杜仲腰痛丸通過NF-κB信號通路對腰椎間盤突出癥炎性因子的調控影響*

方鵬飛 溫劍濤 劉宗瑋

（1.甘肅省中醫院白銀分院，白銀市中西醫結合醫院，甘肅 白銀 730900；2.甘肅中醫藥大學，甘肅 蘭州 730000）

腰椎間盤突出癥（LDH）是一種常見的骨科疾病，臨床上以腰背痛和下肢的放射痛為特征表現，嚴重影響人們的生活。近年來核轉錄因子-κB（NF-κB）作為一種非常普遍的轉錄因子，在信號通路中受到重視，因為其可以廣泛參與多種免疫反應、炎性反應、細胞增殖、細胞凋亡等有關基因的調節［1］。而NF-κB的異常激活，使得其轉錄活性增強，繼而觸發細胞間細胞的級聯放大而導致一系列疾病的發生。在椎間盤退變中，抑制NF-κB信號通路可以有效地緩解椎間盤退變過程［2］。因此如何有效抑制NF-κB信號通路的激活，從而阻止體內相關的炎癥因子［白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）］和效應因子（ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMPs）等的分泌，從而減輕患者的炎癥疼痛癥狀，是目前研究的熱點。本院院內制劑杜仲腰痛丸能夠有效減輕慢性腰痛患者的疼痛感受，改善患者的腰部功能［3］。而非甾體抗炎藥雙氯芬酸鈉是臨床常用的一種鎮痛抗炎藥物，也是治療LDH的常用藥物［4］。本文旨在通過觀察LDH患者NF-κB信號通路調控炎性因子表達水平的變化，初步探討中藥杜仲腰痛丸對其作用的影響機制。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 1）診斷標準：西醫診斷參照《腰椎間盤突出癥》［5］中關于腰椎間盤突出癥的診斷標準制定；中醫診斷參照《中醫病證診斷療效標準》中血瘀證辨證標準。2）納入標準：符合上述西醫診斷標準和中醫診斷標準；年齡40～70歲，影像學符合LDH的類型；患者對本次研究知情，并愿意接受研究，簽署知情同意書；本研究經甘肅省中醫院白銀分院倫理委員會審批（批號2017-003）；接受過其他藥物治療者應至少停藥1周以上。3）排除標準：懷孕、哺乳期婦女；合并有嚴重心腦血管、肝、腎、血液系統疾病和嚴重糖尿病者；精神異常者；不愿意接受研究者。

1.2 臨床資料 選取2018年1月至2020年1月甘肅省中醫院白銀分院住院及門診中符合LDH上述選擇標準的80例患者作為研究對象。其中男性32例，女性48例；年齡40～70歲，平均年齡（53.93±6.76）歲；病程6個月至20年，平均（6.15±3.52）年。將80例患者隨機分為兩組，每組40例。觀察組男性18例，女性22例；年齡（55.26±4.52）歲；病程1～6個月者11例，6個月至10年者20例，10～20年者9例。對照組男性14例，女性26例；年齡（54.36±5.36）歲；病程1～6個月者9例，6個月至10年者18例，10～20年者13例。兩組患者年齡、性別、病程等資料比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

1.3 治療方法 觀察組服用杜仲腰痛丸（甘肅省中醫院制劑中心生產，甘藥制字Z09001921，批號201601，規格40 g/瓶），每次2 g，每日2次，對照組服用雙氯芬酸鈉緩釋片［國藥集團致君（深圳）坪山制藥有限公司生產，國藥準字H10970209，產品批號09315049；規格0.1 g/12片］，每次0.1g，每日1次。以上藥物均連續服用2周。

1.4 觀察指標 1）臨床癥狀、體征：每2周觀察1次，并記錄控制疼痛及功能改善的起效時間；實驗室指標治療前后各測1次。患者在治療期間不應用其他可能影響療效觀察的藥物及治療。2）疼痛指數及日本骨科協會（JOA）下腰痛評分：疼痛程度參照視覺模擬評分法（VAS）。JOA總評分0～29分。分數越低表明功能障礙越明顯。分別在接受治療前及治療后1周、2周時評價所有患者的JOA評分。記錄兩組治療過程中出現的不良反應。3）癥狀分級量化表：包括夜間疼痛或不適、晨僵或起床后痛加重、行走時疼痛或不適、從坐位站起時疼痛或不適、日?；顒?、登樓梯、下樓梯、下蹲、在不平路面行走、最大行走距離等10個條目，每個條目分4個等級（依次為0、3、6、9分），每個等級均有嚴格的定義標準。分值越高，表示病情越重。4）實驗室檢查：血清ELISA檢測，采用酶聯免疫吸附法檢測血清中的NF-κB信號通路指標（P50、P65、IkBa）、TNF-α、白細胞介素（IL-1、IL-10）表達含量。人ELISA檢測試劑盒P50、P65、IkBa、TNF-α及IL-1、IL-10采用美國rayto公司酶標儀測定，檢測試劑均來自甘肅朝陽生物科技有限公司，操作方法按試劑說明書進行。魏氏法測定紅細胞沉降率（ESR）；全自動生化儀分析儀檢測C反應蛋白（CRP）。

1.5 統計學處理 應用SPSS22.0統計軟件。計量資料以（）表示，多組間計量資料比較采用重復測量方差分析，組內比較采用配對t檢驗，組間比較采用獨立t檢驗；計數資料以百分比（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療前后NF-κB信號通路相關指標比較見表1。觀察組及對照組治療后P50、P65、IkBa均較本組治療前降低（均P＜0.01），且在降低P65方面，觀察組優于對照組（P＜0.01）。

表1 兩組治療前后NF-κB信號通路相關指標比較（ng/L，±s）

表1 兩組治療前后NF-κB信號通路相關指標比較（ng/L，±s）

與本組治療前比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與對照組治療后比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同

組別觀察組（n=40）對照組（n=40）時間治療前治療后治療前治療后P50 0.63±0.06 0.41±0.08**0.62±0.05 0.43±0.09**P65 0.51±0.03 0.34±0.03**△△0.51±0.03 0.28±0.04**IkBa 0.44±0.01 0.31±0.06**0.40±0.01 0.32±0.05**

2.2 兩組治療前后炎癥因子及ESR、CRP水平比較見表2。兩組治療后IL-1、TNF-α、hs-CRP、ESR與治療前比較均降低（均P＜0.01），IL-10則升高（P＜0.01）；且觀察組IL-1、TNF-α、IL-10改善優于對照組（均P＜0.01）。

表2 兩組治療前后IL-1、IL-10、TNF-α、ESR、CRP值比較（±s）

表2 兩組治療前后IL-1、IL-10、TNF-α、ESR、CRP值比較（±s）

組別觀察組（n=40）對照組（n=40）時間治療前治療后治療前治療后IL-1（ng/L）0.71±0.09 0.34±0.08**△△0.71±0.12**0.47±0.07 IL-10（ng/L）0.49±0.09 0.78±0.08**△△0.49±0.07 0.68±0.12**TNF-α（ng/L）0.70±0.12 0.34±0.05**△△0.69±0.13 0.50±0.09**ESR（mm/h）15.22±10.68 11.35±5.45**15.15±10.08 11.62±6.11**CRP（mg/L）11.20±2.84 8.87±2.39**11.00±2.81 9.02±2.49**

2.3 兩組治療前后下腰痛JOA評分、癥狀量化積分、VAS評分比較 見表3。兩組治療后JOA評分、癥狀量化積分、VAS評分與治療前比較，均改善（P＜0.01）；但對照組效果優于觀察組（P＜0.01）。

表3 兩組治療前后下腰痛JOA評分、癥狀量化積分、VAS評分比較（分，±s）

表3 兩組治療前后下腰痛JOA評分、癥狀量化積分、VAS評分比較（分，±s）

組別觀察組（n=40）對照組（n=40）時間治療前治療后治療前治療后下腰痛JOA評分14.10±1.99 17.87±1.96**△△14.02±2.00 19.02±2.00**癥狀量化積分59.85±4.70 25.25±2.77**△△59.60±3.55 21.55±3.60**VAS評分5.13±1.02 3.57±0.84**△△5.10±0.98 3.20±0.56**

3 討論

LDH的病因是多方面的，一般認為是因為椎間盤退變導致的，外傷是其重要的原因。LDH屬中醫學“腰痛”或“痹病”范疇，以血瘀型為多見?！端貑枴づe痛論篇》載“經脈流行不止，客于脈外，則血少，客于脈中則氣不通，故卒然而痛”。清代王清任在《醫林改錯》中指出“諸痛皆由氣血瘀滯不通所滯”。杜仲腰痛丸是甘肅省名中醫趙繼榮教授通過多年臨床經驗總結的治療LDH引起腰腿痛的成方，他認為由于稟賦不足、過度勞累、體虛年老等，腎陽失于溫煦，氣化失權，氣血運行失調致腰痛，加之外邪乘虛侵入，加重氣滯血瘀之證，痹阻經絡，不通則痛。腎虛是發病之本，血瘀是發病之標，治療以補腎助陽、活血化瘀、通絡止痛為主。杜仲腰痛丸主要由杜仲、桑寄生、牛膝（川）、當歸、土鱉蟲、桃仁、狗脊、紅花、三七、川芎等藥物組成，全方具有健腎壯腰、活血通絡、消瘀止痛之效。藥理學研究顯示該方組成藥物具有清除氧自由基、減輕炎性反應、抑制血小板聚集、抗血栓形成等作用［6］。

腰椎間盤退變通常會引起慢性腰痛，而自身免疫反應和多種慢性炎癥物質，如TNF-α、IL-1、IL-10、TXA2、PGI2、NF-κB等，這些炎癥物質可能在疼痛發生過程中起相關作用。血清中的CRP、ESR水平會隨著損傷、炎癥或各類疾病的變化而迅速增加或減少，不僅反應速度快、變化幅度大，還能關聯疾病活動性。有研究表明，IL-1在人體髓核組織中的表達與年齡的增加成正相關［7］。炎癥過程導致椎間盤退變，然而IL-1是主要的炎癥介質，可以導致椎間盤細胞衰老和死亡，從而使椎間盤的生物力學受到損傷［8］。IL-10作為體內的一種可抑制炎癥因子，可以降低有害因子對機體的損害，其表達是由許多免疫細胞產生，主要在椎間盤及其周圍的肌肉關節中。機體通過IL-10的抗炎作用，對促炎因子進行抑制［9］。TNF-α與椎間盤的變性有著密切的關系，它能夠分解介質而促使細胞外基質的降解，同時TNF-α還可誘導神經生長因子及P物質、血管內皮生長因子，從而使得椎間盤中的血管神經系統發生炎癥反應，誘發疼痛的產生［10］。同時它還參與免疫反應，當其濃度處于較高狀態時對身體各個組織產生炎癥反應，對機體造成損害［11］。

本次研究結果示，與本組治療前比較，兩組IL-1、TNF-α、CRP、ESR均降低，IL-10升高。且杜仲腰痛丸組在升高IL-10水平，降低IL-1、TNF-α、CRP、ESR水平方面，明顯優于雙氯芬酸鈉緩釋片。朱換平等應用杜仲腰痛丸治療LDH取得較好療效，也證實能降低LDH患者炎癥介質TNF-α、IL-1β表達［12］。研究還顯示杜仲腰痛丸能明顯提高下腰痛JOA評分，降低癥狀量化積分、VAS評分，但雙氯芬酸鈉緩釋片似乎效果要略優于杜仲腰痛丸。

NF-κB信號通路在腰椎間盤退變的炎癥進程中起重要作用。LDH患者發病時，體內IL-1和TNF-α表達升高，使NF-κB信號通路過度活化；同時髓核細胞還可通過激活NF-κB信號通路導致細胞凋亡從而在椎間盤退變中發揮作用［13］。Eguchi J通過實驗研究表明，NF-κB信號通路在臨床癥狀出現前就已被激活［14］。Yung CL和Wang Yan的研究表明，通過對NF-κB信號通路表達的抑制，又可以抑制IL-1和TNF-α的炎癥反應［15］。NF-κB可以通過控制IL-1及TNF-α的表達從而調控MMP的基因和蛋白的表達［16］。

本次研究結果示，兩組P50、P65、IkBa較治療前均降低，且杜仲腰痛丸組在降低P65方面明顯優于雙氯芬酸鈉組。有學者認為，可能是因為炎性細胞因子受刺激后大量分泌，引起機體內NF-κB信號通路的異?；罨罨蟮腘F-κB信號通路又可以上調IL-1、TNF-α的表達，降低IL-10的表達，二者形成正向反饋［17］?；罨腘F-κB與炎癥因子之間形成放大的正反饋作用，而這種機制在LDH患者發病中占有重要作用。

綜上所述，NF-κB信號通路及細胞因子在腰椎間盤退變的發生、發展中起著重要作用。杜仲腰痛丸能抑制NF-κB信號通路的異?；罨险{IL-10水平，下調IL-1、TNF-α、P50、P65、IkBa等水平的表達，降低異常的炎癥免疫反應，從而減輕腰背部疼痛，提高日常生活能力。