一起豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌混合感染的診斷報告

劉澤文 袁芳艷 劉威 高婷 周丹娜 楊克禮 郭銳 梁婉 田永祥

摘要：通過對湖北武漢某豬場一起急性死亡豬進行臨床診斷和病原分離鑒定，確定是由豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌混合感染引起，分離菌株呈典型革蘭氏陽性鏈狀球菌和革蘭氏陰性小桿菌，生化鑒定符合豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌的生化特點，分離的豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌對頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟敏感，這幾種藥物對發病豬有很好的治療效果。

關鍵詞：豬;鏈球菌;傳染性胸膜肺炎放線桿菌;診斷

中圖分類號：S858.28? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1007-273X（2020）11-0005-02

豬鏈球菌和豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌是嚴重危害養豬業的兩種細菌病，常造成生豬的急性死亡，給養豬場（戶）造成嚴重的經濟損失。湖北武漢某豬場發生一起育肥豬急性死亡病例，發病豬體重40 kg左右，突然死亡，鼻、口有血性泡沫樣分泌物流出，后肢關節腫脹。病理解剖可見病豬胸腔有大量滲出物，肺和胸壁出現粘連現象，關節腔有化膿性滲出物。經臨床診斷、病理解剖、病原分離鑒定，確定為豬鏈球菌（SS）和傳染性胸膜肺炎放線桿菌（APP）混合感染引起。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 培養基? 胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）和胰蛋白胨大豆肉湯（TSB），按產品使用說明方法配制滅菌后加入5%的小牛血清。

1.1.2? 藥敏紙片? 頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、磺胺異惡唑等藥敏紙片為杭州濱和微生物試劑有限公司生產，氟苯尼考藥敏紙片為Oxoid limited公司生產，按藥敏紙片生產公司提供的標準判斷結果。

1.2? 方法

1.2.1? 病料接種及病原分離? 分別采集發病豬的胸腔積液和關節膿性分泌物接種5%小牛血清的TSA平板，37 ℃培養24 h，挑選帶藍光的單個菌落再接種5%小牛血清的TSA平板，37 ℃培養24 h后，挑選單個菌落進行革蘭氏染色并觀察細菌形態。

1.2.2? 分離菌株的PCR鑒定? 分別按文獻[1，2]設計豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌引物（APP U1-1 ATACGGTTAATGGCGGTAATGG，APP U1-2 ACCTGAGTGCTCACCAACG，擴增大小為345 bp）和豬鏈球菌引物（gdh-1 AAGTTCCTCGGTTTTGAGCA，gdh-2GCAG CGTATTCTGTCAAACG，擴增大小為566 bp），并進行PCR鑒定，電泳并觀察結果

1.2.3? 分離菌株生化鑒定? 將PCR擴增呈陽性菌株接種改良TSB培養基，37 ℃振搖培養20～24 h，分別接種糖發酵和其他生化試驗培養基小管，每管0.2 mL，37 ℃培養，觀察結果。

1.2.4? 分離菌株的藥敏試驗? 無菌挑取鏈球菌菌落， 反復均勻地涂布于5%小牛血清TSA平板上，然后將上述藥敏紙片等距離（≥2 cm）壓放在培養基表面。置37 ℃培養18～24 h取出，觀察抑菌圈的有無或直徑大小，按藥敏紙片生產公司提供的標準判斷結果。

2? 結果與分析

2.1? 細菌形態觀察

分離菌株在含5%小牛血清的TSA平板上形成圓形、光滑濕潤、無色透明的菌落。挑選單個菌落進行革蘭氏染色，可見革蘭氏陰性的小桿菌和革蘭氏陽性的呈鏈狀的球菌（圖1、圖2）。

2.2? 分離菌株的PCR鑒定結果

用豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌引物和豬鏈球菌引物進行PCR鑒定，結果均擴增出條帶，且與設計大小相符（圖3、圖4）。

2.3 分離菌株生化鑒定結果

豬鏈球菌引物PCR鑒定陽性菌株的乳糖、棉子糖、菊糖和七葉苷為陽性反應;甘露糖、甘露醇、阿拉伯糖、甘油、山梨糖和V.P試驗等為陰性反應，與豬鏈球菌生化特性一致。豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌引物PCR鑒定陽性菌株的葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇、尿素等為陽性反應;M.R-V.P、鼠李糖、山梨醇、靛基質試驗等為陰性反應，與傳染性胸膜肺炎放線桿菌的生化特性一致。

2.4? 分離菌株的藥敏試驗結果

將分離純化的菌株按常規方法進行藥敏試驗，結果表明，分離的豬鏈球菌對頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、阿莫西林、氨芐西林、環丙沙星高度敏感，對林可霉素、依諾沙星、洛美沙星、四環素、阿米卡星、慶大霉素和磺胺異惡唑耐藥;傳染性胸膜肺炎放線桿菌對頭孢呋辛、頭孢曲松、頭孢噻肟、阿米卡星和慶大霉素敏感，對氨芐西林、林可霉素、環丙沙星、依諾沙星、卡那霉素、四環素和磺胺異惡唑耐藥（表1）。

3? 結果與討論

（1）武漢市某豬場發生生豬突然死亡情況，通過對發病豬場情況進行調查，了解發病豬的臨床特點，進行病理解剖、PCR擴增及生化特性鑒定，綜合診斷是由豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌和豬鏈球菌混合感染引起的急性死亡。藥敏試驗證實，分離的豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌對頭孢呋辛、頭孢曲松和頭孢噻肟等高度敏感，這些藥物可用于發病豬的緊急治療。

（2）豬鏈球菌病是一種人獸共患傳染病[3]，是由豬鏈球菌感染引起，該菌不但能引起豬的急性敗血癥、 腦膜炎、關節炎甚至死亡，同時也可導致養豬從業人員感染和死亡。該病一年四季均可發生，呈多點散發和突然暴發，也可呈地方性流行。在規模化豬場，豬鏈球菌病已成為一種常見病和多發病，經常成為一些病毒性疾病的繼發病或與一些細菌性疾病混合感染。豬傳染性胸膜肺炎的主要病原菌是胸膜肺炎放線桿菌，該病以飛沫和接觸性傳播為主， 主要臨床特征有急性出血性肺炎和亞急性慢性壞死性肺炎[4]。 隨著集約化養豬業的發展，國家及地區間引種頻繁，該病發病率及死亡率大大高于以前。我國自1987年首次發現該病，現該病已經成為育肥豬和種豬死亡的主要原因之一，血清型也越來越復雜，給養豬業造成了巨大的經濟損失。

（3）針對豬鏈球菌病和豬傳染性胸膜肺炎的防控可采用疫苗免疫預防和藥物治療[5][6]。豬鏈球菌多價滅活疫苗，豬群免疫后間隔15～20 d進行第2次免疫后可以產生較好的效果，免疫期可達半年。豬傳染性胸膜肺炎可采用豬傳染性胸膜肺炎多價滅活疫苗進行免疫，可起到一定的保護效果，但是因APP血清型眾多及地方流行型有別，不同血清型之間交叉保護效果有限，導致免疫效果不理想。對發病豬場可以采用抗生素進行緊急治療，但是由于豬鏈球菌和傳染性胸膜肺炎放線桿菌易產生較強的耐藥性，而且因為不同豬場用藥情況差異，其耐藥性也存在差異，因此在使用抗生素治療之前要做藥敏試驗，篩選對這兩種細菌敏感的藥物進行治療，可以取得良好的治療效果。

參考文獻：

[1] 陳? 凡.胸膜肺炎放線桿菌血清學分型及基因分型的研究[D].武漢：華中農業大學，2004.

[2] 王松華.豬源鏈球菌的分離鑒定及其生物學特性研究[D].河南洛陽：河南科技大學，2017.

[3] 羅滿林.動物傳染病學[M].北京：中國林業出版社，2019.

[4] 朱秀高，李艷青.豬胸膜肺炎放線桿菌感染和血清型分布[J].動物醫學進展，2017，38（10）：111-113.

[5] 趙? 謙.豬鏈球菌病-副豬嗜血桿菌病二聯亞單位疫苗的研制[D].北京：中國農業科學院，2019.

[6] 張? 飛，曹三杰，文心田等，豬傳染性胸膜肺炎疫苗的研究進展[J].中國獸醫學報，2015，35（11）：1880-1886.