CLIA、ELISA、TRUST 診斷梅毒螺旋體抗體的價值分析

周貴芬

（九江市濂溪區人民醫院檢驗科，江西 九江 332005）

梅毒（Syphilis）為臨床發病率較高的一種慢性全身性感染性疾病，因蒼白螺旋體感染所致，具有危害大、傳染性強等特征，可經母嬰、血液、性接觸等途徑傳播， 且受世界人口流動頻繁等多種因素的影響，導致其患病率呈現明顯上升趨勢[1,2]。該疾病的臨床表現較相對復雜， 同時梅毒螺旋體培養較為困難， 而血清學檢測可為臨床診斷提供重要依據， 其中蒼白密螺旋體明膠顆粒凝集試驗（Treponema pallidum particle agglutination assay，TPPA）、化學發光免疫分析法（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）及酶聯免疫吸附試驗（ELISA）及甲苯胺紅不加熱血清試驗（Toluidine red unheated serum test，TRUST）均為臨床常見血清學檢測方法，但其診斷效能存在一定差異性[3,4]。基于此，本研究進一步探討上述檢測方法對梅毒螺旋體抗體的檢測結果?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析 2018 年7 月至 2019年7 月期間在九江市濂溪區人民醫院就診的130例疑似梅毒感染患者的臨床資料， 其男性71 例，女性 59 例； 年齡 20～85 歲， 平均年齡 52.31±4.15歲；身體質量指數（Body mass index,BMI）18.3-24.6 kg/m2，平均 BMI 21.44±1.07kg/m2；來源：骨科 6 例，五官科8 例，疾控4 例，體檢科 13 例，外一科 12例，外二科 16 例，內一科 15 例，內二科 7 例，急診科 3 例，婦產科 30 例，皮膚科 16 例。

1.2 入選標準 ⑴納入標準：①存在梅毒性脫發、全身淺表淋巴結腫大、發熱、頭痛等臨床表現者；②臨床資料完整者；③肝腎功能正常者；④梅毒感染者符合《梅毒、淋病、生殖器皰疹、生殖道沙眼衣原體感染診療指南(2014)》[5]內診斷標準。⑵排除標準：①嚴重器官功能衰竭者；②凝血功能障礙者；③表達障礙或精神疾病者； ④既往接受抗梅毒治療者。

1.3 方法 所有入選者均需空腹抽取5ml 靜脈血，3000r/min 離心 10min，分離血清。⑴CLIA：于微孔板內加入 50μl 待測標本,50μl 磁微粒，100μl 酶結合物溶液,于37℃環境下給予溫育，時長30min，通過磁分離洗滌設備進一步洗滌4 次，加入100μl 發光底物，于室溫下進行避光反應，時長5min，經安圖全自動化學發光免疫分析儀（AutolumoA2000)進行測定。⑵ （珠海麗珠有限公司提供的試劑）ELISA：將50μl 待測標本加入至預包被條孔處，同時設置為空白對照、陰性與陽性，在37℃環境下孕育60min， 將50μl 酶標物分別加入至陽性與陰性對照孔內，振蕩搖勻，放置在37℃環境下給予溫育30min,而后于各孔內置入50μl 底物緩沖液，振蕩搖勻，放置在37℃環境下溫育30min，隨后將50μl終止液加入至隔孔內， 給予輕輕搖勻， 于酶標儀（鄭州安圖有限公司提供） 上進行讀數。⑶TRUST（上海榮盛生物有限公司試劑）：于卡片圈內放置50μl 血清，均勻涂抹，搖勻抗原，滴加 1 滴，將卡片放置于立體脫色搖床處，振蕩8min 搖勻，于亮光下觀察結果；⑷TPPA：各標本均需做9 孔，于U 型反應板內放置標本稀釋液，1 孔需加入 100μl，2～9孔各需加入 25μl，將 25μl 血清加入至 1 孔，給予混勻操作，取25μl 加入至2 孔，術后依次添加至9孔，于 3 孔內將 25μl 未致敏粒子 D 液，4～9 孔加入25μlC 液，振蕩30s，將微量反應板進一步置入至有蓋濕盒內，于15～30℃環境下靜置2h，而后觀察結果，TPPA 試劑盒由上海士鋒生物科技有限公司提供。

1.4 評價指標 ELISA：S/CO≥1 視作陽性；CLIA：S/CO≥1 視作陽性；TRUST：有凝集者視作陽性；TPPA：顆粒散開，陽性(+)滴度：1：80 視作陽性。

1.5 統計學方法 采用SPSS24.0 軟件進行數據處理，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 診斷結果 將TPPA 檢測結果視作金標準，CLIA 的診斷梅毒抗體準確度為98.46%（128/130）,ELISA 為 96.92%(126/130),TRUST 為 85.38%(111/130)。TPPA 與 CLIA、ELISA 診斷準確率對比，差異無統計學意義 （χ2=0.504、2.285，P=0.156、0.131）；TRUST 診斷準確率均低于TPPA 診斷結果,差異有統計學意義（χ2=20.498，P=0.000）。見表 1。

表1 不同檢測方法診斷結果對比n(%)

2.2 診斷效能 CLIA、ELISA 診斷梅毒抗體的敏感度、 特異度、 陽性預測值、 陰性預測值均高于TRUST 診斷結果，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

3 討論

表2 不同檢測方法診斷效能對比n(%)

梅毒因梅毒蒼白螺旋體導致,可經性行為于人群內相互傳播，且可經胎盤進一步傳染胎兒，危及下一代身心健康。在我國，該疾病表現為爆發型增長態勢，可對患者生活質量產生嚴重影響[6,7]。因此，探求有效診斷方式，控制疾病傳播顯得極為重要。

梅毒螺旋體檢查為既往常見診斷方式,通過直接免疫熒光試驗或暗視野顯微鏡檢查法,于顯微鏡下對梅毒螺旋體運動方式、特征性形態給予觀察，但其易受到檢測人員技能、檢測儀器狀態、患者用藥等多種因素的制約，且臨床檢出率較低，費力費時，無法作為大規模篩查手段[8,9]。當人體感染梅毒螺旋體后， 可進一步產生特異性抗密螺旋體抗體以及非特異性抗心磷脂抗體[10]。CLIA、ELISA、TPPA以及TRUST 等均為臨床較為常見的血清學檢測方式，其中TRUST 可作為梅毒篩查手段，通過定量實驗可有效評估療效， 但其存在一定的假陰性與假陽性， 難以對其進行篩查實驗；ELISA 以及CLIA可有效通過基因重組工程進一步合成梅毒螺旋體多肽抗原包被于微孔滴定板處， 利于檢測人體血清內梅毒特異性抗體，TRUST 則于抗原中加入活性炭顆粒、甲苯胺紅顆粒作為指示物，以便肉眼觀察；TPPA 法雖具有良好的特異性與穩定性， 可對梅毒篩查顯示為陽性的標本給予進一步確診，但其試劑昂貴、操作復雜、耗時較長，難以進行梅毒大規模篩查以及觀察療效[11-13]。本研究結果顯示，CLIA 診斷梅毒抗體的準確度為98.46%；ELISA 為96.82%，TRUST 為 85.38%，TPPA 與 CLIA、ELISA診斷準確率無明顯差異，TRUST 診斷準確率明顯低于TPPA 診斷結果,且 CLIA、ELISA 診斷敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值均高于TRUST 診斷結果。且禹梅等[14]研究結果顯示,CLIA、ELISA 的診斷準確率分別為99.62%、99.50%, 均高達95.00%以上，與本研究結果具有一致性。鄒紅霞等[15]研究結果顯示，CLIA、ELISA 在敏感度及特異度方面無明顯差異， 而TRUST 的敏感度及特異度均明顯低于CLIA、ELISA，與本研究結果一致。究其原因為，TRUST 檢測多為非異性抗體，故可出現一定生物學假陽性現象，多見于慢性腎炎、結核、類風濕性關節炎、病毒性肺炎以及紅斑狼瘡等疾病[16-18]。但值得注意的是，ELISA 雖具有良好的特異性以及敏感度，可作為該疾病大規模篩查手段，但同樣存在一定假陽性現象， 并難以反映患者是否存在現癥感染， 需進一步結合臨床表現和相關實驗進行判斷與確診，而CLIA 為現臨床檢測梅毒螺旋體特異性抗體的一種新方式，具有診斷效能高、操作簡便等優勢， 其可顯色底物進一步轉換為化學發光底物，利于提高穩定性，延長發光信號時間，具有一定應用前景，但同樣存在一定假陽性現象[19,20]。

綜上所述，CLIA 與ELISA 在梅毒螺旋體抗體檢測方面均具有良好診斷效能， 但臨床應依據實際情況采取對應檢測方法，以滿足臨床需求。