中Survivin mRNA 相對表達量[Survivin mRNA（/GADPH）]， 分析Survivin mRNA相對表達量與妊娠時間的相關性。

1. 4 統計學方法 采用SPSS23.0統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;相關性檢驗采用應用Spearman等級相關分析法。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2. 1 兩組胎盤組織中Survivin mRNA相對表達量比較

早產組產婦胎盤組織中Survivin mRNA相對表達量（0.78±0.27）明顯低于足月產組的（1.41±0.23）， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 Survivin mRNA相對表達量與妊娠時間的相關性分析 經過相關性分析結果提示， 早產組產婦平均 Survivin mRNA相對表達量與妊娠時間呈線性正相關（r2=0.680， F=6.025， P<0.05）， 足月產組平均Survivin mRNA相對表達量與妊娠時間無線性相關性（r2=0.337， F=0.385， P>0.05）。見表2。

3 討論

早產主要是指母體妊娠時間8～37周就分娩， 是常見的妊娠并發癥。主要臨床表現為子宮收縮、陰道少量出血、羊水流出、持續性腰痛等癥狀， 給產婦的生命安全造成威脅。此外， 早產對新生兒的影響也較大， 容易使新生兒出現低體溫、呼吸窘迫綜合征、動脈導管閉合、腦出血、慢性腎病、肺功能障礙等并發癥， 對新生兒的生命健康和發育影響較大， 導致新生兒的生存率下降， 致殘率升高。有研究顯示， 約15%早產的新生兒最終死亡[3]。目前， 早產的病因仍不是十分清楚， 但是可以由多因素導致。隨著科技不斷進步， 人們的生活條件有所改善， 許多不合理的飲食習慣和不良的生活習慣都會增加早產的風險， 如吸煙、飲酒等。在人們研究胎盤病變過程中， 發現胎盤滋養細胞的異常發育是導致早產的重要原因， 其中胎盤滋養細胞Survivin因子表達不足能夠使細胞過度凋亡， 進而可以引起胎盤功能低下， 最終導致早產。Survivin是胚胎組織及腫瘤組織中發現的凋亡抑制新基因。可直接作用于Caspase-3和Caspase-7活性減輕細胞凋亡[4]， 也可參與調控周期蛋白激酶CDK4和CDK2相互作用阻斷凋亡信號通路[5]。Survivin的表達對于妊娠的結局有著極為重要的調控效果。研究發現， 胎盤Survivin表達降低是導致妊娠期高血壓尤其是重度子癇的關鍵原因， 也與反復性、復發性自然流產密切相關[6]。同時， 胎盤Survivin表達量與胎盤重量、新生兒體重也呈正相關[7]。然而， 胎盤的重量和成熟度關系密切。在自然早產患者中凋亡抑制因子Survivin的表達水平下降會促使細胞過度凋亡現象的發生， 致使胎盤功能下降， 不利于胎盤成熟[8]。王莉等[9]觀察早產患者的胎盤滋養細胞發現， 其中Survivin表達量顯著性下降， 從而導致滋養細胞侵襲不足、胎盤著床過淺， 進而發生早產[9， 10]。

本研究觀察了不同孕周期（28～42周）產婦胎盤中Survivin mRNA相對表達量， 結果顯示早產組產婦胎盤組織中Survivin mRNA相對表達量（0.78±0.27）明顯低于足月產組的（1.41±0.23）， 差異具有統計學意義（P<0.05）。這與徐小華等[8]研究結果一致。同時， 本研究還發現， 在早產組產婦胎盤滋養細胞中Survivin mRNA相對表達量與妊娠時間成線性正相關， 這也進一步證實了Survivin在促進胎盤成熟中的作用。

綜上所述， 早產是一項威脅產婦和新生兒生命健康的重要問題， 雖然病因尚未明確， 但可以發現許多誘發因素可以導致早產。通過不斷研究發現， 胎盤滋養細胞凋亡與早產有關， 而Survivin因子表達不足會使胎盤滋養細胞凋亡， 進而使胎盤功能低下， 最終導致早產的發生。通過本次研究， 為以后臨床研究相關內容提供依據。

參考文獻

[1] 黃玉晶， 王靈巧， 蘭蘭， 等. 2005-2011年我國早產相關因素的Meta分析. 現代預防醫學， 2014， 41（12）：2129-2133.

[2] 黃玲玲. 細胞凋亡抑制因子在自然早產胎盤的表達及其臨床意義. 海南醫學， 2011（13）：9-11.

[3] 鄭雙云， 徐小華， 張仙， 等. 細胞凋亡抑制因子Survivin的表達水平與自發性早產的關系研究. 中國婦幼衛生雜志， 2018， 9（3）：10-12.

[4] Davoodi R， Esmailzadeh bahabadi S， Najafi SH， et al. Effect of Hydro Alcoholic Extract of Citrullus Colocynthis Fruit on Caspase 3 Gene Expression in MCF-7 Breast Cancer Cell Line. Journal of Shahid Sadoughi University of Medical Sciences， 2015， 23（5）：508-518.

[5] Deng L， Lu Y， Zhao X， et al. Ran GTPase protein promotes human pancreatic cancer proliferation by deregulating the expression of Survivin and cell cycle proteins. Biochemical & Biophysical Research Communications， 2013， 440（2）：322-329.

[6] 張素芝， 杜麗榮， 韓宏偉， 等. 反復自然流產患者妊娠組織中Survivin、VEGF及Stat3的表達及相關性. 河北醫藥， 2012， （11）：14-16.

[7] 李宗英， 趙得熊， 張海燕， 等. 高原地區妊娠期高血壓產婦胎盤Stat3、Survivin及MMP-2的表達水平及意義. 中國現代醫學雜志， 2019（14）：40-44.

[8] 徐小華， 鄭雙蕓， 金亞玲， 等. 自然早產胎盤中細胞凋亡抑制因子survivin表達水平. 中國優生與遺傳雜志， 2016（4）：28-30.

[9] 王莉， 李清雪， 宋春紅， 等. Survivin、S100A12的表達與早產關系的研究. 中國計劃生育和婦產科， 2016， 8（7）：9-11.

[10] 周杰， 孟靜雯， 肖建平. 孕婦血清學標志物預測胎盤缺血性疾病的研究進展. 中國婦幼保健， 2018， 33（22）：5294-5297.

[收稿日期：2020-06-08]