IPO-38、NIBP2 表達與結腸癌TNM 分期的關系

劉松鴿，王軍凱，李曉娜

（河南科技大學附屬許昌市中心醫院病理科，河南 許昌461000）

流行病學研究表明, 結腸癌的發病率可超過896/10 萬人左右[1],在合并有相關消化道惡性腫瘤家族史的群體中，結腸癌的發病率可持續上升。結腸癌的發生,能夠導致患者近期生活質量及高腫瘤負荷的出現,并增加了結腸癌患者遠期病死的風險[2]。在研究結腸癌患者臨床病理特征進展的相關因素過程中，發現細胞因子的改變，能夠通過影響到癌細胞的生物學特征,干預到消化道上皮粘膜細胞的浸潤能力。增殖相關蛋白（IPO-38）的表達上升，能夠通過誘導轉錄因子的激活, 增加癌細胞核DN A 的異常分裂風險，加劇癌細胞的異常擴增和復制過程[3]；NIK 和 IKKβ 結合蛋白（NIBP2）是細胞周期調控相關因子, 其能夠通過誘導癌細胞G1/S 期細胞比例的改變，最終促進癌細胞的凋亡抑制，促進癌細胞的異常分化[4]。為了揭示 IPO-38、NIBP2 的表達與結腸癌患者的病情關系,從而為臨床上結腸癌患者的診療提供參考,本次研究選取我院收集的88 例結腸癌組織標本,探討了 IPO-38、NIBP2 的表達及其與結腸癌患者的病情關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取 2014 年 1 月至 2017 年 7 月我院收集的88 例結腸癌組織標本、44 例經病理學檢查證實為正常腸粘膜組織（正常組）。

結腸癌組,年齡 47～75 歲,平均 60.3±9.1 歲,性別構成：男 50 例、女 38 例；病灶直徑＞5cm 41 例、≤5cm 47 例；TNM 分期：Ⅰ期 22 例、Ⅱ期 34 例、Ⅲ期 29 例、Ⅳ期 3 例；浸潤深度：T1～T2 26 例、T3～T4 62 例；淋巴結轉移陽性38 例；其中左半結腸38 例、右半結腸 50 例。正常組,年齡 42～75 歲,平均 59.0±8.8 歲；性別構成：男 27 例、女 17 例。兩組患者的年齡、性別比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。

診斷及入選標準：⑴結腸癌的診斷標準參考中華醫學會制定的標準[5]；⑵納入對象的年齡≤75歲；⑶經手術后病理學或經腸鏡取活組織進行病理學檢查證實；⑷正常組為實施結腸鏡檢查且為正常的患者；⑸本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關倫理及保密原則。

排除標準：⑴轉移性結腸癌；⑵在獲取標本前具有放化療史、免疫學治療病史；⑶伴有其他系統的重大疾?。虎让庖呒膊』蜷L期使用糖皮質激素治療的患者。

1.2 免疫組化染色方法及評價標準 石蠟切片采用二甲苯進行脫臘至水，5%的雙氧水常溫在孵育10min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5min，蒸餾水沖洗3 次,每次5min，5%的山羊血清抗體封閉10min，不沖洗，滴加一抗（購自abcum 公司 批號：20119304濃度：1：500），4℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗 3 次，每次5min，滴加生物素標記好的二抗（購自北京康泰生物批號：20104856 濃度：1：1000），37℃孵育30min，蒸餾水沖洗3 次，每次5min，滴加第二代辣根酶標記的工作液體,37℃孵育10min，蒸餾水沖洗3 次,每次5min，顯色之后采用酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

免疫組化結果判定：IPO-38 蛋白陽性著色表達于細胞質、NIBP2 蛋白的陽性著色表達于細胞質及細胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達，⑴根據著色強度：0 分為無色、1 分為淡黃色、2 分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1 分、 陽性細胞所占比例11%～50%為 2 分、 陽性細胞數 51%～75%為 3 分、陽性細胞數所占比例＞75%為4 分， 兩種積分相乘總分＜3 分為陰性、≧3 分為陽性。

1.3 統計學方法 采用美國IBM SPSS 公司的統計軟件包SPSS21.0 版本對本研究的數據進行統計學處理， 采用表示符合正態分布的計量資料，兩組間分析采用t 檢驗；計數資料組間分析采用χ2檢驗；P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 結腸癌組織與正常組中的IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性率比較 結腸癌組織中IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性表達率 70.45%、64.77%， 正常組的IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性表達率 38.64%、27.27%,兩組比較差異具有統計學意義(P＜0.05)；見表 1、圖 1、圖 2。

表1 結腸癌組織與正常組中的IPO-38蛋白、NIBP2 蛋白陽性率比較[n（%）]

圖1 NIBP2 蛋白免疫組化結果，A 為結腸癌組織、B 正常結腸組織，（×200 倍）

圖2 IPO-38 蛋白免疫組化結果，A 為結腸癌組織、B 正常結腸組織，（×200 倍）

2.2 結腸癌組織與正常組中的IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性率比較 TNM 分期 （Ⅲ期+Ⅳ期）、發生淋巴結轉移、浸潤深度（T3～T4）的結腸癌組織中IPO-38 蛋白、NIBP2 蛋白陽性表達率顯著的高于TNM 分期（Ⅰ期+Ⅱ期）、未發生淋巴結轉移、浸潤深度（T1～T2），差異具有統計學意義（P＜0.05）；見表 2、表 3。

表2 結腸癌組織與正常組中的IPO-38 蛋白陽性率比較

表3 結腸癌組織與正常組中的NIBP2 蛋白陽性率比較

3 討論

消化道惡性腫瘤家族史或者攜帶有相關遺傳易感基因，均能夠促進結腸癌的發生，特別是在長期高蛋白飲食或者低纖維素飲食的群體中,結腸癌的發病率可進一步的上升[6]。長期的臨床隨訪觀察研究發現，結腸癌患者的5 年生存率不足45%，其中位生存時間不足34 個月[7,8]。現階段缺乏對于結腸癌患者病情評估的腫瘤標志物, 雖然CA199 或者CEA 等腫瘤指標能夠在結腸癌的臨床病理特征評估過程中發揮作用。但部分研究發現,采用CA1 99 或者CEA 評估結腸癌患者病情的靈敏度較低，其對于結腸癌患者病情評估的一致性率或者可參考性較低[9]。本次研究通過對于結腸癌患者病灶組織中IPO-38、NIBP2 的表達分析研究，能夠在部分揭示結腸癌臨床病理特征進展機制的同時,為臨床上結腸癌患者的診療提供理論方面的參考。

IPO-38 是增殖相關因子, 其通過對于癌細胞膜上轉錄結合因子的結合,能夠提高癌細胞轉錄上游啟動子的激活程度, 提高癌細胞的轉錄激活水平?；A方面的研究認為，IPO-38 能夠通過誘導癌細胞內MAPK 或者AKT 信號通路，進而加劇癌細胞的異常分化過程，導致癌細胞浸潤能力的上升；NIBP2 作為細胞周期調控相關因子，其不僅能夠影響到處于靜止期癌細胞的比例,同時其還能夠增加癌細胞上皮-間質轉換的風險，促進癌細胞的轉移和復發。NIBP2 對于腫瘤微環境的影響，能夠進一步加劇癌細胞生物學特征的惡化,影響到癌細胞的早期異常分裂過程。部分研究者探討了NIBP2 的表達與結腸惡性腫瘤的關系,認為在結腸惡性腫瘤患者中，NIBP2 蛋白的表達濃度明顯上升[10]，但對于IPO 的分析研究較少。

本次研究通過免疫組化探討了IPO-38、NIB P2 的表達情況，發現在結腸癌患者中，病灶組織中的IPO-38、NIBP2 表達陽性率明顯的上升，高于良性對照組結腸組織，統計學差異顯著，提示了IPO-38、NIBP2 的高表達均能夠影響到結腸癌患者的病情進展。這主要由于IPO-38、NIBP2 的表達上升，能夠通過影響到結腸粘膜上皮細胞的自我增值失調，加劇癌細胞突破基底膜組織的能力，最終促進結腸癌的發生和中晚期病情進展過程。王愛軍等[11]研究者也發現，在結腸癌患者病灶組織中，增殖相關蛋白的表達陽性率可平均上升35%～65%, 同時在合并有明顯的腸道外轉移或者腹水的患者中，病灶組織中增殖相關蛋白的表達陽性率可進一步的上升。免疫組化染色分析可見，在病灶組織中，IPO-38、NIBP2 蛋白主要定位于癌細胞膜周邊或者細胞質內側,同時在癌細胞異型性較為明顯的區域,IPO-38、NIBP2 的染色強度可明顯上升。在探討IPO-38、NIBP2 的表達與結腸癌患者臨床病理特征關系的過程中，發現在臨床分期較晚、浸潤深度較深或者發生了淋巴結轉移的患者中，IPO-38、NI BP2 蛋白的表達陽性率較高, 提示IPO-38、NIBP2的表達可明顯的上升。這可以從下列幾個方面進行理解[12-15]：⑴IPO-38 的上升，能夠提高結腸腺體上皮細胞的變形能力,促進癌細胞浸潤范圍和浸潤深度的增加，提高了臨床分期的進展；⑵NIBP2 的上升能夠影響到癌細胞分泌淋巴結內皮細胞粘附分子的能力，導致淋巴結轉移的發生。

綜上所述,在結腸癌患者病灶組織中，IPO-38、NIBP2 蛋白的表達陽性率均明顯上升, 同時IPO-38、NIBP2 的表達與結腸癌患者的臨床分期、 淋巴結轉移或者浸潤深度密切相關。