核酸檢測(cè)與酶免檢測(cè)平行篩查血液在基層血站的應(yīng)用效果

李鵬飛

（長(zhǎng)春市中心血站，吉林 長(zhǎng)春 130000）

0 引言

輸血傳播病原體篩查是保障血液和血液制品安全的重要的手段，能夠?qū)斞嚓P(guān)傳染病進(jìn)行控制和預(yù)防，受到了全球醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的廣泛關(guān)注[1-2]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和發(fā)展，基層血站試劑材料質(zhì)量得到了明顯提高，但由于傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）（簡(jiǎn)稱酶免）存在檢測(cè)“窗口期”、抗體抗原蛋白結(jié)構(gòu)變性問(wèn)題，影響診斷結(jié)果的可靠性，因此有必要探討更加科學(xué)的檢測(cè)方法。核酸檢測(cè)（Nucleic acid amplification testing，NAT）是一種新興的檢測(cè)方法，主要針對(duì)RNA或DNA進(jìn)行檢測(cè)，可減少“窗口期”、“病毒變異”等原因引發(fā)的漏檢情況，與酶免檢測(cè)形成互補(bǔ)，能夠有效降低輸血傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)，保障輸血安全[3-4]。為了探討篩查血液傳播疾病的有效方法，本文就核酸檢測(cè)與酶免檢測(cè)平行篩查血液在基層血站的應(yīng)用效果進(jìn)行了研究。

1 資料與方法

1.1 資料來(lái)源。選取本基層血站2019年1月至2019年10月無(wú)償獻(xiàn)血者101959例。獻(xiàn)血者男51973例，女49986例；年齡18-54歲，平均（30.28±2.16）歲。獻(xiàn)血者血液采集時(shí)留取酶免檢測(cè)和核酸檢測(cè)兩份血標(biāo)本。

1.2 方法。采集血標(biāo)本后保存在恒溫冰箱中，溫度設(shè)置2-8℃，采樣4 h后在低溫下行離心處理，離心后在72 h內(nèi)進(jìn)行核酸檢測(cè)。采用全自動(dòng)加樣儀（DECAN）和全自動(dòng)酶免分析儀（FAME）進(jìn)行酶免檢測(cè)，對(duì)于乙肝表面抗原（Hepatitis B surface antigen，HBsAg）、HIV抗體1型和2型（HIV antibody types 1 and 2，抗-HIV-1/2）、丙型肝炎病毒抗體（Hepatitis C virus antibody，抗-HCV）陰性樣本，再采用全自動(dòng)核酸提取儀（STAR）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（ABI7500）實(shí)施核酸檢測(cè)，檢測(cè)試劑源于上海科華生物工程股份有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)。①統(tǒng)計(jì)檢測(cè)結(jié)果。②對(duì)核酸檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本展開(kāi)分項(xiàng)定量檢測(cè)、乙肝血清學(xué)補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)血清學(xué)模式。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。將參與研究101959例無(wú)償獻(xiàn)血者的相關(guān)數(shù)據(jù)錄至SPSS 23.0，以t檢驗(yàn)定量資料（），以χ2檢驗(yàn)定性資料（%、n），P＜0.05，表明有差異。

2 結(jié)果

2.1 核酸檢測(cè)與酶免檢測(cè)結(jié)果分析。101959例無(wú)償性獻(xiàn)血者的血標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)779例，陽(yáng)性檢出率0.76%（779/101959），其中陰性標(biāo)本經(jīng)核酸檢測(cè)后陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)59例，陽(yáng)性檢出率0.058%（59/101180），詳見(jiàn)表1。

表1 核酸檢測(cè)與酶免檢測(cè)結(jié)果分析（n，%）

2.2 分項(xiàng)定量和乙肝血清學(xué)補(bǔ)充試驗(yàn)結(jié)果。59例核酸檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本經(jīng)分項(xiàng)定量檢測(cè)后，發(fā)現(xiàn)定量測(cè)定HBV DNA陽(yáng)性43例，HCV RNA陽(yáng)性11例，HIV RNA陽(yáng)性5例但重復(fù)檢測(cè)均為陰性。43例定量測(cè)定HBV DNA陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行乙肝血清學(xué)補(bǔ)充試驗(yàn)，經(jīng)酶免篩查HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb，最終確認(rèn)陽(yáng)性標(biāo)本31例，不確認(rèn)12例，確認(rèn)陽(yáng)性率為72.09%，31例標(biāo)本乙肝血清學(xué)模式詳見(jiàn)表2。

3 討論

臨床中艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎等疾病均可通過(guò)血液途徑傳播，威脅人體生命健康。傳統(tǒng)的酶免法在血液篩查中應(yīng)用廣泛，但受病毒抗原、抗體蛋白結(jié)構(gòu)變異等因素影響，導(dǎo)致“窗口期”漏診情況時(shí)有發(fā)生，而應(yīng)用核酸檢測(cè)技術(shù)能夠直接通過(guò)使用分子診斷技術(shù)進(jìn)行病原體核酸檢測(cè)，可提高血液傳播疾病的篩查水平，與傳統(tǒng)的血清學(xué)檢測(cè)方式形成互補(bǔ)優(yōu)勢(shì)，降低輸血傳播疾病漏診風(fēng)險(xiǎn)[5]。相關(guān)報(bào)道顯示，核酸檢測(cè)能有效縮短病毒檢測(cè)窗口期，檢出隱匿性病毒感染、病毒變異株等，保障血液安全[6-7]。王慶敏等[8]實(shí)踐后發(fā)現(xiàn)，核酸檢測(cè)與酶免檢測(cè)可形成互補(bǔ)，減少輸血感染風(fēng)險(xiǎn)，可行性良好。趙紅娜等[9]對(duì)184095份標(biāo)本研究后發(fā)現(xiàn)，核酸檢測(cè)可在受檢者病毒感染后數(shù)天內(nèi)有效檢出血標(biāo)本中含有的微量病毒核酸，縮短“窗口期”，降低漏診風(fēng)險(xiǎn)。

表2 乙肝血清學(xué)補(bǔ)充試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)本文研究發(fā)現(xiàn)，酶免法篩查HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2后發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性檢出率為0.76%，但經(jīng)核酸檢測(cè)HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2陰性者發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性檢出59例，陽(yáng)性檢出率0.059%。分析后可知，臨床中使用核酸檢驗(yàn)可利用核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)，在分子診斷原理的基礎(chǔ)上對(duì)病原體核酸展開(kāi)測(cè)定，主要包括核酸提取、擴(kuò)增和檢驗(yàn)3個(gè)環(huán)節(jié)，并以病毒RNA或DNA為對(duì)象進(jìn)行檢測(cè)，從酶免檢測(cè)陰性標(biāo)本中篩選出“隱匿性”感染病例、“窗口期”病例，有效排除經(jīng)輸血途徑傳播的病毒性病癥，提高用血安全性。本文研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于59例核酸檢測(cè)陽(yáng)性獻(xiàn)血者的血標(biāo)本實(shí)行分項(xiàng)定量、乙肝血清補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)后，確認(rèn)HBV感染31例。分析后發(fā)現(xiàn)，乙型肝炎是國(guó)內(nèi)流傳廣泛的常見(jiàn)傳染性病癥，通過(guò)輸血感染的乙型肝炎病例呈上升趨勢(shì)，在血液篩查中應(yīng)用核酸檢測(cè)能夠與酶免檢測(cè)形成互補(bǔ)優(yōu)勢(shì)，發(fā)現(xiàn)HBV感染病例，同時(shí)通過(guò)乙型肝炎血清試驗(yàn)檢查、分項(xiàng)定量檢測(cè)，可進(jìn)一步明確HBV感染患者的血清學(xué)模式，為基層血站明確患者病情提供重要參照。但在本次研究中仍有12例未能確認(rèn)的HBV感染病例，初步分析導(dǎo)致此類情況發(fā)生的原因如下：操作人員操作不當(dāng)；標(biāo)本送往實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)途中血樣保存、運(yùn)輸不當(dāng)；提取、擴(kuò)增檢測(cè)屬于兩項(xiàng)獨(dú)立的開(kāi)放式模塊，中間存在人工操作步驟，有人為干擾因素；受儀器狀態(tài)、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、檢驗(yàn)人員操作水平等方面因素的影響。比如，當(dāng)待檢環(huán)境溫度過(guò)高時(shí)，會(huì)導(dǎo)致血標(biāo)本中含有的核酸物質(zhì)分解；送檢標(biāo)本病毒被稀釋或原袋血漿內(nèi)保養(yǎng)液對(duì)低病毒載量的稀釋；血標(biāo)本內(nèi)病毒顆粒呈泊松分布，發(fā)生病毒濃度不均勻情況；在檢測(cè)樣本中存在隱匿性肝炎、變異病毒株；采血、血樣保存和檢驗(yàn)操作中發(fā)生血樣污染、儀器污染等情況；部分獻(xiàn)血者血漿中抗原抗體處于高表達(dá)狀態(tài)，病毒載量極低，影響檢測(cè)結(jié)果。

綜上所述，核酸檢測(cè)與酶免檢測(cè)平行篩查兩種方法可以相互補(bǔ)充，預(yù)防血液傳播的病毒性疾病，降低輸血傳播疾病殘余風(fēng)險(xiǎn)，保障輸血安全，具有重要的臨床應(yīng)用與推廣價(jià)值。但在實(shí)際應(yīng)用中，核酸檢測(cè)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作、標(biāo)本處理、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境等方面的要求較為嚴(yán)苛，因此仍需規(guī)范實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)程序，保障檢測(cè)結(jié)果的可靠性。