人乳頭瘤病毒水平與宮頸局部免疫功能對(duì)高危型人乳頭瘤病毒感染宮頸癌患者的影響

黑江榮，解雁飛，張利平

延安大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)科，陜西 延安 716000

宮頸癌是發(fā)生在子宮頸部的惡性腫瘤，作為婦科常見(jiàn)腫瘤其發(fā)病率居第二位，且呈不斷上升趨勢(shì)，逐漸成為威脅女性生命安全的重要疾病。有研究顯示，人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是引發(fā)宮頸癌的重要因素，高危型HPV長(zhǎng)期持續(xù)感染是誘發(fā)和加速宮頸細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要原因。但宮頸癌的發(fā)生是多種因素共同作用的結(jié)果，僅感染HPV常不足以進(jìn)展為宮頸癌，感染高危型HPV后引起的機(jī)體免疫功能改變、宮頸病變轉(zhuǎn)歸和微環(huán)境改變均是促進(jìn)癌變的重要因素。機(jī)體免疫調(diào)控機(jī)制較為復(fù)雜，免疫細(xì)胞與局部微環(huán)境之間相互制約、相互調(diào)節(jié)，當(dāng)機(jī)體免疫功能下降時(shí)，無(wú)法清除體內(nèi)HPV，使機(jī)體長(zhǎng)期處于HPV感染狀態(tài)使得病情逐漸發(fā)展為宮頸癌。因此，對(duì)宮頸癌患者HPV水平與宮頸局部免疫功能的相關(guān)性進(jìn)行研究，可為早期預(yù)防和診斷宮頸癌提供科學(xué)依據(jù)。基于此，本研究探討HPV水平與宮頸局部免疫功能對(duì)高危型HPV感染宮頸癌患者的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年7月至2020年9月于延安大學(xué)附屬醫(yī)院就診的宮頸癌患者、慢性宮頸炎患者和宮頸上皮內(nèi)瘤變患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變患者均經(jīng)病理組織檢查確診；②均經(jīng)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）確診感染HPV；③均有性生活史；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有嚴(yán)重的肝腎損傷和凝血功能異常；②合并其他惡性腫瘤；③納入研究前3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行過(guò)免疫治療或放化療；④妊娠期或哺乳期婦女；⑤有嚴(yán)重內(nèi)外科疾病；⑥納入研究前3天進(jìn)行過(guò)陰道用藥或性生活；⑦有精神疾病或認(rèn)知障礙難以配合研究。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入76例宮頸癌患者（宮頸癌組）、40例慢性宮頸炎患者（慢性宮頸炎組）和40例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者（宮頸上皮內(nèi)瘤變組）。宮頸癌組患者，年齡 25～57歲，平均（42.37±4.96）歲；體重指數(shù)（body mass index，BMI）為（23.37±1.12）kg/m。慢性宮頸炎組患者，年齡25～56歲，平均（41.97±5.05）歲；BMI為（23.41±1.20）kg/m。宮頸上皮內(nèi)瘤變組患者，年齡25～57歲，平均（42.20±4.92）歲；BMI為（23.35±1.23）kg/m。3組患者年齡、BMI比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 檢測(cè)方法

HPV水平檢測(cè)：在所有患者入院后采集樣本，用無(wú)菌擴(kuò)陰器撐開(kāi)患者陰道使宮頸充分暴露后，用棉簽擦拭去宮頸處分泌物，用HPV宮頸刷沿宮頸口順時(shí)針旋轉(zhuǎn)取樣，旋轉(zhuǎn)5圈左右并稍作停留后取出，折斷刷柄保存在專用細(xì)胞保存液取樣管中，蓋好管蓋，樣本保存在4℃左右環(huán)境中待檢。按照試劑盒說(shuō)明書抽提mRNA和反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，利用qPCR檢測(cè)步驟測(cè)定

HPV

-DNA。

宮頸局部免疫功能檢測(cè)：在所有患者入院后采用無(wú)菌刷子采集患者宮頸內(nèi)口分泌物8 ml于無(wú)菌試管中。應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)儀檢測(cè)患者宮頸局部免疫功能指標(biāo)水平，包括 CD4、CD8、CD4/CD8、CD56和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）水平。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較3組患者免疫功能指標(biāo)水平和HPV水平。②比較有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組宮頸癌患者的免疫功能指標(biāo)水平。③比較死亡組和生存組宮頸癌患者免疫功能指標(biāo)水平。④分析HPV水平與各免疫功能指標(biāo)之間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 免疫功能指標(biāo)和HPV水平的比較

宮頸癌組患者HPV、CD8和Treg水平最高，宮頸上皮內(nèi)瘤變組患者次之，慢性宮頸炎組患者最低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）；宮頸癌組患者CD4、CD4/CD8、CD56水平最低，宮頸上皮內(nèi)瘤變組患者次之，慢性宮頸炎組患者最高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）。（表1）

表1 3組患者免疫功能指標(biāo)和HPV水平的比較（±s）

2.2 有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HPV和免疫功能指標(biāo)水平的比較

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者CD4、CD4/CD8、CD56水平均低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，HPV、CD8、Treg水平均高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）。（表2）

表2 有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者HPV和免疫功能指標(biāo)水平的比較（±s）

2.3 死亡患者與生存患者HPV和免疫功能指標(biāo)水平的比較

死亡宮頸癌患者CD4、CD4/CD8、CD56水平均低于生存患者，HPV、CD8和Treg水平均高于生存患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＜0.05）。（表3）

表3 死亡和生存宮頸癌患者HPV和免疫功能指標(biāo)水平的比較（±s）

2.4 HPV與各免疫功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

經(jīng) Pearson 相關(guān)性分析，CD4、CD4/CD8和CD56與HPV水平均呈負(fù)相關(guān)（

r

=-0.48、-0.35、-0.40，

P

＜0.05），CD8、Treg與HPV水平均呈正相關(guān)（

r

=0.45、0.26，

P

＜0.05）。

3 討論

宮頸癌的發(fā)生發(fā)展包括癌前病變、早期浸潤(rùn)癌和浸潤(rùn)癌三個(gè)階段，持續(xù)感染高危型HPV會(huì)引起上皮內(nèi)瘤變，若繼續(xù)感染下去，可能進(jìn)展為宮頸癌，但該過(guò)程時(shí)間較長(zhǎng)，大約需要10年左右。因此在宮頸癌早期進(jìn)行檢測(cè)和預(yù)防，對(duì)于改善預(yù)后具有重要意義。免疫系統(tǒng)在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，機(jī)體感染HPV后，通過(guò)免疫系統(tǒng)可有效清除體內(nèi)HPV，該過(guò)程主要包括T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫和漿細(xì)胞抗體介導(dǎo)的體液免疫。有研究顯示，高危型HPV感染患者病變?cè)缙冢瑱C(jī)體全身免疫功能并未出現(xiàn)明顯改變，但病變局部已存在免疫抑制。可能是因?yàn)镠PV感染不是全身的，不會(huì)通過(guò)血液傳播，因此宮頸局部免疫狀態(tài)與全身免疫狀態(tài)不一致。

本次研究結(jié)果顯示，宮頸癌組患者HPV、CD8和Treg水平最高，宮頸上皮內(nèi)瘤變組患者次之，慢性宮頸炎組患者最低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；宮頸癌組患者CD4、CD4/CD8、CD56水平最低，宮頸上皮內(nèi)瘤變組患者次之，慢性宮頸炎組患者最高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明宮頸癌患者HPV水平呈高表達(dá)，宮頸局部免疫功能明顯降低，且隨著病變程度增加，患者免疫功能呈降低趨勢(shì)。由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在HPV拮抗中具有重要作用。其中CD4和CD8是該環(huán)節(jié)的重要細(xì)胞因子，其中CD4是輔助性T細(xì)胞標(biāo)志，可提高患者免疫力，殺傷腫瘤細(xì)胞，CD8在免疫過(guò)程中起負(fù)調(diào)控作用。CD4和CD8共同調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答，CD4/CD8水平可反映機(jī)體免疫功能水平。CD56是自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞的標(biāo)志物，可抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞。Treg可明顯抑制機(jī)體免疫功能，幫助腫瘤細(xì)胞逃脫免疫系統(tǒng)的監(jiān)視作用。因此其水平較高表明免疫抑制作用較強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞易在機(jī)體聚集，造成持續(xù)感染。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌患者中CD4、CD4/CD8、CD56水平均低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，HPV、CD8、Treg水平均高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者免疫功能較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者更低，HPV感染程度更高，這與武麗蕊等的研究結(jié)果基本一致。死亡宮頸癌患者 CD4、CD4/CD8、CD56水平均低于生存患者，HPV、CD8和Treg水平均高于生存患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明隨著病情進(jìn)展，患者免疫功能呈不斷下降趨勢(shì)，進(jìn)一步促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。由于宮頸局部免疫功能降低導(dǎo)致宮頸抗瘤和促瘤平衡被打破，對(duì)宮頸癌發(fā)展產(chǎn)生促進(jìn)作用。經(jīng) Pearson 相關(guān)性分析，CD4、CD4/CD8和CD56水平與HPV水平呈負(fù)相關(guān)，CD8、Treg與HPV水平呈正相關(guān)。表明患者HPV水平受宮頸局部免疫功能影響，高危型HPV患者免疫功能降低是促進(jìn)宮頸癌發(fā)生的重要原因。綜上所述，高危型HPV感染宮頸癌患者HPV水平呈異常高表達(dá)且患者宮頸局部免疫功能明顯降低，是導(dǎo)致患者持續(xù)感染高危型HPV和加重宮頸病變的重要原因。