T細胞型急性淋巴細胞白血病患者HOX11L2基因的表達及其臨床意義

郭曉波，藺 京，史 敏，楊 樂，張養民，楊瑞利

（1.西安交通大學附屬西安市中心醫院a.血液科；b.腫瘤科；c.輸血科，西安 710004； 2.西安培華學院醫學院，西安 710065；3.西安長安醫院檢驗科，西安 710016）

急性淋巴細胞白血病（acute lymphocytic leukemia，ALL）是由于早期淋巴細胞在造血組織中異常增殖，并浸潤各組織器官的惡性克隆性疾病，是兒童最常見的白血病類型之一，在成人發病率較低，其中80%為B細胞型ALL（B-ALL），約20%為T細胞型ALL（T-ALL）[1-3]，其臨床表現主要為出血、貧血、發熱和感染癥狀，以及腫瘤細胞對全身各組織器官的浸潤引起的癥狀和肝、脾、淋巴結腫大等體征。近年來的研究表明，大約有20%兒童T-ALL由于t(5;14)(q35;q32)從而導致HOX11L2基因激活表達，此基因定位在1號染色體短臂3區2帶，是最常見的T-ALL分子生物的異常，同時也是兒童T-ALL中最常見的特征性分子生物學改變之一[4-5]。

本研究通過對50例T-ALL患者臨床資料的收集，分析HOX11L2基因與性別、年齡、白細胞數量、FAB分類以及生存率之間的關系，為臨床在T-ALL的鑒別診斷、分型、預后以及白血病的微小殘留檢測中提供有力幫助。

1 材料和方法

1.1 研究對象 所有T-ALL患者均為2009年1月～2020年1月西安市中心醫院血研所住院的患者，其中男性27例，年齡0～42歲，中位年齡19歲；女性23例，年齡0～38歲，中位年齡16歲。以上所有病例的診斷均符合世界衛生組織修訂的急性淋巴細胞白血病的分類和診斷標準[6]。所有患者均經實時熒光定量PCR行分子生物學檢測。

1.2 儀器與試劑 實時熒光定量PCR檢測儀為美國伯樂CFX96產品，總RNA提取試劑為德國凱杰公司生產，HOX11L2基因檢測試劑為廈門至善生物科技有限公司生產，瑞士-吉姆薩染色試劑盒為南京沐賽生物技術有限公司生產。血細胞分析儀采用邁瑞BC-5800，試劑為邁瑞公司配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 HOX11L2基因檢測：抽取 EDTA-K2抗凝的骨髓或者外周血2～5ml，按照RNA提取試劑說明書提取有核細胞RNA，并利用CFX96實時熒光定量PCR對HOX11L2基因進行定性檢測。PCR儀循環參數：50℃×20min→95℃×10min；按95℃×15sec→65℃×1min（每個循環下降1℃）→72℃×1min,循環10次；再按95℃×20sec→56℃×32sec（4通道采光，FAM，HEX，ROX，CY5）→72℃×1min,循環40次。通過收集熒光信號的變化來實時檢測PCR擴增反應過程中每一個循環擴增產物的變化量，進一步通過Ct值對起始模板進行定性分析。整個實驗操作過程均嚴格按照標準的操作規程進行，同時做陽性、陰性對照和內參，結果均在室內質量控制范圍。

1.3.2 形態學檢查：骨髓及外周血涂片經瑞士-吉姆薩染色分類，并同時做過氧化物酶化學染色（myeloperoxidase,POX）。

1.3.3 白細胞計數：所有研究對象均采集2ml EDTA-K2抗凝外周靜脈血，充分混勻，及時送檢，采集后的標本均在2 h內進行測定，測定前再次顛倒充分混勻。研究樣本檢測前對血細胞儀采用標準血漿進行測定，要求結果在室內質量控制范圍，方可進行研究樣本測定。

1.3.4 患者其它臨床資料：包括年齡、性別以及隨訪預后等指標通過病案室病例查閱收集，本研究均取得醫院倫理委員會批準和患者家屬知情同意。

1.4 統計學分析 采用SPSS22.0統計軟件進行統計學數據分析。計數資料采用百分率（%）表示，組間的比較采用χ2檢驗，生存率之間的比較用Kaplan-Meier法和log-rank檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HOX11L2基因的表達在T-ALL患者不同臨床特征中的比較 見表1。50例T-ALL患者，檢測結果顯示HOX11L2基因陽性患者12例（24%），HOX11L2基因陰性患者38例（76%）。陽性患者中，男性7例（58.3%），女性5例（41.7%），HOX11L2基因陽性患者在男女性別方面，差異無統計學意義（χ2=0.119，P=0.730）。表 達HOX11L2基因患者年齡在5～10歲間居多，表達率為58.3%，與其它年齡組之間比較，差異有統計學意義（χ2=11.577，P=0.018）。白細胞計數≤50×109/L的患者10例（83.3%），＞50×109/L的患者2例（16.7%），兩組間比較差異有統計學意義（χ2=5.469，P=0.019）。FAB分類中，有75%的HOX11L2基因表達者為L1型，與L2，L3組相比較，差異有統計學意義（χ2=8.766，P=0.008）。

表1 HOX11L2基因在T-ALL患者不同臨床特征中的表達情況[n（%）]

2.2 HOX11L2基因表達者與非表達者生存率比較 34例患者獲隨訪資料，隨訪率為68.0%，中位隨訪時間為20（6～120）個月，死亡23例。12例HOX11L2基因表達者死亡8例，存活4例，中位生存期為8個月，1年生存率為14.4%。22例HOX11L2基因非表達者死亡19例，存活3例，中位生存期為11個月，1年、2年生存率分別為46.8%和8.9%，兩組病例生存率進行比較，差異具有統計學意義（log-rankP=0.026）。

3 討論

急性淋巴細胞白血病是血液腫瘤中最常見的疾病之一，約60%～75%的ALL患者可以被發現特征性的遺傳學異常和分子生物學改變，比如染色體的增減所導致的低二倍體和高二倍體，染色體易位所形成的融合基因，以及引起抑癌基因失活和基因表達失控等[7]。血液腫瘤中分子生物的異常，可作為血液病診斷、分型的重要依據，也可作為微小殘留病變的分子標志[8]。同源盒基因HOX11L2是表達于T-ALL的原癌基因，由t(5;14)(q35;q32)形成，可使T細胞發育停滯在某一階段，從而導致T-ALL的發生[9-11]。還有研究表明T-ALL是未成熟T細胞或者祖細胞過度增殖所導致的惡性造血系統疾病，通常伴有白細胞數量增高、縱隔腫塊，以及中樞神經系統浸潤和預后差等特征[12]。

此研究結果中50例T-ALL患者HOX11L2基因表達患者為24%（12/50），HOX11L2基因在男女性別組間差異無統計學意義。HOX11L2基因表達患者主要分布在5～10歲年齡范圍，1～5歲年齡范圍次之，而且以L1型ALL為主，組間差異具有統計學意義。HOX11L2基因表達者白細胞計數以≤50×109/L為主，與＞50×109/L的患者比較，組間差異有統計學意義（χ2=5.469，P=0.019）。上述研究結果與西方研究者[13-14]的結果相似。

本研究顯示HOX11L2基因表達者與非表達者在生存率方面比較，差異有統計學意義，這與國內研究者左文麗等[15]對HOX11L2基因表達對兒童T-ALL預后影響觀察的結果相吻合。研究表明同源盒HOX11L2基因可能是通過甲基化的修飾來影響白血病其它基因的表達，從而來改變可能影響腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，進一步影響白血病的預后。也有一些研究者認為中樞神經系統白血病的發生與HOX11L2基因的表達存在相關性[2，16]。因此，HOX11L2基因的表達作為T-ALL MICI分型必不可少的分子生物學標記，已成為T-ALL診斷和治療以及預后觀察中的重要指標，其結果對于臨床進行明確診斷、分型判斷，以及預后具有非常重要的意義。

綜上所述，T-ALL具有其特有的細胞與分子生物學特征，HOX11L2基因主要表達于T-ALL，并且以L1型兒童T-ALL為主，HOX11L2基因表達可能是T-ALL獨立不良預后因素。臨床上通過HOX11L2基因檢測結果與常規細胞形態學、遺傳學、熒光原位雜交等技術檢測結果相結合，將對急性淋巴細胞白血病的鑒別診斷、分型、預后及微小殘留病（MRD）檢測等具有十分重要的意義。