201 例AIDS 初診患者的病毒載量及T 淋巴細胞數量的特征分析

馮長華 ，劉宇晗 ，鄭揚云 ，胡廷婷 ，周顯鳳

（1.南昌市疾病預防控制中心、傳染病預防控制國家重點實驗室研究基地，江西 南昌 330038；2.南昌大學第二附屬醫院檢驗科、江西省檢驗醫學重點實驗室，江西 南昌330006）

艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合征（Acquired immunodeficiency syndrome, AIDS）, 是由人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）感染引起自身免疫功能障礙的嚴重傳染性疾病，多因反復繼發機會性感染而死亡,是目前全球和我國重要的公共衛生問題之一[1]。研究表明，HIV 病毒主要攻擊靶標是免疫系統的CD4+T 淋巴細胞 （簡稱CD4+T 細胞）, 并在細胞內進行復制和傳播，破壞人體免疫系統[2]。艾滋病無法治愈，但可通過及時治療延緩生命，早診斷、早治療是控制艾滋病患者病程進展的重要手段[3]。《中國艾滋病診療指南》（2018 版） 中指出 HIV 核酸定量 （病毒載量）和CD4+T 淋巴細胞計數是判斷疾病進展、臨床用藥、療效和預后的兩項重要指標[4]。因此，探究T 淋巴細胞計數和病毒載量之間相關性, 有利于對AIDS患者的病程進行監控和指導治療。本研究分析了AIDS 患者血樣T 淋巴細胞計數和病毒載量檢測結果。報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 以 2019 年 1 月-2019 年 12 月經南昌市疾病預防控制中心首次確診的未接受抗病毒治療的201 例AIDS 患者作為未治療組，選擇同期210 例接受抗病毒治療的AIDS 患者為治療組和79 例健康的體檢者為健康組。所有的AIDS 患者均符合《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》（WS293-201 9）中AIDS 的診斷標準[5]。健康的體檢者均已經過酶聯免疫吸附試驗篩查，結果為HIV 抗體陰性。在參與者知情同意條件下獲取血液樣本,檢測未治療組T 淋巴細胞數量及HIV-1 病毒載量, 檢測治療組及健康組T 淋巴細胞數量。

1.2 檢測試劑與材料 用于HIV-1 病毒載量檢測的試劑廠家為瑞士Roche 生產, 使用儀器型號為Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan；用于 CD 3+細胞、CD4+T 細胞和CD8+T 細胞計數檢測試劑為美國BD 公司生產, 使用儀器型號為BD FACSCalibur。

1.3 檢測方法 采集研究對象兩管EDTA-K3 抗凝的靜脈全血3.0～5.0ml, 采集后立即顛倒混勻,24h內使用流式細胞儀完成CD3+細胞、CD4+T 細胞和CD8+T 細胞計數。剩下的全血2000r/min 離心15分鐘，分離出血漿，使用逆轉錄熒光定量聚合酶鏈反應試驗檢測HIV-1 病毒載量。所有操作均嚴格遵循《全國艾滋病檢測技術規范》（2015 年修訂版）[6]及各試劑儀器操作說明的規定。

1.4 統計學方法 將HIV-1 病毒載量濃度取對數值轉換成lg (cp) /ml。采用SPSS25.0 對數據進行統計分析。計量資料采用Kolmogorov-Smirnov 檢驗和Levene's 檢驗分別對數據正態性和方差齊性進行檢驗，正態分布數據以表示，偏態分布數據以中位數(四分位數間距)[M (QR) ]表示；方差齊且正態分布的兩兩比較采用兩獨立樣本t 檢驗，方差不齊且正態分布的兩兩比較采用t' 檢驗， 非正態分布數據間比較采用K-W 檢驗，組內倆倆比較采用Mann-Whitney U 檢驗。計數資料以率(%)表示，差異比較用χ2檢驗。采用Spearman 相關分析做相關性分析，P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 三組研究對象 CD3+、CD4+T 和 CD8+T 細胞計數比較 未治療組CD4+T 細胞計數明顯低于治療組和健康對照組，3 組之間的差異均具有統計學意義（P＜0.05）；未治療組 CD8+T 細胞計數高于治療組和健康對照組,CD8+T 細胞計數在未治療組和健康組之間的差異有統計學意義（P＜0.05）；CD3+細胞在三組之間的差異均無統計學意義。見表1。

表1 未治療組與治療組及健康組之間T 淋巴細胞計數比較

2.2 未治療組一般資料分析 本次研究納入201例首次確診的未經治療的AIDS 患者,男性172 例，女性29 例，男女性別比約7：1，不同性別之間的病毒載量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 細胞數差異均無統計學意義(P＞0.05)。患者年齡 18～85 歲,平均年齡48.7±19.2 歲。年齡小于 50 歲患者的病毒載量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 細胞數和大于 50 歲的患者比較，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。見表 2。

表2 未治療組患者病毒載量、CD3+、CD4+T 和CD8+T 細胞水平比較

2.3 未治療組不同CD4+T 細胞計數患者的病毒載量、CD3+及 CD8+T 細胞數比較 以 350(個/μl) CD 4+T 細胞數為界限將未治療患者分為兩組, 不同CD4+T 細胞組患者的病毒載量、CD3+及CD8+T 細胞比較,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。CD4+T 細胞＜350(個/μl)患者的病毒載量水平高于 CD4+T 細胞≥350(個/μl)患者水平,CD3+和 CD8+T 細胞數均低于 CD4+T 細胞≥350(個/μl)患者水平。見表 3。

2.4 未治療組不同指標的相關性分析 Spearmen相關分析顯示, 未治療的AIDS 患者年齡、 病毒載量、CD3+、CD4+T 和 CD8+T 細胞數幾個指標之間存在相關性。年齡與病毒載量呈正相關，相關系數為 0.41。CD3+、CD4+T、CD8+T 細胞均與年齡、病毒載量呈負相關, CD4+T 細胞與CD3+、CD8+T 細胞呈正相關。見表4 。

3 討論

目前我國的艾滋病感染者仍處于不斷增加的趨勢，艾滋病疫情形勢不容樂觀[7,8]。艾滋病是唯一一個終身攜帶病毒且具有傳染性的慢性疾病，感染后不易被發現，潛伏期較長，對人體存在不可逆的持續性損害[9]。T 淋巴細胞是人體重要的免疫細胞，主要分為CD4+T 淋巴細胞亞群和CD8+T 淋巴細胞亞群，分別調節人體的體液免疫和細胞免疫，對維持機體免疫平衡、清除外源性病原體、保護自身細胞具有重要作用[10]。HIV 主要借助其表面糖蛋白gp120 與CD4+T 細胞受體和/或共受體結合進入胞內并整合在宿主細胞染色體DNA 中，進而破壞免疫系統[11]。因此CD4+T 細胞計數能夠直接反映人體免疫功能,是提示艾滋病患者免疫功能損害狀況最明確的指標。當艾滋病患者的CD4+T 細胞出現進行性或不規則性下降時,提示其免疫系統受到了嚴重損害,進而可能會并發多種機會性感染或腫瘤等相關癥狀, 所以CD4+T 細胞計數在監測艾滋病病程發展過程中具有重要作用[12]。

表3 未治療組不同CD4+T 細胞計數患者的病毒載量、CD3+及CD8+T 細胞數比較

表4 未治療組不同指標間的相關系數r 值和P 值

艾滋病的診斷依賴于抗體檢測,HIV 感染后，一般需要經過1-3 個月的窗口期甚至更長時間才能產生抗體， 在窗口期無法查到抗體或者表現為抗體不確定[13]。個別晚期AIDS 患者體內病毒大量復制導致免疫系統崩潰,造成抗體種類嚴重丟失而使抗體檢測結果不確定[4]。因此許多樣本經抗體檢測時不能判斷患者是否感染。臨床可通過檢測病毒載量來解決抗體不確定問題。病毒載量是發現早期HIV 窗口期感染者、觀察患者病情進展、抗病毒藥物治療效果及觀察藥物耐藥性的重要參考指標。HIV 病毒載量較高時，提示患者體內的病毒可對免疫系統產生較強的破壞性,且患者處于強傳染狀態，同時有研究證明，血液中檢測不到病毒載量時，患者在性行為中不具有傳染性[14]。因此，檢測患者體內的病毒載量,不僅有助于發現抗體不確定患者避免發生診斷延誤甚至漏診，做好提前干預。同時也有助于及時準確的對患者進行有效的抗病毒治療，延長患者生命。

未治療組的CD4+T 細胞數低于治療組和健康人群, 未治療組和已治療組CD8+T 細胞數均比健康人群高,上述比較差異均具有統計學意義(P＜0.05),提示機體在感染病毒后,未經治療的患者CD4+T細胞較治療患者和健康人破壞嚴重,免疫系統被破壞的同時也會被異常激活, 增殖的CD8+T 細胞可被激活分泌抑制因子,在一定程度上減弱或抑制免疫應答，導致機體免疫監視功能下降[15]。本研究的未經治療的AIDS 患者年齡分布在18～86 歲，幾乎涉及每個年齡段，表明艾滋病的感染人群范圍廣，每個年齡段的人均普遍易感， 這與黃慧的報道相符合[16]。本研究有97 例患者年齡大于50 歲，所占比例為48.3%，表明老年人已成為艾滋病感染的重點人群[17]。年齡大于50 歲患者較50 歲以下患者的病毒載量水平高，而CD4+T 細胞數低，說明年齡越大，病毒復制水平越高，患者的免疫狀況越差,體內的免疫功能不足以抵抗病毒的侵犯， 形成惡性循環，產生一定的級聯效應。近年來,國家提倡“發現即治療”醫治方案，建議 CD4+T 細胞數≤350 個/μl即可對艾滋病感染者或患者進行規范早期的抗病毒治療[18]。本研究中有 148 例患者 CD4+T 淋巴細胞計數＜350 個/μl,所占比例為73.6%，可考慮對該批人群進行抗病毒治療及定期監測淋巴細胞計數和病毒載量, 以期改善人體免疫力降低機會性感染，提高患者的生存質量。本研究也發現，AIDS 患者的CD4+T 細胞計數與病毒載量、年齡呈負相關，這與嚴亞軍等人的研究結果一致[19]，在沒有條件檢測病毒載量時,可依靠檢測CD 3+、CD4+T 和CD8+T 細胞計數及患者的臨床癥狀來推斷HIV 病毒在患者體內的復制情況。

綜上所述,未經治療的艾滋病患者免疫系統受損嚴重，且隨著年齡的增長，CD4+T 細胞水平逐漸下降，病毒載量水平逐漸升高。同時,也表明HIV-1病毒載量及T 淋巴細胞檢測在艾滋病臨床診斷和病程監測中具有重要的指導作用。