宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白表達及意義

周順平

（河南紅陽工業有限責任公司職工醫院婦產科，河南 南召 474678）

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤,主要發生于宮頸陰道部或移行帶及宮頸管內膜交界處,其中人乳頭狀瘤病毒感染、性激素失調、早婚早育及子宮頸糜爛癥均為宮頸癌的誘發因素,近年來發病率呈逐年升高趨勢[1]。文獻[2，3]提示多種細胞因子與宮頸癌的侵襲和轉移機制具有密切關系,多種因素共同影響癌細胞的快速增值、DNA 合成及修復，調控宮頸癌的發生發展，其中葉酸在癌細胞的DNA 高效分裂具有重要作用,因而轉運葉酸的受體α 成為了研究熱點，而FR-α 在黏液腺癌及部分腦腫瘤中均具有重要作用。TopoⅡ能夠通過調節核酸結構的動態變化而調節DNA 修復、復制及轉錄等生命活動[4]。但FR-α、TopoⅡ蛋白在宮頸癌組織中表達及意義研究鮮有報道。因而，本研究深入探討了FR-、TopoⅡ蛋白在宮頸癌組織、 癌旁組織及正常宮頸組織中的表達情況及與宮頸癌臨床病理特征關系,旨在為尋求新的靶向治療提供一定的幫助和依據,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2017 年 1 月至 2019 年 2 月在我院手術切除的宮頸癌組織、 癌旁組織標本92例,納入標準：⑴均經病理學確診；⑵術前未行放化療等抗腫瘤治療； ⑶臨床資料保存完整。排除標準：⑴合并有其他系統腫瘤者；⑵合并有免疫系統性疾病、嚴重肝腎功能障礙、血液系統疾病等。同時選取正常宮頸組織標本78 例，宮頸癌和正常宮頸組織患者一般資料比較差異無統計學意義 （P＞0.05）,見表 1。

表1 宮頸癌和正常宮頸組織一般資料比較

1.2 實驗方法 免疫組化染色法檢測各組織標本FR-、TopoⅡ表達，常規石蠟切片后脫蠟處理，梯度水化后H2O2（3%）抑制內源性過氧化酶，枸櫞酸鈉（0.01mol/L） 抗原修復后，100℃熱水 10min 加熱，PBS 洗片后BSA（10%）封閉非特異性位點10min，4℃一抗孵育過夜， 以PBS 代替一抗呈陰性對照，加入生物素標記二抗，37℃下孵育30min，PBS 沖洗3 次，DAB 顯色后蘇木素復染，脫水、透明、干燥及封片。

1.3 結果判斷 采用半定量積分方法,染色強度：無著色為0 分,淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；陽性細胞比例＜1%為 0 分,1%～10%為 1 分,11%～50%為 2 分,51%～74%為 3 分,≥75%為 4 分。染色強度和陽性細胞比例得分之積≥3 分為陽性表達[5]。

1.4 統計學處理 采用SPSS22.0 進行統計分析，計量資料采用表示，組間比較使用t 檢驗，計數資料比較使用χ2檢驗，相關性采用Spearman 秩相關分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 宮頸癌組織、 癌旁組織和正常宮頸組織FR-、TopoⅡ蛋白表達 宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織和正常宮頸組織 （P＜0.05),而癌旁組織與正常宮頸組織間差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 2。

表2 宮頸癌組織、癌旁組織和正常宮頸組織FR-、TopoⅡ蛋白表達n（%）

2.2 FR-、TopoⅡ蛋白表達與宮頸癌臨床病理關系宮頸鱗狀細胞癌、TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴結轉移宮頸癌組織FR-α 陽性表達率明顯高于宮頸腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結轉移宮頸癌組織（P＜0.05）； TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴結轉移宮頸癌組織TopoⅡ蛋白陽性表達率明顯高于宮頸腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結轉移宮頸癌組織（P＜0.05）。見表 3。

表3 FR-、TopoⅡ蛋白表達與宮頸癌臨床病理關系n（%）

2.3 FR-、TopoⅡ蛋白表達相關性 將宮頸癌組織FR-與TopoⅡ蛋白表達進行相關性分析，結果顯示FR-與 TopoⅡ蛋白表達呈正相關 （rs=0.392，P＜0.05），見表 4。

表4 FR-、TopoⅡ蛋白表達相關性

3 討論

宮頸癌臨床發生率僅次于乳腺癌,屬于臨床常見惡性腫瘤,其中我國宮頸癌的發生率約占全球宮頸癌總病例的30%左右[6]。宮頸癌的發生、發展受到多種基因的調控，研究[7]發現多種存在致癌可能性的環境共同作用可誘發抑癌基因和原癌基因的功能障礙，進而導致正常細胞出現惡性病變。現臨床關于宮頸癌的發病機制尚不完全明確,普遍認為有多因素參與,其發生、發展涉及較多因素，均可能促進了疾病的發生、發展[8,9]。

宮頸癌的發生、發展屬于復雜的過程，相關研究發現葉酸受體與宮頸癌的發生、發展可能存在重要關系，其中 FR-α、FR-β 及 FR-γ 均是葉酸受體的主要類型。早期研究[10]發現FR-α 在卵巢癌的早期診斷過程中具有較高的靈敏度和特異性,但新階段與FR-α 與宮頸癌的相關性研究資料較為缺乏。文獻[11,12]提示TopoⅡ能夠評估宮頸癌患者預后，進而指導治療方案的制定并在疾病的發生、發展中具有重要作用。本研究發現宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織和正常宮頸組織。該結果提示FR-、TopoⅡ蛋白具有成為診斷宮頸癌重要指標的潛力。TopoⅡ主要位于正常細胞的S、G、M 期，可在 G2/M 期達至峰值，進而參與細胞的分裂過程,屬于臨床細胞分裂的重要特異性指標[13]。故而，宮頸癌組織的TopoⅡ陽性表達要明顯高于癌旁組織和正常宮頸組織。

FR-、TopoⅡ蛋白表達與宮頸癌臨床病理關系研究結果顯示宮頸鱗狀細胞癌、TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴結轉移宮頸癌組織FR-陽性表達率明顯高于宮頸腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結轉移宮頸癌組織； TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴結轉移宮頸癌組織TopoⅡ蛋白陽性表達率明顯高于宮頸腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結轉移宮頸癌組織。該結果說明宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白可參與宮頸癌疾病進展及轉移侵襲過程。TopoⅡ是機體常見核蛋白，在DNA 修復、復制及轉錄等過程均具有重要作用,還能在一定程度上調節核酸結構變化，進而維持機體的生命系統運轉。因而，為提高宮頸癌的治療效果，需要及時完善宮頸癌組織FR-與TopoⅡ蛋白等因子的檢查,指導術后恢復治療；通過對宮頸癌組織FR-與TopoⅡ蛋白的檢查能夠動態了解患者疾病發展,加強治療的針對性，進而采取及時有效的干預措施，加速患者的恢復。

本研究將宮頸癌組織FR-與TopoⅡ蛋白表達進行相關性分析,結果顯示FR-與TopoⅡ蛋白表達呈正相關。該結果說明宮頸癌組織FR-與TopoⅡ可能存在某種作用機制，在宮頸癌的發生、發展過程中相互調節并發揮作用,但具體機制還有待進一步探討。國外研究[14]發現細胞分化程度越低，TopoⅡ含量越高，其表達水平與基地細胞增生、細胞的異型性均具有密切相關性,在外陰鱗癌及口腔上皮鱗癌中腫瘤細胞的分級均與TopoⅡ正相關,這也與本研究結論一致。相關研究[15,16]發現葉酸與多種藥物（血清白蛋白、辣根過氧化物酶等）的共價偶聯，通過FR-介導進入細胞,證實細胞不僅是通過吸收葉酸到細胞質中發揮作用而是以功能活性的形式參與到細胞蛋白的合成過程中,這也為葉酸受體與癌細胞的作用機制提供了理論基礎。

綜上所述, 宮頸癌組織FR-、TopoⅡ蛋白表達明顯上調,與患者臨床病理有一定關系。