結腸癌中PD-L1的表達及其與臨床病理和預后的關系

陳珍珠，汪霖，茆智翔

(徐州醫科大學附屬醫院腫瘤科，江蘇 徐州)

0 引言

在惡性腫瘤中，結腸癌較常見，其對患者生命健康產生了嚴重威脅。當前，隨著腫瘤免疫治療的發展，程序性死亡分子(PD-1)已被明確為在T淋巴細胞表面誘導表達的抑制性受體，其由程序性死亡因子配體1(PD-L1)和程序性死亡因子配體2(PD-L2)兩個配體分子組成[1]。其中，PD-L1經PD-1/PD-L1傳導通路對T細胞分化增殖進行抑制，將信號傳導和多類細胞因子分泌阻斷，造成腫瘤細胞侵襲、轉移問題[2]。現如今，有關PD-L1在結腸癌中的表達及其與臨床病理、預后關系等相關研究并不是很多。本實驗選取病例進行簡要闡述。

1 資料與方法

1.1 一般資料

實驗時間2018年1月至2018年12月，實驗對象91例結腸癌患者腫瘤組織。男性45例，女性46例；年齡最小者35歲，年齡最大者78歲，平均年齡(56.54±3.82)歲；按國際抗癌協會分類標準，實施腫瘤分期、組織學分級：Ⅰ期12例，Ⅱ期25例，Ⅲ期41例，Ⅳ期13例；G1級16例，G2級55例，G3級20例。患者均隨訪1年。

1.2 方法

對PD-L1蛋白實施免疫組化檢測，應用標準鏈霉親和過氧化物酶，在特定濃度一抗中放置組織切片，孵育過夜，第二天，再把切片放入羊抗兔lgG內(經生物素標記)孵育0.5h，繼而轉移至經過氧化酶標記的鏈霉親和素室溫孵育20min。發揮0.02%3，3’—二氨基聯苯胺作用，于50mmol/L Tris-HCI緩沖液(pH7.6)內染色，時長6min左右，再用蘇木精復染，用水清洗，依次進行脫水、清除、封片處理。該背景下，與免疫染色相對應的則是借助非免疫山羊或者兔血清對一抗進行替代，在顯微鏡下觀察。

1.3 觀察指標

實施DAKO Hercept Test評分：PD-L1陽性顯色：細胞漿出現黃色至棕黃色顆粒。評分指標包括染色強度、陽性細胞百分數，在低倍鏡下，選擇5個視野，用高倍鏡觀察。染色強度：0分提示無著色；1分提示淡黃色；2分提示棕黃色；3分提示棕褐色，分值越高，顏色越深。陽性細胞計數：1分：陽性細胞不足10%；2分：陽性細胞10%-50%；3分：陽性細胞50%以上。PD-L1表達陽性即當染色強度和陽性細胞計數乘積在3分及以上，反之，則為陰性。

1.4 統計學處理

篩選實驗數據用統計學工具(版本：選SPSS 23.0)讀取和處理。計量資料、計數資料的呈現形式分別為(±s)、(n，%)，驗證方式t、χ2。P值小于0.05提示數據有顯著差異。

2 結果

2.1 PD-L1蛋白表達

發揮免疫組化作用，對結腸癌患者癌組織、癌旁組織、正常組織內PD-L1表達進行評估。結果提示，PD-L1在細胞膜、胞質定位，在腫瘤組織內，PD-L1高表達25例(27.47%)，中度表達28例(30.77%)，弱表達38例(41.76%)；在癌旁組織、正常組織內檢測到的例數則非常少，分別為10.99%(10/91)和6.59%(6/91)。

2.2 結腸癌組織內PD-L1表達與病理因素關系

結腸癌組織內PD-L1表達與淋巴結轉移、遠處轉移、腫瘤分期等病理因素有關。具體見表1。

表1 結腸癌組織內PD-L1表達與病理因素關系(n，%)

2.3 PD-L1與結腸癌預后關系

TNM分期晚、分化程度低、淋巴結、遠處轉移、PD-L1表達陽性均會對結腸癌預后生存產生影響。結直腸癌PD-L1表達與術后生存期具有相關性。具體見表2。

表2 PD-L1與結直腸癌預后關系

3 討論

免疫耐受現象會阻礙腫瘤免疫治療。在腫瘤微環境中，腫瘤細胞經各類機制對自身形成保護，規避機體免疫反應，其主要通過PD-L1表達上調實現[3]。在免疫應答中，PD-L1作為凋亡相關蛋白，發揮重要作用，對T淋巴細胞和其配體PD-1結合起誘導作用，從而把抑制性信號傳遞給T細胞，發生凋亡，對外周T細胞的免疫耐受進行調節[4]。在腫瘤免疫治療中，PD-1/PD -L1通路與腫瘤逃避免疫系統破壞問題備受關注[5]。發揮藥物作用，將PD-1/PD-L1通路阻斷，有利于使T細胞功能增強，對腫瘤細胞產生影響，使之裂解，實現腫瘤治療。實驗證實[6-9]，PD-L1在多類腫瘤組織中廣泛表達，但有關結腸癌患者PD-L1表達與臨床病理因素、預后關系尚不明確。結果顯示：在腫瘤組織內，PD-L1表達顯著升高，其不受年齡、性別、腫瘤大小等因素影響，但與腫瘤的TNM分期、遠處轉移、淋巴結轉移具有相關性。結腸癌患者預后不良的誘因即腫瘤組織內PD-L1高表達，證實了在結腸癌治療中，PD-L1為重要耙點。

在免疫系統內，PD-L1的作用在于維持正常機體保護性免疫和免疫耐受平衡[10-12]。在腫瘤微環境中，依托各機制，對PD-L1產生影響，使其表達上調，使PD-1/PD-L1信號通路處于異常激活狀態，通過各類方式對T細胞增殖、分化進行抑制，通過誘導，使之發生凋亡，介導腫瘤免疫逃逸[13]。除此之外，PD-L1還能夠對T細胞缺失進行有效調節。現如今，有關PD-1/PD-L1通路機制、是否存在多個受體仍不明確，后續將通過PD-L1單抗或多抗制備，對該通路今星期有效阻斷，為結腸癌臨床治療工作的開展奠定良好基礎。

綜上，在腫瘤免疫治療中，PD-1/PD-L1備受認可，其信號通路為結腸癌治療工作提供了新的分子耙標。在結腸癌中，PD-L1蛋白表達上調，相關因素有TNM分期、淋巴結轉移、不良預后等。故而，PD-L1能夠被看作結腸癌侵襲、轉移的新型生物標志物，未來一段時間，將重點探討結腸癌免疫治療中，PD-L1能否作用關鍵耙點發揮作用及其相關機制。