胃癌患者外周血miR-93和miR-185的表達水平及意義

周穎禎 張 皓

在中國，胃癌具有較高的發病率和病死率，屬于常見的消化道惡性腫瘤，由于進展期胃癌具有較高的轉移率和較快的增殖速度，患者確診時多已進入晚期，5年生存率為20%～30%[1]。現階段臨床上主要通過TNM分期、淋巴結轉移和腫瘤組織學類型等臨床病理學特征對胃癌進行術前診斷和預后判斷，但敏感度相對較低。近年來有研究提示，微RNA(miRNA)在消化系統惡性腫瘤的發生、發展、侵襲與轉移過程中發揮重要作用[2]。miR-93和miR-185均是重要的miRNA，已被證實可參與多種腫瘤細胞的發生、發展及轉移過程[3-4]，但目前其在胃癌患者中的相關報道較少。本研究探討了胃癌患者外周血miR-93、miR-185的表達水平及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年3月蘇州市中西醫結合醫院收治的65例胃癌患者作為觀察組，其中男性37例，女性28例；年齡為33～71歲，平均年齡為(51.01±8.82)歲。納入標準：(1)均經病理學確診；(2)初治患者；(3)臨床病理學資料完整；(4)年齡>18歲；(5)患者及家屬知情同意。排除標準：(1)入組前已接受放射、化學治療等抗腫瘤治療；(2)合并有其他系統的惡性腫瘤；(3)合并有免疫系統疾病。另選取同期在本院體檢的65位健康志愿者作為對照組，其中男性35例，女性30例；年齡為35～71歲，平均年齡為(50.02±9.22)歲。觀察組與對照組在年齡、性別方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 實驗方法

采用實時熒光定量PCR(real-time PCR)法檢測兩組外周血miR-93、miR-185的表達水平。觀察組在入院治療前進行第1次采血，經手術及放射、化學治療后，3個月后由相同醫師再進行采血檢驗。采集受試者清晨空腹時的肘部靜脈血10 mL，加入TRIzol試劑1 mL后經氯仿抽提，加入異丙醇沉淀后獲得總RNA，采用反轉錄PCR(RT-PCR)兩步法將RNA反轉錄為cDNA后進行擴增，Poly(A)修飾的miRNA進行反轉錄反應，具體如下：94 ℃ 2 min預變性，之后94 ℃ 20 s，60 ℃ 34 s退火、延伸，循環40次。采用RT-PCR相對定量法，以U6為內參，采用2-△△Ct表示胃癌miR-93、miR-185的相對表達量。△△Ct=(CtmiRNA-CtU6)觀察組-(CtmiRNA-CtU6)對照組。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.3 統計學處理

2 結果

2.1 兩組外周血miR-93、miR-185的表達水平比較

觀察組外周血miR-93、miR-185的相對表達量均顯著高于對照組，差異均具有統計學意義(P均<0.05)。見表2。

表2 兩組外周血miR-93、miR-185的相對表達量比較

2.2 外周血miR-93、miR-185與胃癌患者臨床病理學特征的關系

由表3可知，腫瘤直徑≥5 cm、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的患者，其外周血miR-93、miR-185的相對表達量均顯著高于腫瘤直徑<5 cm、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移者，差異均有統計學意義(P均<0.05)。

表3 胃癌患者外周血miR-93、miR-185的相對表達量與臨床病理學特征的關系

2.3 相關性分析

對治療前觀察組外周血miR-93與miR-185的表達水平進行相關性分析，結果顯示兩者的相對表達量呈正相關(r=0.332，P<0.05)。

2.4 治療前后觀察組外周血miR-93、miR-185的表達水平比較

與治療前相比，治療后觀察組外周血miR-93、miR-185的相對表達量均降低，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 治療前后觀察組外周血miR-93、miR-185的相對表達量比較

3 討論

胃癌是中國常見的消化道惡性腫瘤，發病率和病死率均較高[5]。手術切除是目前臨床治療早期胃癌的主要方法，具有一定的效果，但胃癌患者確診時多處于中、晚期，不利于臨床治療方案的選擇，且預后較差。因此，探究胃癌的早期診斷方法并分析其發生、發展及轉移的相關機制，對提高治療效果、改善患者預后具有重要意義。

miRNA屬于非編碼 RNA，可通過與靶基因3′端的完全或不完全互補結合而抑制目的基因的翻譯及表達[6-7]。有研究發現，miRNA在不同腫瘤中呈現不同的表達譜，可參與個體發育、細胞分化、增殖、代謝、凋亡、遷移和轉移等細胞生物學過程[8]。本研究結果顯示，觀察組外周血miR-93、miR-185水平明顯高于對照組，提示miR-93、miR-185具有成為診斷胃癌的重要指標的潛力。有研究表明，超過半數的miRNA定位于或靠近染色體特定區域，可調控多種重要的促癌基因或抑癌基因，進而促進或抑制腫瘤的發生、發展[9]。

本研究對胃癌患者外周血miR-93、miR-185的表達水平與臨床病理學特征的關系進行分析，結果發現腫瘤直徑≥5 cm、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移的患者，其外周血miR-93、miR-185的相對表達量均顯著高于腫瘤直徑<5 cm、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移者。提示miR-93、miR-185可能參與了胃癌的發生、發展及轉移過程，具有作為評估胃癌疾病進展的重要指標的潛力。有研究發現，miR-93能夠抑制整合素138的表達，促進腫瘤生長和腫瘤血管生成，但具體機制還有待進一步探討[10]。另有研究指出，miR-185能夠調控抑癌基因的表達，影響β-連環蛋白、細胞周期蛋白D1(CyclinD1)和c-Myc等細胞凋亡蛋白的表達，進而通過調節細胞周期，抑制細胞凋亡[11]。由此推測，miR-185可能是通過影響細胞的正常凋亡，參與胃癌的發生、發展及轉移過程。

本研究對觀察組外周血miR-93與miR-185的表達水平進行相關性分析，結果顯示兩者的相對表達量呈正相關，提示胃癌患者外周血miR-93、miR-185具有同向作用，但兩者是否存在機制介導還有待進一步證實。本研究結果顯示，胃癌患者治療后外周血miR-93、miR-185的表達水平均較治療前顯著降低，提示兩者具有較高的敏感度。胃癌的發病機制復雜，幽門螺桿菌感染、環境因素以及遺傳因素等均可誘發胃癌，miRNA因具有高度的時序性、保守性及組織特異度，相較于傳統的腫瘤標志物更具有優勢，使腫瘤檢測能夠兼容特異度和敏感度。近年來對于miRNA的研究發展較快，其對于惡性腫瘤的作用機制和基因功能逐步被闡釋，現已開始探索其在腫瘤等疾病的診斷和治療方面的作用，其有望成為惡性腫瘤的重要檢測指標，并為胃癌等腫瘤的治療提供新的思路。