江西省五輪結核病實驗室分子診斷技術能力驗證結果分析

趙竟男，何旺瑞

（江西省疾病預防控制中心，江西 南昌 330029）

結核病是嚴重危害人民群眾健康的呼吸道傳染病，我國結核病年發病數100 萬，發病率78/10萬[1]，是全球結核病高負擔國家之一。為提高結核病患者的發現率,分子生物學檢測技術已廣泛應用于結核病的實驗室診斷，新版《肺結核診斷》標準[2]也強調了分子生物學結果對診斷的價值。為提高各級實驗室檢測能力與水平,保證分子生物學檢測質量，自2015 年至今，中國疾控中心結核病參比實驗室組織了五輪結核病實驗室分子診斷技術能力驗證活動。現將江西省參加五輪分子診斷技術能力驗證活動的情況分析如下。

1 材料與方法

1.1 受試實驗室范圍 江西省所有開展結核病分子診斷檢測項目的實驗室。

1.2 測試項目 能力驗證工作主要針對結核病和耐藥結核病分子生物學診斷技術，包括線性探針、基因芯片、熔解曲線、多色半巢式實時熒光定量核酸擴增和恒溫擴增等方法。

1.3 測試樣本 測試樣品由國家結核病參比實驗室提供,每套測試樣本含10 份人工痰樣本(經過滅活處理)，每個實驗室檢測一套測試樣本。測試樣品由國家結核病參比實驗室航空運輸到江西省結核病參比實驗室,江西省結核病參比實驗室再分發到各設區市級結核病實驗室,由地市級結核病實驗室分發轄區內開展分子生物學檢測技術的縣區級結核病實驗室。

1.4 結果反饋及統計分析 省級結核病參比實驗室將本省參加測試實驗室的原始檢測結果和匯總結果于規定時間前報送國家結核病參比實驗室。通過Excel 軟件對采集數據進行統計分析。

2 結果

2.1 五輪能力驗證總體情況 自2015 年起,江西省疾控中心組織全省各級相關結核病實驗室共參加了5 輪結核病分子診斷能力驗證,具備結核病分子診斷能力的實驗室數量逐年增加,其中參加第五輪測試的實驗室最多，見表1。

2.2 五輪能力驗證受試單位級別情況 江西省第1～5 輪結核病分子診斷能力驗證參加單位級別情況，見表2。

2.3 五輪能力驗證受試單位類型情況 江西省第1～5 輪結核病分子診斷能力驗證參加單位類型有疾控中心、綜合醫院、專科醫院、院所合一及結防所，見表3。

2.4 五輪能力驗證發生錯誤分析

五輪能力驗證，共有四家實驗室未通過測試，見表4。

2.5 江西省第五輪結核病分子能力驗證檢測項目分布情況 五輪能力驗證，以第5 輪參加的單位及項目最多，見表5。

表1 江西省第1～5 輪結核病分子診斷能力驗證總體情況

表2 江西省第1～5 輪結核病分子診斷能力驗證參加單位級別

表3 江西省第1～5 輪結核病分子診斷能力驗證參加單位類型

表4 江西省第1～5 輪結核病分子診斷能力驗證錯誤類型分析

表5 江西省第五輪結核病分子能力驗證檢測項目分布情況

3 討論

結核病分子生物學檢測在提高結核病病原學陽性率上具有明顯的優勢,基因擴增檢測技術作為高靈敏度、高特異性的檢測方法,更加需要完善的質量保證體系來確保檢測的準確性,其應用對實驗室的環境條件、儀器設備、試劑、耗材、人員技術能力等方面的要求都非常嚴格[3]。操作過程是否規范,結果判讀是否準確都將直接影響到檢測結果的可信度,而每一項檢測結果都是臨床診斷決策的直接證據來源,其可信度和等級的高低直接影響到臨床決策和病人的健康[4]。

綜合分析五輪結核病分子能力驗證情況，參加能力驗證的實驗室來自省、市、縣各級結核病實驗室,江西省結核病分子診斷能力及檢測質控覆蓋率都保持在較高水平。從檢測能力上看，省級實驗室檢測能力最佳；從參與能力驗證的實驗室分布上看，省、市、縣各級實驗室數量逐漸增多；從參與單位類型來看，參加能力驗證的疾控中心有所減少，綜合醫院有所增加，這說明在江西省落實“三位一體”結核病防治體系管理模式之后，結核病檢測已從疾控中心逐步轉向綜合醫院。第三輪能力驗證參加實驗室數銳減和第四輪能力驗證回報結果實驗室數量與申報參加數量相差較多均是由于經費有限，免費試劑供應不足導致。從檢測項目分布情況來看，主要集中在線性探針及Genexpert 兩種技術上。各級實驗室還需根據各自實際情況選擇適宜的檢測方法,引進更多種類的分子檢測技術以保證市場的良性競爭。部分綜合醫院的實驗室根據臨床需要已開展了多種結核相關的分子生物學檢測項目?；仡?～5 輪能力驗證，只有一家實驗室采用了兩種技術測試了質控品。多數實驗室只選擇一種檢測項目參加測試,這不能保證所有檢測項目的可靠性。這主要是由于分子生物學檢測試劑昂貴，由于利益的驅使,在試驗成本和質量控制的平衡上，容易傾向前者而忽視后者[3]。應該在保證檢測質量的前提下，再考慮節約成本。

影響實驗室檢測結果的準確性的因素很多，從醫生開具檢驗申請單到結果報告,任何一個環節處理不當,都會影響檢驗結果的準確性[5]。通過對五輪能力驗證發生的錯誤進行分析,地市級和縣區級實驗室均發生過錯誤,且分布在疾控中心、綜合醫院、院所合一多種類型的實驗室。四例錯誤中有兩例錯誤為結果報送錯誤, 線性探針及PCR 反向點雜交法都需要檢測人員通過雜交條帶,人為判斷結果,這就需要結果報告人員認真仔細，且要理解檢測結果報送規則，如未檢測到結核分枝桿菌，則無需報告藥敏結果；“NTM”（非結核分枝桿菌） 與未檢測到結核分枝桿菌復合群意義并不相同。同時，要加強報告審核制度，互相矛盾、異常的結果應及時發現，并進行復核[6]。有一家實驗室未通過的原因為2 例標本在檢測中儀器報錯,無法獲得檢測結果。提示檢測人員要定期校正和維護儀器，保證儀器性能良好，量值準確可靠。有一家實驗室因假陽性結果未通過測試,基因擴增實驗具有極高的靈敏度和對原模板的指數擴增特性，操作稍不留意，很容易交叉污染，導致假陽性[3]。

通過以上分析可以發現,手工操作是影響質量的關鍵因素。加強人員的培訓[7]，在規范檢測人員的操作的同時,也使檢測人員不只是機械化的操作實驗，而是更深入的了解實驗的原理、結果判讀及意義。只有真正做到檢驗前、中、后各環節的質量控制到位，才能更好地為臨床服務。

按照“結核病防治十三五規劃”要求，到2020年，所有地市級定點醫療機構，80%縣（市、區）具備結核病分子生物學診斷的能力[8]。在落實“三位一體”結核病防治體系管理模式之后，將有更多的醫療機構承擔結核病檢測工作。按照《結核病防治管理辦法》要求，醫療機構結核病實驗室應在相應級別臨床檢驗中心和上級結核病實驗室的技術指導下， 開展質量有保證的結核病實驗室檢查工作[9]。通過能力驗證這種室間質評活動,實驗室很容易發現自己存在的問題和不足,為實驗室解決實際工作中存在的問題提供線索[10]，各級結核病實驗室應堅持參加能力驗證活動，提高自身的檢測能力，以更加務實和細致的工作保證檢驗結果的科學性和準確性，為臨床提供更加準確的實驗診斷依據，切實提高醫療以及檢驗質量。