血漿制備時間和速凍方法對冷沉淀凝血因子質量的影響觀察

河南省商丘市中心血站（476000）陳慧

冷沉淀是指新鮮冰凍血漿在合適溫度下融化分離出來的白色不溶物，其含有豐富的凝血因子Ⅷ（FⅧ）與纖維蛋白原（Fib），在血友病等凝血功能障礙性疾病治療中具有重要地位[1]。但FⅧ穩定性較差，血漿制備時間、速凍方法等因素均會影響其活性[2]，為此，此次研究探討了血漿制備時間和速凍方法對冷沉淀凝血因子質量的影響，以期尋找合適的制備方法，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年1月～2019年12月我站采集的96份血液樣品，每份均為400mL，所有血液均未見凝血，采集時間≤13 min。使用血液保存液Ⅲ進行保持，保存溫度為2℃～6℃。

1.2 研究方法 ①新鮮冰凍血漿制備：以3800轉/min，10min，4℃的條件離心血液樣本分離血漿。分別留取2h、4h、6h、8h制備好的新鮮血漿各24份（A、B、O、AB四種血型每種各6份）。將制備后的新鮮血漿分裝為2份，分別標記為A組和B組。其中A組血漿使用平板速凍機-55℃下速凍30min；B組則使用低溫保存箱速凍2h。所有新鮮冰凍血漿均在-20℃條件下保存。②冷沉淀制備：使用虹吸法制備冷沉淀，冷沉淀的容量為（40±5）ml，熱合后立即進行速凍，并于-20℃條件下保存。③FⅧ和Fib檢測：將冷凍保存的冷沉淀于37℃水浴鍋中融化，使用凝固法進行檢測。

1.3 觀察指標 比較兩組不同血漿制備時間下冷沉淀中FⅧ活性和Fib含量。

1.4 統計學方法 本次研究使用SPSS22.0、Excel處理數據，FⅧ活性和Fib含量等定量資料以±s表示，行t/F檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組不同血漿制備時間下冷沉淀中FⅧ活性比較 A、B兩組不同制備時間下FⅧ活性差異有統計學意義，且B組FⅧ活性組內差異有統計學意義（P<0.05），但A組FⅧ活性組內差異無統計學意義（P>0.05），見附表1。

2.2 兩組不同血漿制備時間下冷沉淀中Fib含量比較 A、B兩組不同制備時間下Fib含量差異無統計學意義（P>0.05），且A、B兩組組間差異無統計學意義（P>0.05），見附表2。

3 討論

冷沉淀是臨床用于凝血功能障礙性疾病治療的常用血液制品，其主要成分為凝血因子和蛋白。新鮮冰凍血漿是指新鮮采集的全血經低溫離心后取上清冷凍而來，是冷沉淀的直接來源[3]。如何有效控制FⅧ活性是制備新鮮冰凍血漿的關鍵，此次研究對比了不同血漿制備時間和速凍方法對冷沉淀FⅧ活性和Fib含量的影響，此次研究根據血漿制備時間和速凍方法不同將96份血液樣品共分為了8組，結果顯示各組獲得的冷沉淀均符合國家標準，但采用低溫冰箱速凍法冷沉淀的B組在不同制備時相下的FⅧ活性均低于采用平板速凍法沉淀的A組，且隨著制備時相延長，兩組FⅧ活性均有不同程度下降，這表明速凍方法與制備時間均影響冷沉淀中FⅧ活性，平板速凍法優于低溫冰箱速凍法，且隨著制備時間延長FⅧ活性會不斷下降。而對比兩組不同血漿制備時間下冷沉淀中Fib含量，組內差異和組間差異均無統計學意義，Fib含量受制備方法和時間影響較小，這可能與Fib體外穩定性較好，半衰期較長有關[4][5][6]。綜上所述，在冷沉淀制備過程中血漿制備時間不宜過長，且采用平板速凍法沉淀較好，可作為首選制備方法。

附表1 兩組不同血漿制備時間下冷沉淀中FⅧ活性比較（±s,IU/袋）

附表1 兩組不同血漿制備時間下冷沉淀中FⅧ活性比較（±s,IU/袋）

組別 例數 2h 4h 6h 8h F P A組 12 77.96±10.35 74.12±8.06 71.35±7.28 70.68±7.14 0.604 >0.05 B組 12 68.04±8.33 59.14±7.23 52.08±6.31 50.94±5.97 3.562 <0.05 t 2.587 4.793 6.929 7.347 P<0.05 <0.05 <0.05 <0.05

附表2 兩組不同血漿制備時間下冷沉淀中Fib含量比較（±s,mg/袋）

附表2 兩組不同血漿制備時間下冷沉淀中Fib含量比較（±s,mg/袋）

組別 例數 2h 4h 6h 8h F P A組 12 112.41±12.46 117.82±12.57 114.25±12.66 118.96±13.58 0.234 >0.05 B組 12 110.98±13.51 116.01±11.98 115.08±13.19 116.75±12.89 0.175 >0.05 t 0.270 0.361 0.157 0.409 P>0.05 >0.05 >0.05 >0.05