HIF-1α、MRP 在肝癌組織的表達及臨床意義研究

劉俊峰

（新密市中醫院普外二科，河南 新密 452370）

肝癌是臨床常見的消化系統惡性腫瘤之一，惡性程度高，患者預后差，死亡率目前位居所有惡性腫瘤第三位，我國屬于乙肝大國，因此乙肝病毒感染是國內造成肝癌發病率升高的主要原因，目前臨床對于肝癌的早期診斷并開展治療對于改善患者預后具有重要意義[1]。近年來如何早期判斷肝癌復發一直是臨床研究的熱點,傳統的診斷方法是采取甲胎蛋白進行預測,但是診斷準確性與可靠性值得商榷，隨著現代醫學技術的發展，分子生物學指標已成為判斷腫瘤發生和轉移復發重要的方法，現代醫學已經證實肝癌屬于高代謝惡性腫瘤，耗氧量顯著高于正常組織，缺氧誘導因子-1α 屬于缺氧效應調控過程中最為關鍵的轉錄調控因子，有報道指出同肝癌發生發展以及轉移關系密切；多藥耐藥蛋白（英文全稱，MRP）過度表達則同腫瘤細胞出現多重耐藥關系密切,而且同腫瘤惡性生物學行為之間聯系緊密,而臨床對于兩種因子相關性研究報道較為少見[2]。本研究分析了肝癌組織中缺氧誘導因子-1α （英文全稱，HIF-1α）、 MRP 表達情況,以期為臨床提供指導和依據，現匯報如下。

1 對象與方法

1.1 一般資料 選取 2017 年 2 月-2018 年 8 月在我院接受治療的肝癌患者100 例為研究對象。其中男 65 例，女 35 例，年齡 58～83 歲，平均 72.38±5.02 歲。納入標準：⑴年齡≥50 周歲；⑵經病理檢查確診為肝癌者；⑶無其他嚴重基礎疾病者；排除標準：⑴臨床資料不全者；⑵合并其他免疫系統疾病者。根據標準共納入病例數100 例, 其中男78例,女 22 例，年齡 60～84 歲，平均 72.35±4.13 歲；非肝癌患者納入排除標準：年齡≥50 周歲；經病理檢查確診為非肝癌者；近期無其他腫瘤疾病者。本項研究經醫院倫理委員會評審通過。

1.2 方法 采用免疫組化SP 法染色并進行檢測，按照流程進行脫蠟、水化、阻斷內源性過氧化酶、EDTA 熱抗原修復、血清封閉、孵育、DAB 顯色、脫水、透明、封片、顯微鏡下觀察等步驟進行檢查，知陽性反應片為陽性對照，PBS 代替一抗為陰性對照。所有使用試劑均由北京中杉金橋生物技術有限公司購進，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 評價指標 觀察兩組患者 HIF-1α、 MRP 表達情況， 比較不同臨床病理特征肝癌患者HIF-1α、MRP 表達情況，分析影響肝癌患者HIF-1α、 MRP表達的因素。

1.4 統計學處理 數據采用 Excle 錄入后, 采用SPSS 11.5 軟件進行分析。兩組患者、不同臨床病理特征肝癌患者HIF-1α、 MRP 表達情況采用例表示，采用卡方檢驗和回歸分析法進行統計學處理。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者 HIF-1α、 MRP 表達情況的比較 表1 顯示,肝癌組織中 HIF-1α、MRP 陽性表達率分別為 75.00%、80.00%, 均高于非肝癌組織 （χ2值=95.577、93.076，P＜0.001）。

2.2 不同臨床病理特征肝癌患者HIF-1α、 MRP表達情況的比較 表2 顯示，有肝炎史、腫瘤直徑＞5cm、包膜不完整、TNM 分期為Ⅲ+Ⅳ、分化程度為中低分化、 有淋巴轉移的肝癌患者HIF-1α、 MRP陽性表達率較高，不同年齡、性別的肝癌患者HIF-1α、 MRP 陽性表達率無差別。

2.3 影響肝癌患者HIF-1α、 MRP 表達的因素分析 將單因素分析有意義的因素作為自變量，將HIF-1α、 MRP 水平作為因變量進行回歸分析，結果顯示， 淋巴結轉移和分化程度是影響肝癌患者HIF-1α、 MRP 的因素。見表 3。

表2 不同臨床病理特征肝癌患者HIF-1α、MRP 表達情況的比較

表3 影響肝癌患者HIF-1α、MRP 表達的因素分析

3 討論

原發性肝癌屬于臨床常見的消化系統惡性腫瘤，是目前世界范圍內死亡率最高的癌癥之一，目前在我國肝癌發病率呈現逐年升高的趨勢,預后極差，有報道顯示診斷后五年生存率不足5%[3]。由于肝癌發病隱匿，臨床癥狀不典型，因此多數患者就診時已處于中晚期,外科手術一直是治療肝癌的首選方法,但是外科手術治療也無法達到完全根除腫瘤的目的,術后出現復發和轉移會影響患者預后[4]。目前認為肝癌的發生和發展史多因素、多階段的過程, 一般認為肝細胞惡性腫瘤主要是由乙肝病毒、丙肝病毒慢性感染或者黃曲霉毒素感染造成肝硬化進而演變而來[5]。由于肝癌發病隱匿，臨床癥狀不典型，因此多數患者就診時已處于中晚期，外科手術一直是治療肝癌的首選方法,但是外科手術治療也無法達到完全根除腫瘤的目的,術后出現復發和轉移會影響患者預后[6]。研究發現腫瘤干細胞是慢周期細胞,大部分處于細胞分裂周期的G0 和G1周期,一旦受到外界刺激情況下回表達具有化學抵抗分子或者活化的信號通路,導致進行細胞分裂增殖周期,但是在手術后未被殺死腫瘤干細胞會進入到細胞周期并參與調控腫瘤細胞增殖和分化過程,也是術后導致肝癌復發的重要原因[7]。病理學檢查一直是肝癌診斷的金標準,但是在部分患者中可能出現假陰性率,而且在操作的過程中也可能導致腫瘤破裂引發播散種植的風險[8]。近年來化學腫瘤標記物檢查在臨床應用越來越廣泛,其中甲胎蛋白是原發性肝癌應用最廣泛的標記物,但是近年來研究顯示其缺乏敏感性與特異性，尤其是在肝炎、肝硬化患者病變急劇惡化時AFP 數值也會顯著升高，而且在妊娠或者炎癥反應過程中甲胎蛋白也存在假陽性的結果,而在部分原發性肝癌患者中也存在甲胎蛋白陰性或者數值較低的情況,但是目前臨床尚無更為可靠地血清標記物取代AFP 在肝癌診斷和評估治療效果中的地位[9]。

研究顯示肝癌的發生發展過程涉及到多個分子通路，牽涉的基因較多，而且越來越多的研究寄希望與通過相關基因作為靶點可以早期對肝癌進行診斷并開展治療,細胞出現給你個異常后惡性細胞無法及時清除就會不斷生長,繼而形成聚集造成腫瘤形成。本研究分析了肝癌組織中缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）、 多藥耐藥蛋白（MRP）表達情況，HIF-1α 屬于低氧誘導因子家族的一種，一般在低氧狀態下會出現高表達狀態,導致大量的靶基因表達,也可以同標志性蛋白進行結合對于細胞的自噬和調控[10]。近年來大量的研究發現腫瘤組織內部細胞缺氧屬于惡性腫瘤生物學特征,多數患者體內處于低氧環境，HIF-1α 可以調控下游蛋白與信號轉導對腫瘤發生和發展產生影響[11]。一般在低氧狀況下腫瘤會從有氧代謝朝向無氧代謝進行轉變,HIF-1α 可以降低脂質代謝的因子表達抑制脂肪酸氧化過程,因此對于肝臟惡性腫瘤細胞的生長和增殖過程產生影響；HIF-1α 還可以調節人體血管內皮生長因子信號轉導過程，增加其mRNA 穩定性，提升了血管內皮生長因子轉錄活性,促進了腫瘤血管形成[12]。此外HIF-1α 同肝癌的復發和轉移之間關系密切,該因子可以上調體內多種因子的活性為腫瘤細胞轉移提供分子生物學基礎,同時可以調節體內趨化因子促進細胞轉移能力。近年來還不斷有研究發現HIF-1α 同肝癌治療過程中的治療抵抗存在關系，不僅參與化療和放療的低氧耐藥情況，同時低氧環境會激活HIF-1α 蛋白啟動MDR1 轉錄過程，形成P-糖蛋白后將藥物從細胞內泵出，將更低了細胞內的藥物濃度[13]。近年來腫瘤治療的多藥耐藥現象較為嚴重,也是影響惡性腫瘤預后的重要因素,多藥耐藥蛋白屬于跨膜轉運蛋白超家族成員之一，其參與多種腫瘤細胞耐藥過程，多藥耐藥蛋白具有轉運的疏水性,因此通過協同轉運的機制對多種化療藥物達到作用部位數量以及藥物分布進行調控[14]。多藥耐藥相關蛋白在中低分化癌的表達明顯高于高分化的癌,說明中低分化癌與原發性耐藥密切相關,但是也有學者指出其表達低于癌旁組織及正常組織,因此是否與原發性肝癌的耐藥性有關還有待于進一步探討。此外有學者指出MRP 在癌旁組織中的表達高于腫瘤組織及正常組織，在伴有淋巴結轉移的臨床病人腫瘤組織中MRP 的表達顯著高于無淋巴結轉移患者組的腫瘤組織，提示MRP 的表達水平可能與肝癌轉移存在一定的關系[15]。

本研究顯示，肝癌組織中HIF-1α、 MRP 陽性表達率分別為75.00%、80.00%,均高于非肝癌組織,說明在肝癌患者存HIF-1α、MRP 陽性表達升高。通過對不同病理特征肝癌患者分析發現， 具有肝炎病史、腫瘤直徑較大、包膜不完整、分期靠后、中低分化以及伴有淋巴結轉移的肝癌患者HIF-1α、MRP 陽性表達率較高。通過單因素分析發現，淋巴結轉移和分化程度是影響肝癌患者HIF-1α、 MRP的因素。

綜上所述，肝癌組織中HIF-1α、 MRP 陽性表達率較高, 且受患者淋巴結轉移和分化程度的影響。