PCR檢驗在肺結核早期診斷中的應用價值

楊寶強

扶風縣中醫醫院檢驗科,陜西 寶雞 722200

肺結核是因結核分枝桿菌引起的肺部感染性疾病，以發熱、咳痰、咯血、胸痛等表現為主，具有高度的傳染性[1]。肺結核是目前全球性關注的公共衛生問題，有數據統計，全球每年因肺結核死亡例數將近300萬，遠超過艾滋病及瘧疾[2]。肺結核患者缺乏臨床表現，影像學多樣，容易與其他肺部疾病相混淆，存在較高的漏診率及誤診率，錯過最佳治療時機，危及患者生命安全。PCR技術是在上世紀90年代逐漸應用于結核病臨床診斷，用于放大擴增特定的DNA片段分子生物學技術，作為生物體外特殊DNA復制，以此提高肺結核診斷準確性。本研究特對肺結核患者采取PCR技術檢查，并與痰涂片進行比較，報道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取符合本院入組條件的疑似為肺結核患者130例，來源于我院2017年6月至2019年6月期間收治的肺部疾病患者；其中男性患者72例，女性患者58例；年齡30～68歲，平均年齡(46.91±8.24)歲。患者及家屬對研究具體內容知情，并自愿簽署研究同意書。

1.2診斷方法

1.2.1痰涂片檢驗：痰涂片抗酸染色鏡檢，分三次收集晨起深度咳嗽痰液，取黏痰涂抹在厚片進行抗酸染色試驗，抗酸染液(杭州天和微生物試劑有限公司提供)。抗酸染色，鹽酸乙醇分色，堿性美蘭復染，結核分枝桿菌呈紅色，而其他細菌或背景物質屬于藍色。OLYMPUS-BX41型光學顯微鏡(日本OLYMPUS公司生產)，連續觀察不同的300個視野，陰性：視野內未發現抗酸桿菌；陽性：發現抗酸桿菌。

1.2.2PCR技術檢驗：收集患者晨起深咳后第一口痰液0.5mL，置入濃度為1mmol/L的氫氧化鈉溶液5μL內，均勻混合，放置37℃環境內，靜置40min。離心處理5min，10000r/min，對混合液進行離心，去除上清液，生理鹽水洗脫液進行洗脫。抽取胸水、血清各1mL，離心處理5min，10000r/min，再添加50μL裂解液內，行沸水內10min，離心處理5min，10000r/min，將15μL反應液添加0.2μL Tap酶，混合均勻，再添加20μL石蠟油封頂，取5μL上清液進行添加，制作成TB-DNA模板。PCR擴增循環，共反復擴增35次，隨后取20mLPCR擴增液，行電泳技術檢驗。陽性：在紫外線下，PCR技術檢測存在橙黃色熒光帶160dp。

1.3觀察指標 (1)對比PCR技術與痰涂片對肺結核檢出率；(2)對比PCR技術與痰涂片檢驗敏感性、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值。

1.4統計學方法 運用SPSS23.0統計學軟件包處理研究數據。計數數據以百分比率(%)表示，采取2檢驗；P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1對比PCR技術與痰涂片對肺結核檢出率 經臨床表現、實驗室指標、影像學技術、細菌學檢驗等多種技術綜合診斷，102例患者確診為肺結核；PCR技術檢出率為73.85%(96/130)，痰涂片檢出率46.92%(61/130)，差異有統計學意義(2=18.586，P=0.000)。

2.2對比PCR技術與痰涂片檢驗敏感性、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值 PCR技術檢驗敏感性、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值高于痰涂片(P<0.05)，見表1。

表1 對比PCR技術與痰涂片檢驗敏感性、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值

3 討 論

臨床診斷肺結核時，其檢驗病理性多依賴于鏡下觀察典型結核結節，但以滲出為主的病變及典型結核結節，診斷難度較高。肺結核實驗室診斷傳統技術為痰培養，痰培養檢驗技術操作簡單，可在基層醫院快速開展，但難以區分結核分枝桿菌、非結核分枝桿菌、死菌及活菌；同時痰培養檢驗對實驗室環境有較高要求，生物安全防范要求較為嚴格，培養周期耗費的時間長，臨床采用快速培養儀進行診斷，也難以滿足臨床診斷需求，漏診率及誤診率較高[3]。血清學試驗檢驗肺結核時，多是分離結核分枝桿菌特異性膜蛋白抗原，分離并發現血清內的結核分枝桿菌抗體，靈敏度較高，但其報道的假陽性率較高。尤其是患者多為菌陰肺結核，臨床表現的復雜多樣，影像學改變缺乏特異性，造成肺結核檢出率較低。

PCR技術的應用，給肺結核診斷帶來新的希望。分子生物學技術作為診斷肺結核的新型技術，PCR技術作為代表性檢驗方法，結合各種分子標記、基因擴增等多項技術以及堿基互補配對原理，可顯著提高PCR技術診斷特異性；同時利用基因擴增技術，不斷放大目標核酸片段，能夠提高PCR技術檢驗的靈敏度[4-5]。本組研究中，PCR技術對肺結核檢出率73.85%高于痰涂片肺結核檢出率46.92，檢驗敏感性、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值均高于痰涂片(P<0.05)。研究發現，肺結核患者采用PCR技術檢查，與痰涂片相比，具有較高的肺結核檢出率，更適用于肺結核早期診斷。PCR技術檢查肺結核時，且能反映患者臨床治療過程中結核分枝桿菌數量變化，可作為評估肺結核治療效果的主要手段。但PCR技術無法區別死菌與活菌，對治愈肺結核患者肺內殘留結核桿菌，PCR技術檢驗仍存在陽性率，因此臨床檢驗時需結合其他技術進行判斷。

綜上所述，在肺結核患者早期診斷中，采取PCR檢驗，具有較高的檢測準確性，靈敏度、特異度較高，操作簡單、快速準確，值得臨床推廣應用。