頂空固相微萃取-氣相色譜法測定馬鈴薯中香芹酮含量

□ 黃 錚 甘肅省農(nóng)業(yè)科學院畜草與綠色農(nóng)業(yè)研究所 甘肅省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術研究所葛 霞 甘肅省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工研究所

馬鈴薯營養(yǎng)豐富，是世界四大主食作物之一[1]。采后馬鈴薯的呼吸作用和休眠期的打破會導致馬鈴薯發(fā)芽以及塊莖營養(yǎng)價值損失[2，3]。貯藏期間常使用馬鈴薯抑芽劑防止馬鈴薯塊莖發(fā)芽、腐爛，延長休眠期[4，5]。常用的抑芽劑有效成分為氯苯胺靈（CIPC），然而歐盟委員會于2019 年6 月18 日發(fā)布的委員會實施條例，不再批準使用CIPC。除此之外，乙烯和植物提取物香芹酮等也被發(fā)現(xiàn)對生產(chǎn)中馬鈴薯具有較好的抑芽作用。

目前國內(nèi)外對馬鈴薯中香芹酮殘留的安全性評估研究和報道較少，尚缺少馬鈴薯中香芹酮殘留分析的標準方法，有關檢測方法也未見報道。本文采用氣相色譜法，利用頂空固相微萃取技術，建立了馬鈴薯中香芹酮含量的分析測試方法。此方法快速、高效，可用于馬鈴薯中香芹酮殘留的檢測，為實際生產(chǎn)提供有效的檢測手段。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

Aglient6890N 氣相色譜儀（美國安捷倫公司）；HS—SPME 萃取器（二乙烯基苯、羧基、聚二甲基硅氧烷）（50/30 μm）（美國Surpelco 公司）；MS3basic渦旋混勻器（德國IKA公司）；ME204E電子天平（瑞士梅特勒公司）。

香芹酮標準品（GC 純度≥98%，上海源葉生物科技有限公司）；乙醇（色譜純，美國Sigma—Aldrich 公司）；氯化鈉（分析純，廣州化學試劑廠）。

馬鈴薯，品種為新大坪，采收于甘肅省定西市。

1.2 實驗方法

1.2.1 標準溶液的配制

準確稱取香芹酮標準品0.05 g（精確至0.001 g）于10 mL 容量瓶中，使用無水乙醇將標準品溶解并定容，配制成濃度為500 mg/L 的儲備液，于4 ℃冰箱中保存。分別吸取0.00、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 mL 與1.0 mL 儲備液于10 mL 比色管中，加乙醇稀釋至刻度，配制成濃度為0、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 mg/L 和50.0 mg/L的標準溶液。

1.2.2 樣品前處理

馬鈴薯樣品切塊加液氮粉碎，準確稱量0.5 g 樣品，裝入磁力攪拌器的頂空瓶中，加入5 mL 無水乙醇與1.5 g NaCl在45 ℃下恒溫攪拌30 min 后，用活化好的固相微萃取器萃取30 min，氣相色譜（GC）進樣口解吸溫度250 ℃，解吸時間10 min，進行GC 分析[6］。

1.2.3 氣相色譜條件

毛 細 管 柱：DB—Wax 柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；頂空進樣器條件：頂空瓶溫度：85 ℃，定量環(huán)：95 ℃，傳輸線溫度：115 ℃。頂空色譜（HS—GC）條件：設置進樣口溫度250 ℃，檢測器溫度250 ℃，柱溫箱溫度60 ℃，分流比20 ∶1。

2 結果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

分別比較了2 種升溫程序?qū)ο闱弁蛛x的影響。程序升溫（A）的條件為：初始溫度60 ℃（保持3 min），以10 ℃/min 升溫至200 ℃（保持0 min）， 再 以20 ℃/min 升 溫 至250 ℃（保持2 min）；程序升溫（B）的條件設定為：初始溫度80 ℃（保持1 min），以20 ℃/min 升溫至200 ℃（保持2 min），再以30 ℃/min 的速度升溫至250 ℃（保持2 min）。實驗結果見圖1，從圖中可以看出程序升溫（A）分離效果較好，目標物響應值更高，所以本試驗選擇的較優(yōu)色譜條件為升溫程序（A）。

圖1 兩種程序升溫A 和B 對目標物分離效果的影響

2.2 線性試驗

將配置好的0、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 mg/L 與50.0 mg/L 的標準溶液，在2.1 選出的較優(yōu)色譜條件下進行測定。以香芹酮的峰面積對其質(zhì)量濃度繪制標準曲線，其回歸方程為：Y=5 984.19X+907.06，相關系數(shù)R2=0.999 8。按3 倍信噪比（S/N）計算出方法檢出限為0.12 mg/kg，按10 倍信噪比（S/N）計算定量限為0.5 mg/kg。

2.3 回收率及精密度實驗

取未使用抑芽劑的馬鈴薯樣品，分別添加0.5、1.0、2.0、3.0 mg/kg和5.0 mg/kg 香芹酮標準品溶液進行檢測，實驗結果見表1，5 個添加水平的回收率在88.8%～95.3%，RSD 在0.76%～1.15%，方法準確度和精密度均達到檢測要求。

表1 加標回收率（n=6）

2.4 實際樣品測定

參照葛霞的方法[7]，使用0.3 mg/kg的香芹酮處理馬鈴薯并進行貯藏，分別測定儲藏7 天、14 天、21 天、28天的樣品，得出含量分別為3.96、2.07、1.64、0.96 μg/g，結果表明經(jīng)香芹酮處理的馬鈴薯薯塊中香芹酮的含量隨貯藏時間的增加逐漸降低，說明香芹酮因揮發(fā)性強而不易殘留在馬鈴薯中，同時又具有較好的抑芽作用，因此可以取代氯苯胺靈作為新型馬鈴薯抑芽劑使用。

3 結果與討論

將頂空固相微萃取技術與氣相色譜檢測技術相結合，建立了馬鈴薯薯塊中香芹酮的檢測方法，并成功應用于實際樣品的測定。該方法快速、高效，操作簡便、結果可靠，適用于馬鈴薯中香芹酮殘留的檢測，具有實際應用價值。