全自動HE 染色封片質量的影響因素分析

蘇哲彬

（中國人民解放軍聯勤保障部隊第九〇〇醫院 福建 福州 350025）

病理切片指的是應用病理組織學方法將包埋在石蠟塊里的病變組織進行染色，然后采用顯微鏡進一步檢查病變并作出病理診斷的過程。全自動HE 染色指的是采用蘇木素和伊紅對組織細胞進行染色來區分細胞的形態的過程，能實現對細胞水腫、變性、壞死以及炎性細胞浸潤等異常病理學改變的鑒定[1]。然而采用HE 染色方法對病理切片進行染色，依然會存在染色質量不佳的情況，而病理切片的質量會直接影響診斷的準確性和及時性。目前臨床上關于影響全自動HE 染色封片質量不佳的因素鮮有報道。現以我院病理科制作的并采用全自動HE 染色封片的病理切片作為研究對象，對病理切片的觀察指標進行單因素和多因素分析，找出影響全自動染色封片質量的因素。現將研究結果報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018 年1 月—2019 年6 月我院病理科制作的并采用全自動HE 染色封片的病理切片410 片作為研究對象，納入標準：①病理學確診為腫瘤或正常組織；②能夠獲取足夠的組織標本；③是經外檢診斷之后剩余的組織樣本。

1.2 方法

1.2.1 全自動HE 染色

全自動HE 染色封片機對病理切片的染色過程：①采用二甲苯對切片去蠟；②采用酒精對切片脫水清洗；③采用蘇木紫液染色；④采用鹽酸酸洗；⑤在流水上進行浸潤清洗，使得細胞核變成藍色；⑥采用伊紅液色染色，再使用酒精清洗；⑦采用二甲苯展開透明；⑧蓋片和封片、貼注標簽。

1.2.2 切片質量評估標準

切片質量從切片完整、厚度均勻、裂痕、褶皺、污染物、存在氣泡或外溢膠液、透明度、染色清晰、裱貼、編號、標簽這十項的評分來評估，每項滿分為十分，總分一百分，得分越高切片質量越好。切片的分級標準為：≥90 分評為甲級片；75 ～89 分評為乙級片；60 ～74 分評為丙級片；≤59 分評為丁級片。將368 片甲級片和乙級片納入對照組，將42 片丙級片和丁級片納入觀察組。

1.3 觀察指標

觀察兩組切片的固定液、染色時間、溫度、酒精分色時間、切片殘余石蠟、脫水試劑、組織厚度、脫水機處理組織不當等。

1.4 統計學方法

使用SPSS23.0軟件進行數據統計，計數資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗進行比較；采用單因素分析及多因素回歸分析找出全自動HE 染色封片質量的影響因素，以P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

2.結果

2.1 全自動HE 染色封片質量的單因素分析

單因素結果表明：兩組的固定液、染色時間、溫度、酒精分色時間、切片殘余石蠟、脫水機處理組織不當相比較，有統計學差異（P＜0.05）,見表1。

表1 單因素分析[n(%)]

2.2 全自動HE 染色封片質量的多因素分析

以單因素分析中具有統計學意義的影響因素（固定液、染色時間、溫度、酒精分色時間、切片殘余石蠟、脫水機處理組織不當）為自變量，以封片質量為因變量。多因素分析結果顯示：全自動HE 染色封片質量不佳的保護因素是固定液為AAF 液，危險因素是溫度＜25℃或＞30℃、切片殘余石蠟、脫水機處理組織不當（P＜0.05），見表2。

表2 多因素分析

3.討論

全自動HE 染色具有染色質量好、效率高、操作簡單等優勢，被廣泛應用于病理切片染色。

本研究發現全自動HE 染色封片質量不佳的保護因素是固定液為AAF 液，危險因素是溫度＜25℃或＞30℃、切片殘余石蠟、脫水機處理組織不當。AAF 液的成分包含甲醛、乙醇、冰醋酸等，冰醋酸能夠實現快速固定組織的功能，甲醛能夠使得固定均勻，甲醛和乙醇的共同作用能夠有效對組織進行脫水，使得切片組織能較好的保持原本的形態，進而使得封片質量較好[2]。而丙醇單獨作為固定液時，能實現完全沉淀蛋白質的作用，但對細胞核的固定作用較差，使得染色效果較差；乙醇單獨作為固定液時，能較好的固定切片組織和沉淀蛋白質，但沉淀的核蛋白在水中會被溶解，使得切片組織染色質量不好。當溫度＜25℃或＞30℃時，會導致染液變性、沉淀、凝固，最后導致封片質量不佳。所以應當將病理切片以及染料放入恒溫培養箱內保持在最佳的染色溫度。當病理切片上有石蠟殘余時，會出現蘇木素-伊紅染色時不著色、蘇木素染色不理想、伊紅發生褪色等問題，導致封片質量不佳。所以，應當使用二甲苯對蠟塊組織進行多次脫蠟，進行染色前檢查病理切片上的石蠟是否已經清除干凈[3]。當室內溫度較低或試劑更換不及時會導致在酒精脫水環節和二甲苯脫酒精環節出現脫水機處理組織不當的情況，從而引起組織的不完全浸蠟，使得組織脫水后仍然存在甲酸、酒精、水分等雜質，當對切片組織進行烤片時，在細胞表面黏附的石蠟會浸入細胞內并且難以脫出，導致病理切片進行染色時，浸入細胞內的石蠟會阻擋水溶性染色液的浸入，使得病理切片部分區域無法染色，導致封片質量較差[4-5]。

綜上所述，全自動HE 染色封片質量不佳的保護因素是固定液為AAF 液，危險因素是溫度＜25℃或＞30℃、切片殘余石蠟、脫水機處理組織不當，應選擇AAF 液作為切片組織的固定液，將病理切片以及染料放入恒溫培養箱，進行染色前清除干凈病理切片上的石蠟。