BDNF 基因rs6265 位點多態(tài)性與產(chǎn)后抑郁及血清葉酸水平的關(guān)系

錢莉，史政陽，侯曉俊

（南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 473000）

產(chǎn)后抑郁癥（Postpartum depression, PPD）是發(fā)生在產(chǎn)褥期的情緒障礙性疾病，主要表現(xiàn)為抑郁，食欲不振，睡眠障礙，煩躁，焦慮，缺乏興趣，注意力不集中，甚至出現(xiàn)幻覺[1]，嚴重影響孕產(chǎn)婦健康和嬰兒的生長發(fā)育，因此，早期診斷和治療對改善母嬰預(yù)后具有重要意義。PPD 與普通抑郁癥有相似的發(fā)病機制[2]，有許多研究表明了抑郁癥患者的遺傳易感性。另有研究表明，葉酸水平降低與抑郁癥有一定關(guān)系,使用葉酸或?qū)⑵渑c抗抑郁藥聯(lián)合可用來改善抑郁癥狀[3,4]。但是，也研究認為低葉酸水平與抑郁癥沒有關(guān)系[5]。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（Br ain-derived neurotrophicfactor,BDNF） 是腦中含量最多的神經(jīng)營養(yǎng)因子,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中起重要作用。近年來，BDNF 基因被看作是抑郁癥的潛在基因[6]，相關(guān)研究主要針對基因與疾病本身的關(guān)聯(lián)，但結(jié)果并不十分一致。對BDNF 基因和抑郁癥相關(guān)性的進一步遺傳學(xué)研究主要集中在BDNF基因rs6265 位點的多態(tài)性[7],而關(guān)于BDNF 基因rs6 265 與PPD 的關(guān)系卻鮮有報道。本研究旨在探討B(tài)DNF 基因rs6265 位點多態(tài)性與產(chǎn)后抑郁及血清葉酸水平的關(guān)系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2017 年 1 月至 2019 年 3 月在我院治療的產(chǎn)后抑郁患者110 例 （觀察組），同時選取健康產(chǎn)褥期婦女220 例作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴均為初產(chǎn)婦；⑵診斷符合中國精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)第3 版中的標(biāo)準(zhǔn)；⑶新生兒正常；⑷產(chǎn)婦及家屬知情同意，并經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴產(chǎn)前有精神障礙者；⑵有妊娠期并發(fā)癥、惡性腫瘤、免疫性系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌疾病等；⑶有精神活性物質(zhì)和非成癮物質(zhì)所致抑郁。

1.2 實驗方法 BDNF 基因rs6265 位點多態(tài)性檢測：分別采取每個受試者血 2ml，使用苯酚-氯仿法從全血中提取基因組DNA。通過 PCR-RFLP 檢測rs6265 位點多態(tài)性。生工生物公司設(shè)計合成BDNF基因 rs6265 位點 PCR 引物：正向 5′-TTTCT CCCTACAGTTCCACCAG-3′； 反 向 5′- CTCCAAAG GCACTTGACTACTG-3′。PCR 反應(yīng)體系：1μl DNA模板，1μl 上下游引物，PCR 反應(yīng)條件：98℃ 3 min預(yù)變性,繼以95℃變性1 min，60℃退火45 s,72℃延伸 1 min，共 35 個循環(huán)；72 ℃再延伸 8 min。將 PCR產(chǎn)物于1.5%瓊脂糖凝膠中電泳分離, 通過凝膠成像系統(tǒng)確定擴增結(jié)果。擴增后，對擴增產(chǎn)物進行酶切, 酶切體系 10μl：PCR 產(chǎn)物 5μl，Buffer 3μl，E-co72I 限制性內(nèi)切酶4 U，后用雙蒸水補齊。在37℃條件下孵育2h，進行1.5% 瓊脂糖凝膠電泳，最后用紫外凝膠成像系統(tǒng)對基因型進行分析判斷。BDNF 基因rs6265 位點由酶切產(chǎn)生野生型CC、雜合型CT、純合突變型TT 三種基因型。見圖1。

圖1 凝膠成像系統(tǒng)檢測BDNF 基因rs6265 位點電泳圖

葉酸水平檢測：取各基因型觀察組患者空腹時的肘靜脈血4ml, 離心后分離血清, 在Roche E1 70 電化學(xué)發(fā)光分析儀上檢測葉酸水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計分析采用SPSS22.0 軟件，計量資料采用表示，兩組間比較使用t 檢驗，三組間比較采用方差分析, 兩兩比較采用LSD-t 檢驗； 計數(shù)資料比較使用χ2檢驗； 樣本代表性采用Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 觀察組和對照組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 觀察組和對照組一般資料比較

2.2 兩組BDNF 基因rs6265 位點多態(tài)性比較 觀察組和對照組BDNF 基因rs6265 位點多態(tài)性符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗（P＞0.05）；兩組 BDNF 基因rs6265 位點基因型構(gòu)成比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=10.742，P=0.005），且觀察組 TT 及等位基因T 所占比例均明顯低于對照組，CC 所占比例明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.481，P=0.011；χ2=12.119，P=0.000；χ2=8.523，P=0.004）。見表2。

2.3 觀察組不同基因型患者血清葉酸水平比較觀察組基因型CC 患者血清葉酸水平明顯低于基因型 TT 和 CT 患者(P＜0.05)；基因型 CT 和 TT 患者血清葉酸比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表3。

表2 觀察組和對照組BDNF 基因rs6265 位點多態(tài)性比較

表3 觀察組不同基因型患者血清葉酸水平比較

3 討論

PPD 通常在出生后6 周內(nèi)發(fā)生,大多數(shù)患者可在3 至6 個月內(nèi)自行恢復(fù),但有些可能持續(xù)1 年以上或發(fā)展為慢性抑郁癥,而約40%的女性會在另一次妊娠或其他疾病中復(fù)發(fā)[8,9]。目前，PPD 尚缺乏統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)和治療方法, 臨床上主要以預(yù)防為主。

BDNF 是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，在神經(jīng)元簇的生長，發(fā)育，存活和突觸可塑性中起重要作用[10]，其分泌失調(diào)與情感障礙密切相關(guān),有實驗數(shù)據(jù)顯示抑郁癥患者血漿BDNF 濃度降低[11]。壓力可以導(dǎo)致腦部某些區(qū)域（如海馬）中BDNF 的表達顯著降低，而長期抗抑郁治療和電驚厥治療可以增加BDNF 的表達[12]，因此，BDNF 與產(chǎn)后抑郁的發(fā)病機制可能存在一定的關(guān)聯(lián)，但尚缺乏相關(guān)研究證實。

鑒于BDNF 在抑郁癥的病理生理學(xué)中的作用,本研究對BDNF 基因rs6265 位點多態(tài)性與產(chǎn)后抑郁及血清葉酸水平的關(guān)系進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組BDNF 基因rs6265 位點基因型TT 和等位基因T 所占比例均顯著低于對照組，CC 所占比例明顯高于對照組,提示BDNF 基因rs6265 位點CC 基因可能與產(chǎn)后抑郁發(fā)生有關(guān),具有C 等位基因的產(chǎn)婦可能比T 等位基因產(chǎn)婦具有更高的PPD 風(fēng)險。而周英勇等[13]的研究發(fā)現(xiàn)，BDNF 基因rs6265 位點CC 基因突變?yōu)镃T、TT 后，產(chǎn)后抑郁發(fā)生率顯著減低，與本研究結(jié)果基本一致。故可以推測BDNF 基因rs6265 與產(chǎn)后抑郁的發(fā)生可能存在一定的關(guān)聯(lián)。

流行病學(xué)和臨床研究表明,低葉酸水平與抑郁癥的發(fā)生顯著相關(guān),孕期補充葉酸可以預(yù)防產(chǎn)后抑郁癥的出現(xiàn)[14]。黃志華等[15]的研究也發(fā)現(xiàn)血清葉酸水平與PDD顯著相關(guān)。本研究結(jié)果顯示CC 基因型患者的血清葉酸水平顯著低于 TT 和 CT 基因型患者 （P＜0.05），而基因型CT 和TT 患者血清葉酸水平無顯著性差異,提示葉酸水平升高可能通過促進BDNF基因rs6265 位點CC 基因突變?yōu)镃T、TT，從而對產(chǎn)后抑郁起到保護作用。其機制可能與BDNF 基因rs6265 錯義突變使蛋氨酸取代纈氨酸而提高BDNF 的分泌活性,而葉酸能促進蛋氨酸的合成，從而進一步提高BDNF 水平， 預(yù)防產(chǎn)后抑郁的發(fā)生有關(guān)。綜上所述，BDNF 基因rs6265 位點多態(tài)性可能與產(chǎn)后抑郁易感性有關(guān),同時可能與血清葉酸水平有一定關(guān)系。