不同傳染病四項ELISA 試劑檢測獻血者結果差異性分析

范許洲，王偉，嚴京梅，黃雪蓮，欒建鳳

（東部戰區總醫院輸血醫學科（原南京軍區南京總醫院），江蘇 南京210002）

輸血相關傳染病檢測是確保血液及血液制品安全和減少醫療糾紛的重要措施。目前常規使用酶聯免疫檢測（ELISA）方法實施輸血相關四項傳染病檢測（簡稱傳染病四項，包括乙肝肝炎表面抗原、丙型肝炎抗體、梅毒抗體和艾滋病抗體），雖然ELISA 已經具有了較高的靈敏度和特異性，但各家試劑的差異及試驗干擾會產生試驗結果的差異，干擾了檢測結果的準確性。為保障血液的安全，獻血者的血液必須用兩家不同廠家的試劑檢測兩次，任何一家試劑檢測陽性均作陽性處理，兩家檢測均陰性的血液再用核酸檢測（NAT）[1-3]。獻血者血液的檢測為我們評價ELISA 試劑的檢測結果提供了基礎，并為實施患者輸血前檢測提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2016 年 1 月至 2018 年 10 月本血液中心39824 份無償獻血者傳染病四項檢測。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 ELISA 檢測試劑初檢為廈門英科新創科技有限公司,復檢試劑乙型肝炎肝表面抗原、丙型肝炎抗體、梅毒為北京金豪制藥股份有限公司，人類免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗原抗體檢測試劑盒為北京萬泰藥業股份有限公司。核酸檢測儀器：科華核酸提取儀、熒光 PCR 儀（ABI7500）試劑為科華核酸檢測試劑盒。STAR 全自動加樣儀（瑞士HAMILTON），FAME24/32 全自動酶免分析系統（瑞士HAMILTON）。所有試劑均為經檢驗合格且在有效期內使用； 所有儀器設備均按要求進行維護保養，并確保能夠正常工作。

1.2.2 試驗結果的判讀 兩種ELISA 檢測試劑結果一致，判讀結果，若只有一種出現陽性結果時，用同樣的試劑對原試管進行雙孔復檢,結果均為陰性則表示合格；任意一孔出現陽性且復檢后仍為陽性則表示不合格；ELISA 檢測后,剔除酶免雙試劑陽性、單試劑陽性的樣本及重度脂溶血樣本，其余樣本進行核酸檢測。核酸混樣檢測結果陰性為合格，混樣陽性進行拆分實驗驗證, 拆分結果陰性為合格，拆分結果陽性為不合格。

1.3 統計學方法 采用 GraphPadPrism5.0 統計軟件處理數據, 兩組數據之間的相互比較采用 t 檢驗；計數資料采用百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ELISA 檢測結果 總陽性見表1。

表1 2016-2018 年39824 例獻血者傳染病四項ELISA 檢測結果

表2 2016-2018 年獻血者傳染病四項ELISA 檢測雙試劑與單試劑陽性結果

2.2 ELISA 檢測單試劑與雙試劑陽性結果 見表2、圖 1。

圖1 2016-2018 年獻血員傳染病四項酶免檢測雙側與單側反應陽性比較

2.3 核酸檢測結果 35431 例酶免檢測陰性且質量合格的標本進行HIV-RNA、HCV-RNA、HBV-DN A 檢測,只有 HBV-DNA 陽性標本 12 例：2016 年 5例，2017 年 4 例，2018 年 3 例。其它標本各項目核酸檢測均為陰性，不同年份不合格率比較：χ2=2.73,P＞0.05，見表 3。

3 討論

本文中39824 例無償獻血者血液樣本，ELISA檢測的總陽性率為1.88%,剔除ELISA 雙試劑及單試劑陽性標本及質量不合格標本后，35431 例血液樣本進行核酸檢測,總陽性率為0.13%,且均為HB V-DNA 陽性（15 例），低于王湘屏[4]等人報道核酸陽性率0.278%、梁浩堅[5]等人報道核酸陽性率0.22%，但高于楊琳琳[6]等人報道核酸陽性率0.06%，葉祖興[7]等人報道核酸陽性率0.07%。提示：一是雖然血液樣本經 ELISA 檢測為陰性，但HBsAg 仍有一定比例核酸檢測陽性率；二是雙試劑ELISA 檢測有效提高了血液的安全性。

表3 2016-2017 年酶免檢測陰性標本核酸檢測結果

將無償獻血者血液樣本ELISA 檢測的雙試劑和單試劑陽性率進行比較，發現HBsAg、抗-HCV與抗-HIV 和/或P24 檢測中單側陽性率均高于雙側,且新創試劑與金豪試劑檢測陽性率不同,HBsAg與抗-HCV 兩種試劑陽性率存在差異且有統計學意義,提示不同廠家的ELISA 試劑檢測結果存在差異。這可能是由于試劑的穩定性、特異性、敏感度不同以及操作等原因造成[8-11]。有研究報道，ELISA單試劑有反應標本經核酸檢測陽性檢出率達0.752 %,ELISA 無反應 （S/CO≤0.7）標本中，陽性檢出率0.27%,兩者相比差異有統計學意義（χ2=8.801, P=0.003）。本統計中抗-TP 結果一致性高，可能與獻血人群的年齡段分布有關,據報道，抗TP-ELISA 假陽性多出現于老年人、有多次妊娠史及患免疫系統疾病的人群[12-16]，而本報道中的獻血者主要年齡段在青少年[17]。

以上的分析結果提示,單ELISA 試劑的檢測存在一定的假陽性和假陰性。提示：一是作為獻血者血液的檢測單試劑陽性血液均應列為不合格血液，以提高血液使用的安全性；二是對于采供血機構應提倡對這些獻血者做進一步的確認,以免使潛在的獻血員被誤屏蔽；三是對于獻血者和輸血者，假陰性和假陽性均會給他們帶來不良后果。假陰性延誤治療；誤判陽性，尤其是艾滋和梅毒的誤判有時甚至導致嚴重的社會問題，檢驗人員對ELISA單試劑陽性的結果需謹慎,首先應該用原試劑復查原始管，確保實驗無誤，仍為相同結果時，最好用確認方法確認后發放結果。