整合素αγβ3在IgA腎病腎組織中的表達及其意義

賈妮亞，王彩麗，劉 丹，孫笑丁

（內蒙古科技大學包頭醫學院第一附屬醫院，內蒙古 包頭 014010）

本文研究了整合素αγβ3在IgA腎病腎組織中的表達與臨床意義，現報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

摘選2017年1月～2018年1月我院接手術治療的腎腫瘤患者15例作為A組，取同期我院接收院的IgA腎病患者15例作為B組，A組：男9例，女6例；年齡：24～64歲，平均（45.12±3.89）歲，病程：2個月～2年，平均（1.42±0.37）年；B組：男10例，女5例；年齡：25～65歲，平均（45.22±3.74）歲；IgA腎病病程：3個月～3年，平均（1.38±0.45）年；病情分級：4例Ⅰ級，4例Ⅱ級，5例Ⅲ級，2例Ⅳ級；此研究已獲我院倫理委員會同意，且2組患者一般資料對比顯示，差異無統計學意義（P＞0.05），可作對比。

入組標準：活檢前無其他藥物治療；石蠟切片顯示出每1張當中的非硬化腎小球個數均＞5個；患者及（或）家屬均同意參與研究。

排標標準：非IgA腎病；肝硬化性腎小球硬化者。

1.2 方法

儀器材料：腎活檢針、石蠟切片機、光學顯微鏡、病理圖像分析儀、電熱恒溫培養箱、臺式干燥箱、羊抗人αγβ3多克隆抗體、3%的H2O2去離子水、聚合物增強劑、辣根酶標記羊抗兔/小鼠IgG多聚體、EDTA組織抗原修復液、檸檬酸鹽緩沖液、APES防脫片劑，DAB顯色劑以及中性樹膠。先采用二甲苯脫蠟，以梯度乙醇進行脫水直到發生水化，再對αγβ3開展抗原修復處理，具體步驟為：

（1）選擇EDTA作為抗原修復液，劑量為10 mL，取490 mL蒸餾水混合為500 mL的工作液，先在壓力鍋中裝入清水1500 mL，將其置入，加熱煮沸，再進行脫蠟直到水化之后的組織切片，放于不銹鋼切片架上方，入到煮沸后的緩沖液風，將鍋蓋蓋住，再次加熱，直至噴氣，開始計時，1.5 min后停止加熱，冷卻到室溫，將玻片取出。

（2）取蒸餾水行10 min沖洗。

（3）以PBS緩沖液重復3次沖洗，5 min/次。

（4）取3%的過氧化氫滴入，于室溫下濕盒內孵育10 min。

（5）以PBS緩沖行3次沖洗，5 min/次。

（6）滴入羊抗人αγβ3多克隆抗體，以1：100作為比例，在同1張切片內，使用PBS進行一抗代替，然后做陰性對照，置于4℃的濕盒當中一夜。

（7）以PBS緩沖行3次沖洗，5 min/次。

（8）加入聚合物增強劑，于37℃濕盒中孵育20 min。

（9）以PBS緩沖行3次沖洗，5 min/次。

（10）滴入辣根酶標記羊抗兔/小鼠IgG 聚體工作液，于℃濕盒中孵育20 min。

（11）以PBS緩沖行3次沖洗，5 min/次。

（12）滴入DAB顯色劑，顯色2 min，取自來水進行沖洗，使得染色被終止，再采用蘇木素實施復染，持續3 min，再次進行沖洗。

（13）采用鹽酸乙醇（1%）與氨水（1%）實施返藍，時間為20 s，然后使用自水全面沖洗

（14）取中性質的樹膠封片，在顯微鏡觀察下分析結果。

1.3 指標觀察

檢測A、B兩組患者以及B組不同疾病分級患者的整合素αγβ3的陽性表達情況。

1.4 統計學方法

以SPSS 22.0軟件分析所得數據，計量資料代表式：（±s），以t作檢驗；計數數據代表式：[n（%）]代表，以x2作檢驗，若P＜0.05，則示差異有意義。

2 結 果

B組患者腎小球內的整合素αγβ3陽性表達與A組相比明顯更高，差異有統計學意義（P＜0.05）；

B組內，Ⅰ-Ⅲ級患者其αγβ3陽性表達呈現為Ⅲ級＞Ⅰ級＞Ⅱ級＞Ⅳ級，Ⅳ級表達與Ⅲ級相比明顯下降，差異有統計學意義（P＜0.05），且Ⅳ級病變患者的αγβ3表達率則明顯低于其他組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 整合素αγβ3在IgA腎病腎組織中的表達情況分析（±s）

表1 整合素αγβ3在IgA腎病腎組織中的表達情況分析（±s）

腎間質αγβ3陽性表達/%組別 腎小球內αγβ3陽性表達/%A組（n=15） 10.21±7.49 10.85±4.61Ⅰ級（n=4） 16.18±1.98 11.11±1.21Ⅱ級（n=4） 19.58±0.99 11.49±0.79Ⅲ級（n=5） 28.35±1.99 12.56±0.85Ⅳ級（n=2） 17.72±2.17 7.79±2.44

3 討 論

IgA腎病在臨床中非常常見，雖然目前臨床關于該病具體的發病機制還未給出明確答案，但諸多研究顯示該病的發生與細胞外基質異常積聚相關。整合素主要是指α與β亞基以非共價鍵連接形成的一種異二聚體，其可以對細胞與細胞、細胞與基質相互之間的作用進行介導，使得細胞發生增殖、遷徙，同時對其分化與凋亡也有誘導作用，此外，對細胞的外基質沉積現象也有介導作用[3]。

在健康人體的腎組織當中，整合素αγβ3主要于腎小球系膜細胞、上皮細胞以及內皮細胞表達，但在狼瘡性腎炎腎組織也發現有αγβ3上升現象，有研究在腎小球內部的間質疤痕還有受損的腎小管當中都發現了αγ增強表達現象，而間質和小管αγ異常與組織發生慢性損傷存在一定關系，就明慢性腎臟疾病發展中中有整合素有一定作用[5]。本次研究顯示，B組患者腎組織中的整合素αγβ3陽性表達與A組相比明顯更高，差異有統計學意義（P＜0.05）；而在B組患者中，Ⅲ級病變患者的腎小球內整合素αγβ3陽性表達高于Ⅰ級、Ⅱ級以及Ⅳ級，Ⅳ級表達與Ⅲ級相比明顯下降，但與Ⅰ級、Ⅱ級病變則無明顯差異；關于腎病的腎間質表達，Ⅰ-Ⅲ級病變患者的整合素αγβ3表達率與A組無明顯差異，差異無統計學意義（P＞0.05），但Ⅳ級病變患者的αγβ3表達率則明顯低于其他組，差異有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，整合素αγβ3于IgA腎病患者的腎組織確實存在異常表達現象，αγβ3表達越強表明患者的腎組織病變越重，預后則越差，提示整合素αγβ3在IgA腎病發展有著復雜且重要的作用，故臨床可以通過整合素αγβ3表達強度對IgA腎病患者的預后效果進行預測，若αγβ3高強度表達則提示可能預后不良。