人纖維蛋白原裝量差異試驗的摸索

邵逸文 孫琪英 曹大偉 趙景輝 趙明芬 王彬

近年來隨著科技的發(fā)展，藥品生產(chǎn)過程中對于裝量的差異越來越小，但是為了使藥品的裝量保持更好的一致性，保證藥品有效成分的適量攝入，在藥品生產(chǎn)過程中依然需要對其裝量進行一定的控制與檢查[1]。由于目前市面上藥品種類繁多，藥典針對不同類型的藥品所提出的裝量差異檢查方法均有所不同，2015 年版《中國藥典》中提出針對不同容器，用適宜的溶劑清洗干凈。雖然藥典針對不同種類藥品提出了不同的裝量差異檢查方法以及計算方法，但是對于同一類型的藥品來說，方法過于單一，存在大量對裝量差異檢查方法結(jié)果的影響因素[2]。面對同一類型藥品特殊情況，實驗人員需要對試驗過程進行改進。例如針對維生素E膠囊、復(fù)方三維亞油酸膠丸裝量差異實驗中不易沖洗等問題，楊天鳴等[3]使用了加壓沖洗法解決了不易沖洗的問題。纖維蛋白原是由肝細胞合成的一種結(jié)合蛋白質(zhì)[4]，易溶于水[5]，由三對多肽鏈組成[6]。是組成人血漿蛋白的重要成分[7]。纖維蛋白原對人體凝血系統(tǒng)來說十分重要[8]，現(xiàn)已運用于各種疾病治療之中[9-11]。雖然纖維蛋白原易溶于水，但是在其溶解過程中易粘于藥品模制瓶瓶壁，不易清理，使裝量差異實驗產(chǎn)生誤差。氫氧化鈉溶液作為蛋白質(zhì)的溶解液廣泛存在于各個領(lǐng)域[12-15]，氫氧化鈉溶液可以破壞掉蛋白質(zhì)中的氫鍵，使蛋白質(zhì)水解[16]。即使蛋白質(zhì)發(fā)生了變性，氫氧化鈉溶液也可以使其溶解[17]。而對于附著于物體表面的蛋白質(zhì)，氫氧化鈉溶液作為清洗液也有一定的應(yīng)用[18]。由于裝量差異是藥品質(zhì)量檢驗中不可缺少的一項，如何快速、準確的進行實驗是藥企質(zhì)量控制部門不斷探索的目標。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗所用藥品（人纖維蛋白原規(guī)格：0.5 g/瓶）為凍干類藥品，應(yīng)于2℃～8℃保存，實驗前置于25℃處平衡1 小時，平衡至25℃后利用注射器針頭破除真空，備用。

1.1.1 不同NaOH 濃度對人纖維蛋白原的清除能力 取18 瓶經(jīng)上步處理后的人纖維蛋白原，平均分為6 組，每組三瓶，將其編號為實驗組A、實驗組B、實驗組C、實驗組D、實驗組E、實驗組F。設(shè)置0.1 mol/L、0.5 mol/L、1 mol/L、5 mol/L、10 mol/L、25 mol/L 共6 個濃度梯度的氫氧化鈉溶液作為清洗液，分別用不同濃度的清洗液清洗不同實驗組的藥品容器。清洗時每瓶取20 mL 清洗液，分三次進行清洗，每次震蕩30 s，清洗后用純化水進行沖洗，將清洗液沖洗干凈后的模制瓶置于陰涼干燥處干燥處理。觀察干燥后的模制瓶瓶壁是否殘留可見異物。

1.1.2 NaOH 溶液清洗對裝量差異的影響 取10 瓶經(jīng)破真空處理后的人纖維蛋白原平均分為兩組，每組5 瓶，將其編號為實驗組a、實驗組b，將每一瓶供試品稱重備用。取上步實驗中效果最佳濃度的氫氧化鈉清洗液對實驗組a 進行清潔處理，清洗時每瓶取20 mL 清洗液，分三次進行清洗，每次震蕩30 s，清洗后用純化水進行沖洗，置于烘箱內(nèi)70℃烘干2 小時，稱重。實驗組b 用純化水進行沖洗，沖洗后進行烘干，烘干至恒重后稱重置于烘箱內(nèi)70℃烘干2 小時，稱重。

對比觀察兩組干燥后的模制瓶瓶壁是否殘留可見異物，比較分析兩組實驗組的裝量差異結(jié)果與試驗時間。

2 結(jié)果

由實驗結(jié)果（表1）可知，當氫氧化鈉溶液濃度低于5 mol/L 時，模制瓶表面會有藥品殘留，影響裝量差異檢查實驗的結(jié)果判定。氫氧化鈉溶液濃度高于5 mol/L 時，模制瓶表面無明顯殘留物。實驗組D、E、F 三組瓶壁平行樣間均無可見異物，所以 5 mol/L 以上的氫氧化鈉溶液對于人纖維蛋白原的清除能力差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。選擇使用氫氧化鈉溶液量最少的5 mol/L 作為清洗液進行下一步實驗。

由表2 可以看出，對同一批藥品來說，裝量差異準確度實驗組a ＞實驗組b。實驗組a 最大裝量差異在0.03%，實驗組b 的最大裝量差異為0.3%，裝量差異準確度提高了10 倍。而實驗過程中用于沖洗的時間則是實驗組a ＜實驗組b，由平均17 min 減少至1.3 min。

3 討論

裝量差異作為對藥品生產(chǎn)過程中裝量階段的檢驗指標，可以保證藥品功效成分的適量攝入，避免因藥品攝入量不足導(dǎo)致的療效不佳和藥品攝入量過量致使對人體有較大的副作用，對藥品生產(chǎn)以及藥品療效來說十分重要，是藥品進入市場前重要的檢測指標[19]。而目前來說，裝量差異的檢查仍存在問題，針對不同特性的藥品[20]，裝量差異檢查法仍需要不斷的改進。人纖維蛋白質(zhì)主要由一種糖蛋白構(gòu)成[4]，由于其結(jié)構(gòu)的特殊性，在溶解過程中遇到較強震蕩時會形成一種膠狀物，溶解度下降，產(chǎn)生大量泡沫。并且會黏在瓶壁，不易清理。這導(dǎo)致了人纖維蛋白原在日常檢測過程中，效率低下。如果在人纖維蛋白原溶解過程中提高溫度，會起到加速溶解的效果，但是如果溫度過低，加速效果不明顯。而人纖維蛋白原的熱穩(wěn)定性較差，若加熱溫度過高，超過56℃時，會產(chǎn)生不可逆凝固[21]，無法清理，從而影響裝量差異實驗結(jié)果。對于人纖維蛋白原的清理，目前常用的辦法是酸法、堿法和酶法，酶法雖然效果最好，但是由于成本較高，操作復(fù)雜[22]，不適合日常檢測工作。介于此點，利用氫氧化鈉溶液可以破壞蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)，使得蛋白質(zhì)更容易溶于水中的原理。將氫氧化鈉溶液作為清洗劑對人纖維蛋白原進行清洗。本實驗發(fā)現(xiàn)當使用濃度大于5 mol/L 的氫氧化鈉溶液對模制瓶進行清洗時，模制瓶表面無可見異物，且裝量差異結(jié)果與常規(guī)檢測方法相比，在利用氫氧化鈉溶液進行清洗時，整個過程在2 分鐘之內(nèi)可以完成，對于檢驗工作來說，更能提高檢驗工作效率。更重要的是，利用氫氧化鈉清洗后的模制瓶最大裝量差異為0.03%，常規(guī)方法的最大裝量差異為0.3%，裝量差異準確度提高了10 倍，使得實驗結(jié)果更加準確，證明藥品的裝量保持較好的一致性，可以保證藥品有效成分能夠被患者適量攝入。

表1 不同濃度氫氧化鈉溶液對人纖維蛋白原的清洗能力

表2 不同處理方式對人纖維蛋白原裝量差異的影響